(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211156391.7 (22)申请日 2022.09.22 (71)申请人 云南大学 地址 650000 云南省昆明市五华区翠湖北 路2号 (72)发明人 李灿鹏　赵卉　肖淋　郭林江　 (74)专利代理 机构 昆明盛鼎宏图知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 53203 专利代理师 许竞雄 (51)Int.Cl. G01N 33/569(2006.01) G01N 33/58(2006.01) G01N 33/543(2006.01) G01N 33/535(2006.01)B82Y 40/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) (54)发明名称 纳米复合材料及其制备方法、 免疫传感器及 其检测方法 (57)摘要 一种纳米复合材料及其制备方法， 涉及生物 检测技术领域， 其将HRP与CuO2结合， 装载入金属 有机框架材料中， 利用金属有机框架材料提高其 负载能力、 酶活性和稳定性， 再利用ConA与循环 肿瘤细胞的特异性结合， 使其具备分离、 捕获循 环肿瘤细胞的能力。 此外， 本发明实施例还提供 了利用上述纳米复合材料制备而成的免疫传感 器及其检测方法， 其利用抗体偶联的磁性纳米材 料与循环肿瘤细胞的特异性结合， 对循环肿瘤细 胞进行磁选分离， 再与上述纳米复合材料形成夹 心结构， 该夹心结构具有良好的过氧化物酶和漆 酶活性， 能够发生明显的蓝色和红色的颜色反 应， 从而实现对目标物 （CTCs） 进行快速、 明显的 可视化检测。 权利要求书1页 说明书9页 附图5页 CN 115453117 A 2022.12.09 CN 115453117 A 1.一种具有酶活性的纳米复合材料， 其特征在于， 所述纳米复合材料为PdCu@HRP ‑ ConA@CuO2， 其包括PdCu水凝胶， 以及负载于所述PdCu水凝胶上的HRP、 Co nA和CuO2。 2.一种如权利要求1所述的纳米复合材 料的制备 方法， 其特 征在于， 包括： S1. 将所述PdCu水凝胶、 所述HRP和所述Co nA混合， 得到PdCu@HRP ‑ConA； S2. 再将所述P dCu@HRP‑ConA和CuCl2、 PVP混合， 并在碱性条件下进行氧化， 得到所述 PdCu@HRP ‑ConA@CuO2。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 以所述PdCu水凝胶中Pd的摩尔量计， 所述HRP的用量 为10~150 g/mol， 所述Co nA的用量 为10~150 g/mol。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 以所述PdCu水凝胶中Pd的摩尔量计， 所述CuCl2的用量为3~20 g/mmol， 所述PVP的用量 为5~30 g/mmol。 5.根据权利要求4所述的制备方法， 其特征在于， 所述PdCu凝胶是将H2PdCl4和CuCl2与 还原剂混合反应得到的， 所述H2PdCl4和所述CuCl2的摩尔比为1： 0.8~1.2。 6.一种免疫传感器， 其特征在于， 包括与抗体偶联的磁性纳米材料， 以及权利要求1所 述的纳米 复合材料； 所述磁性纳米材料为AuNPs@ZnFe2O4@COF， 所述抗体和所述ConA可特异 性结合循环肿瘤 细胞的不同表位。 7.根据权利要求6所述的免疫传感器， 其特征在于， 所述磁性纳米材料和所述纳米复合 材料的质量比为1： 0.0 5~2。 8.根据权利要求7 所述的免疫传感器， 其特 征在于， 所述 抗体为Anti ‑CD44。 9.根据权利要求6所述的免疫传感器， 其特征在于， 所述抗体与 所述磁性纳米材料的偶 联方法包括： 将所述磁性纳米材料与所述抗体混合， 在摇床中孵育8~20 h， 再清洗掉未结合的所述 抗体； 所述磁性纳米材 料和所述 抗体的质量比1： 0.01~0.5。 10.一种非治疗为目的循环肿瘤细胞的检测方法， 其特征在于， 采用权利要求6~9任一 项所述的免疫传感器， 其包括： 将所述抗体偶联的所述磁性纳米材 料与循环肿瘤 细胞混合， 进行第一孵 育； 在第一次孵育完成后， 通过磁场收集、 洗涤， 随后加入所述纳米复合材料， 进行第二次 孵育； 在第二次孵 育完成后， 加入显色试剂； 其中， 所述显色试剂为TMB/ H2O2或2,4‑DP/4‑AP。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115453117 A 2纳米复合材料及其制备方 法、 免疫传感器及其检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物检测技术领域， 具体而言， 涉及纳 米复合材料及其制备方法、 免疫 传感器及其检测方法。 背景技术 [0002]循环肿瘤细胞 （CTCs） 是从原发肿瘤组织脱落并转移到循环系统的肿瘤细胞。 少量 的CTCs贯穿于整个癌变过程， 通常能够在适当的微环境条件下发展成转移性肿瘤。 到目前 为止， 对CTCs的检测和 定量被认为是肿瘤早期诊断、 转移和术后监测以及侵入性活检的潜 在替代方法之一。 然而， 在CTC s检测中， 考虑到血液中大量的红细胞和白细胞可能造成的干 扰， 对CTC s的分离和富集是必不可少的。 为了克服这一障碍， 基于物理或生物分离方法的微 流控芯片、 生物膜过滤、 离心、 多功能纳米生物探针等多种策略被开发出来， 并取得了较好 的富集CTCs效果。 但是， 现有技术中， 针对循环肿 瘤细胞尚缺乏一种快速、 灵敏、 廉价、 直观 的检测方法。 发明内容 [0003]本发明的第一目的在于提供一种纳 米复合材料及 其制备方法， 其具有良好的催化 稳定性， 吸附性、 分散性好， 可以结合抗体、 适配体、 多肽等具有识别作用的生物分子， 从而 实现对循环肿瘤 细胞的快速、 可视化检测。 [0004]本发明的第二目的在于提供一种免疫传感器， 其利用上述纳米复合材料和抗体偶 联的磁性纳米颗粒 形成夹心结构， 可以快速特异性 地识别循环肿瘤 细胞。 [0005]本发明的第三目的在于提供一种非治疗为目的循环肿瘤细胞的检测方法， 其操作 简单方便， 可实现循环肿瘤细胞的快速检查， 具有灵敏度高、 检测范围宽、 检测速度快、 检出 限低的特点。 。 [0006]本发明的实施例是这样实现的： 一种具有酶活性的纳米复合材料， 纳米复合材料为PdCu@HRP ‑ConA@CuO2， 其包括 PdCu水凝胶， 以及负载于PdCu水凝胶上的HRP、 Co nA和CuO2。 [0007]一种上述纳米复合材 料的制备 方法， 其包括： S1. 将PdCu水凝胶、 HRP和Co nA混合， 得到PdCu@HRP ‑ConA； S2. 再将PdCu@HRP ‑ConA和CuCl2、 PVP混合， 并在碱性条件下进行氧化， 得到PdCu@ HRP‑ConA@CuO2。 [0008]一种免疫传感器， 其包括与抗体偶联的磁性纳米材料， 以及上述纳 米复合材料； 磁 性纳米材 料为AuNPs@ZnF e2O4@COF， 抗体和Co nA可特异性结合循环肿瘤 细胞的不同表位。 [0009]一种非治疗为目的循环肿瘤 细胞的检测方法， 其采用上述免疫传感器， 其包括： 将抗体偶联的磁性纳米材 料与循环肿瘤 细胞混合， 进行第一孵 育； 在第一次孵育完成后， 通过磁场收集、 洗涤， 随后加入所述纳米复合材料， 进行第 二次孵育；说　明　书 1/9 页 3 CN 115453117 A 3