(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211253684.7 (22)申请日 2022.10.13 (66)本国优先权数据 202210159193.X 202 2.02.22 CN (71)申请人 北京景达生物科技有限公司 地址 102600 北京市大兴区生物医药基地 华佗路50号院13号楼 (72)发明人 黄园园　张晓艳　郭雷鸣　杨月峰　 王立燕　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 专利代理师 朱萍 (51)Int.Cl. C12N 5/0783(2010.01) A61K 35/17(2015.01)A61K 45/06(2006.01) A61P 43/00(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (54)发明名称 NK细胞与P D1/PD-L1抑制剂的联合应用 (57)摘要 本发明涉及细胞治疗和抗体治疗领域， 具体 NK细胞与PD1/PD ‑L1抑制剂的联合应用。 所述NK 细胞是通过以下步骤制备得到的： 1)制备单个核 细胞； 2)使用CD137、 CD28、 CD3 预处理细胞培养容 器； 3)将1)接种于2)中， 使用含IL ‑2、 IL‑15、 IL‑ 12、 CD137和血浆的培养基进行细胞培养； 4)补充 含有血浆、 IL ‑2、 IL‑15、 IL‑12的培养基； 5)补充 含有IL‑2、 IL‑15、 IL‑21的培养基。 权利要求书2页 说明书10页 附图3页 CN 115491355 A 2022.12.20 CN 115491355 A 1.一种组合物， 所述组合物中包含NK细胞和抗体， 所述抗体包括PD ‑1/PD‑L1抗体， 所述 NK细胞是由以下NK细胞的制备 方法制备 得到的： 1)制备单个核细胞； 2)使用CD137、 CD28、 CD3预处 理细胞培 养容器； 3)将1)接种于2)中， 使用含I L‑2、 IL‑15、 IL‑12、 CD137和血浆的培 养基进行细胞培 养； 4)补充含有血浆、 I L‑2、 IL‑15、 IL‑12的培养基； 5)补充含有I L‑2、 IL‑15、 IL‑21的培养基； 优选地， 步骤3)中所述 IL‑2浓度为10 00‑10000IU/mL； 更优选地， 20 00IU/mL； 优选地， 步骤3)中所述 IL‑15浓度为5 00‑2000IU/mL； 更优选地， 10 00IU/mL； 优选地， 步骤3)中所述 IL‑12浓度为5 0‑500IU/mL； 更优选地， 10 0IU/mL； 优选地， 步骤3)中所述CD137浓度为0 ‑10 μm/ml； 更优选地， 5 μg/ml； 优选地， 步骤3)中所述血浆百分比1 ‑10％； 更优选地， 5％； 优选地， 步骤4)中所述 IL‑2浓度为10 00‑10000IU/mL； 更优选地， 20 00IU/mL； 优选地， 步骤4)中所述 IL‑15浓度为5 00‑2000IU/mL； 更优选地， 10 00IU/mL； 优选地， 步骤4)中所述 IL‑12浓度为5 0‑500IU/mL； 更优选地， 10 0IU/mL； 优选地， 步骤4)中所述血浆体积占比3 ‑10％； 优选地， 5％； 优选地， 步骤5)中所述 IL‑2浓度为10 00‑10000IU/mL； 更优选地， 20 00IU/mL； 优选地， 步骤5)中所述 IL‑15浓度为5 00‑2000IU/mL； 更优选地， 10 00IU/mL； 优选地， 步骤5)中所述 IL‑21浓度为20 ‑100IU/mL； 更优选地， 5 0IU/mL； 优选地， 所述血浆是灭活血浆或人血白蛋白； 更优选地， 所述血浆是自体血浆， 自体灭 活血浆。 2.如权利要求1所述的组合物， 所述培养基的基础培养基是无血清培养基， 所述无血清 培养基包括X ‑Vivo15、 MEM培养基、 DMEM培养基、 IMDM培养基、 RPMI1640培养基、 H am’F‑12培 养基、 DMEM/F12培养基、 M19 9培养基； 优选地， 所述无 血清培养基是X‑Vivo15。 3.如权利要求1所述的组合物， 所述单个核细胞来源于血 液、 脐血、 骨髓； 优选地， 所述血 液是外周血； 优选地， 所述单个核细胞 是由Fico ll密度梯度离心法方法制备 得到的。 4.如权利要求1所述的组合物， 所述PD ‑1抗体包括帕博利珠单抗、 纳武利尤单抗、 西米 普利单抗、 特瑞普利单抗、 信迪利单抗、 卡瑞利珠单抗、 替雷利珠单抗、 派安普利单抗和赛帕 利单抗； 优选地， 所述PD ‑L1抗体包括阿替利珠单抗、 度伐利尤单抗、 阿维鲁单抗、 恩沃利单抗和 舒格利单抗； 优选地， 所述P D‑1抗体是帕博利珠 单抗； 优选地， 所述P D‑L1抗体是阿替利珠 单抗； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是5 0‑1000 μg/mL； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是10 0 μg/mL。 5.如权利要求1所述的组合物， 所述 NK细胞包括CAR ‑NK细胞。 6.如权利要求1所述的组合物， 所述组合物还包括药学上可接受的载体、 赋形剂、 润湿权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115491355 A 2剂、 乳化剂、 pH缓冲剂； 优选地， 所述载体包括无菌的水、 油、 盐水 溶液、 葡萄糖水 溶液或甘油溶 液； 优选地， 所述赋形剂包括淀粉、 葡萄糖、 乳糖、 蔗糖、 明胶、 麦芽、 大米、 面粉、 白垩、 硅胶、 硬脂酸钠、 单硬脂酸甘油酯、 滑石、 氯化钠、 脱脂奶粉。 7.权利要求1所述的组合物的制备方法， 所述制备方法包括按照权利要求1所述NK细胞 的制备方法制备NK细胞并将其与抗体混合， 并孵 育30‑60分钟； 优选地， 所述 抗体包括P D‑1/PD‑L1抗体； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是5 0‑1000 μg/mL； 优选地， 所述 抗体的工作浓度是10 0 μg/mL。 8.权利要求1所述的组合物在制备治疗以下任意 一种癌症的药物中的应用： 黑色素瘤、 肺癌、 头颈鳞癌、 霍奇金淋巴癌、 尿路上皮癌、 MSI ‑H或dMMR实体瘤、 胃癌、 结 直肠癌、 乳腺癌、 宫颈癌、 B 细胞淋巴瘤、 肝癌、 默克尔细胞癌； 优选地， 所述肺癌包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌。 9.权利要求1所述组合物中的NK细胞在制备促进PD ‑1/PD‑L1抗体治疗效果的药物中的 应用。 10.如权利要求9所述应用， 所述PD ‑1/PD‑L1抗体治疗效包括在治疗包括黑色素瘤、 肺 癌、 头颈鳞癌、 霍奇金淋巴癌、 尿 路上皮癌、 MSI ‑H或dMMR实体瘤、 胃癌、 结直肠癌、 乳腺癌、 宫 颈癌、 B细胞淋巴瘤、 肝癌、 默克尔细胞癌。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115491355 A 3