(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211072062.4 (22)申请日 2022.09.02 (66)本国优先权数据 202210159193.X 202 2.02.22 CN (71)申请人 北京景达生物科技有限公司 地址 102600 北京市大兴区生物医药基地 华佗路50号院13号楼 (72)发明人 黄园园　郭雷鸣　张晓艳　杨月峰　 王立燕　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 专利代理师 朱萍 (51)Int.Cl. C12N 5/0783(2010.01) A61K 35/17(2015.01)A61K 45/06(2006.01) A61P 43/00(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (54)发明名称 NK细胞与CD20、 CD38、 Her 2抗体联合应用 (57)摘要 本发明涉及抗体和细胞治疗 领域， 具体为肿 瘤治疗中HER2抗体与NK细胞的联合应用。 所述NK 细胞是通过以下步骤制备得到的： 1)制备单个核 细胞； 2)使用CD137、 CD28、 CD3 预处理细胞培养容 器； 3)将1)接种于2)中， 使用含IL ‑2、 IL‑15、 IL‑ 12、 CD137和血浆的培养基进行细胞培养； 4)补充 含有血浆、 IL ‑2、 IL‑15、 IL‑12的培养基； 5)补充 含有IL‑2、 IL‑15、 IL‑21的培养基。 权利要求书2页 说明书10页 附图3页 CN 115521913 A 2022.12.27 CN 115521913 A 1.一种组合物， 所述组合物中包含NK细 胞和抗体， 所述抗体包括CD20抗体、 CD38抗体或 Her2抗体， 所述 NK细胞是由以下NK细胞的制备 方法制备 得到的： 1)制备单个核细胞； 2)使用CD137、 CD28、 CD3预处 理细胞培 养容器； 3)将1)接种于2)中， 使用含I L‑2、 IL‑15、 IL‑12、 CD137和血浆的培 养基进行细胞培 养； 4)补充含有血浆、 I L‑2、 IL‑15、 IL‑12的培养基； 5)补充含有I L‑2、 IL‑15、 IL‑21的培养基； 优选地， 步骤3)中所述 IL‑2浓度为10 00‑10000IU/mL； 更优选地， 20 00IU/mL； 优选地， 步骤3)中所述 IL‑15浓度为5 00‑2000IU/mL； 更优选地， 10 00IU/mL； 优选地， 步骤3)中所述 IL‑12浓度为5 0‑500IU/mL； 更优选地， 10 0IU/mL； 优选地， 步骤3)中所述CD137浓度为0 ‑10 μm/ml； 更优选地， 5 μg/ml； 优选地， 步骤3)中所述血浆百分比1 ‑10％； 更优选地， 5％； 优选地， 步骤4)中所述 IL‑2浓度为10 00‑10000IU/mL； 更优选地， 20 00IU/mL； 优选地， 步骤4)中所述 IL‑15浓度为5 00‑2000IU/mL； 更优选地， 10 00IU/mL； 优选地， 步骤4)中所述 IL‑12浓度为5 0‑500IU/mL； 更优选地， 10 0IU/mL； 优选地， 步骤4)中所述血浆体积占比3 ‑10％； 优选地， 5％； 优选地， 步骤5)中所述 IL‑2浓度为10 00‑10000IU/mL； 更优选地， 20 00IU/mL； 优选地， 步骤5)中所述 IL‑15浓度为5 00‑2000IU/mL； 更优选地， 10 00IU/mL； 优选地， 步骤5)中所述 IL‑21浓度为20 ‑100IU/mL； 更优选地， 5 0IU/mL； 优选地， 所述血浆是灭活血浆或人血白蛋白； 更优选地， 所述血浆是自体血浆， 自体灭 活血浆。 2.如权利要求1所述的组合物， 所述培养基的基础培养基是无血清培养基， 所述无血清 培养基包括X ‑Vivo15、 MEM培养基、 DMEM培养基、 IMDM培养基、 RPMI1640培养基、 H am’F‑12培 养基、 DMEM/F12培养基、 M19 9培养基； 优选地， 所述无 血清培养基是X‑Vivo15。 3.如权利要求1所述的组合物， 所述单个核细胞来源于血 液、 脐血、 骨髓； 优选地， 所述血 液是外周血； 优选地， 所述单个核细胞 是由Fico ll密度梯度离心法方法制备 得到的。 4.如权利要求1所述的组合物， 所述CD20抗体包括利妥昔单抗、 奥法木单抗、 奥瑞珠单 抗、 奥妥珠 单抗、 替伊莫单抗、 托西莫 单抗； 优选地， 所述HER2抗体包括曲妥珠单抗、 帕托珠单抗、 拉帕替尼、 T ‑DM1、 阿法替尼、 来那 替尼、 达克替尼、 吡咯替尼； 优选地， 所述CD38抗体包括达雷妥尤 单抗和艾萨妥昔单抗； 优选地， 所述CD20抗体是利妥昔单抗； 优选地， 所述H ER2抗体是曲妥珠 单抗； 优选地， 所述CD38抗体是达雷妥尤 单抗或艾萨妥昔单抗； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是5 0‑1000 μg/mL； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是5 00 μg/mL。 5.如权利要求1所述的组合物， 所述 NK细胞包括经CAR ‑NK细胞。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115521913 A 26.如权利要求1所述的组合物， 所述组合物还包括药学上可接受的载体、 赋形剂、 润湿 剂、 乳化剂、 pH缓冲剂； 优选地， 所述载体包括无菌的水、 油、 盐水 溶液、 葡萄糖水 溶液或甘油溶 液； 优选地， 所述赋形剂包括淀粉、 葡萄糖、 乳糖、 蔗糖、 明胶、 麦芽、 大米、 面粉、 白垩、 硅胶、 硬脂酸钠、 单硬脂酸甘油酯、 滑石、 氯化钠、 脱脂奶粉。 7.权利要求1所述的组合物的制备方法， 所述制备方法包括按照权利要求1所述NK细胞 的制备方法制备NK细胞并将其与抗体混合， 并孵 育30‑60分钟； 优选地， 所述 抗体包括CD20抗体、 CD38抗体或Her 2抗体； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是5 0‑1000 μg/mL； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是5 00 μg/mL。 8.权利要求1所述的组合物在制备治疗以下任意 一组癌症的药物中的应用： 1)多发性骨髓瘤， 2)淋巴瘤， 3)乳腺癌、 卵巢癌、 子宫内膜癌、 输卵管癌、 胃癌和前列腺癌。 9.所述乳腺癌、 卵巢癌、 子宫内膜癌、 输卵管癌、 胃癌和前列腺癌是HER2过表达的乳腺 癌、 卵巢癌、 子宫内膜癌、 输卵管癌、 胃癌和前列腺癌； 优选地， 所述乳腺癌包括非浸润性癌、 浸润性癌。 10.权利要求1所述NK细胞的制备方法所制备的NK细 胞在制备促进CD20抗体、 CD38抗体 或Her2抗体治疗效果的药物中的应用； 优选地， 促进HER2抗体在治疗包括乳腺癌、 卵巢癌、 子宫内膜癌、 输卵管癌、 胃癌和前列 腺癌在内的实体瘤癌症中的作用效果； 优选地， 促进CD20抗体在治疗非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病的作用效果； 优选地， 促进CD38抗体在治疗多发性骨髓瘤患者的作用效果。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115521913 A 3