(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210941572.4 (22)申请日 2022.08.08 (83)生物保 藏信息 CGMCC No. 40233 2022.06.27 (71)申请人 金华职业 技术学院 地址 321017 浙江省金华市海棠西路8 88号 金华职业 技术学院制药 学院 (72)发明人 王晨霞　张军航　应凌毅　徐亮　 毛纪航　 (74)专利代理 机构 金华大器专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33345 专利代理师 童健 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12P 17/18(2006.01)A61K 36/06(2006.01) A61K 31/365(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/10(2006.01) A61K 8/9728(2017.01) A61K 8/49(2006.01) A61Q 17/00(2006.01) A01N 63/30(2020.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) A23L 33/135(2016.01) C12R 1/77(2006.01) (54)发明名称 一株产黄 独素B的内生菌 (57)摘要 本发明提供了一株分离自黄独、 产黄独素B 的内生菌， 属于微生物领域。 本发明所述的内生 菌为木贼镰孢菌DSJ12， 保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为 CGMCC No.40233。 本发明通过组织块法， 从黄独 块茎中分离得到所述的内生菌， 该内生菌可发酵 产生黄独素B， 采用该内生菌发酵生产黄独素B， 可大大缩短发酵周 期， 提高生产效率， 降低生产 成本。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115141758 A 2022.10.04 CN 115141758 A 1.一株内生菌， 其特征在于， 所述的内生菌为木贼镰孢菌， 所述的木贼镰孢菌Fusarium   equiseti  DSJ12于2022年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心CGMCC， 其地址为北京市朝 阳区北辰西路1号院3号， 中国科学院微生物研究所， 保藏编号 为CGMCC No.40233。 2.一种权利要求1所述的内生菌的发酵产品， 其特征在于， 所述的发酵产品的制备方法 如下： 收集发酵培 养后的发酵 液， 减压蒸发至 干， 即得。 3.权利要求1所述的内生菌在制备黄独素B中的应用。 4.一种权利要求1所述的内生菌的提取物， 其特 征在于， 所述的提取物包括黄独素B。 5.一种权利要求1所述的内生菌的培养方法， 其特征在于， 所述的培养方法为发酵培 养， 所述的发酵培 养方法包括以下步骤： (1)菌种活化： 将保藏状态的菌种接种至培养基上培养， 逐级扩大培养筛选出活力旺盛 的菌株； (2)发酵培 养： 将步骤(1)经 过筛选的菌种接种于 培养基中进行培 养， 得到发酵 液。 6.根据权利要求5所述的培养方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述的培养条件为培养温 度21‑35℃， 培养时间为5 ‑9d。 7.根据权利要求5所述的培养方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述的培养基为PDA培养 基， 所述的P DA培养基包括： 马铃薯180 ‑220g/L， 葡萄糖15 ‑25g/L。 8.一种权利要求1所述的内生菌提取物的制备方法， 其特征在于， 所述的制备方法包括 以下步骤： (1)将发酵 液过滤掉菌丝， 装入旋转蒸发仪中减压蒸发至 干； (2)加甲醇溶解， 超声 波助溶50‑70min， 过滤除沉淀， 得发酵提取物。 9.一种包含权利要求1所述的内生菌、 权利要求2所述的发酵产品或者权利要求4所述 的提取物的食品、 保健品、 日化用品、 包 装材料、 添加剂、 医药配置品和医疗 装置。 10.一种权利要求1所述的内生菌、 权利要求2所述的发酵产品或者权利要求4所述的提 取物在制备具有抗炎、 抗肿瘤或抗菌功能的食品、 保健品、 日化用品、 包装材料、 添加剂、 医 药配置品和医疗 装置中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141758 A 2一株产黄独 素B的内生菌 技术领域 [0001]本发明涉及微 生物领域， 具体涉及一株分离自黄独、 产黄独素B的内生菌 。 背景技术 [0002]黄独(Dioscorea  Bulbifer a L.)又名黄药子、 零余子等。 黄独为多年生草本野生 藤蔓植物， 其块茎卵圆形或梨形， 外 皮紫黑色， 密布须根， 茎左旋， 单叶互生， 广 心状形， 基部 宽心形， 先端长尾状， 叶全缘， 单性花， 雄花序穗状下垂， 丛生于叶腋、 花小密集， 浅绿白色； 雌花紧贴中轴， 茎中结有若干卵圆形小球， 似山药豆。 黄独药性苦寒、 具有凉血、 降火、 消瘿、 解毒之功效， 是治愈恶疾的良方， 临床上主要用来治疗甲状腺肿、 吐血衄血、 食道癌、 胃癌、 淋巴结核、 乳腺肿瘤等。 [0003]黄独中化学成分丰富， 其块茎中含呋喃去甲基二萜类化合物及黄药子萜A、 黄药子 萜B、 黄药子萜C等， 其中黄独素B是黄独中所特有的成分， 也是与其所具有的药理活性有着 密切关系的成分， 具有抗炎、 抗肿瘤、 抗菌等作用， 在黄独全株中均有分布， 可用于癌症的治 疗。 [0004]黄独素B现有的生产方法是植物提取法， 即于黄独植株中进行提取分离， 该方法存 在着生产效率低产量低的缺点。 例如， 专利CN201110003843.3公开了一种黄独素B的提取方 法， 包括黄药子丙酮回流提取， 提取液浓缩至无丙酮味， 得浸膏； 浸膏与硅胶拌样， 加入石油 醚提取， 滤渣蒸干， 加入氯仿提取， 提取液蒸干得氯仿部位； 氯仿部位与硅胶拌样， 上柱， 用 氯仿‑甲醇体积比为98:2的混合液洗脱， 分段收集洗脱液； 洗脱 液回收溶剂， 用丙酮溶解、 析 晶， 得结晶， 滤液再上柱， 用氯仿 ‑甲醇体积比为99:1的混合液洗脱， 洗脱液回收溶剂， 用丙 酮溶解、 析晶， 结晶合并， 得黄独素B。 专利CN200710123281.X则是公开了一种黄药子有效组 分及其制备方法与用途， 其制备过程包括以下步骤： 步骤1： 用乙酸乙酯和乙醇混合物作为 溶剂对黄药子进 行提取， 步骤2： 药渣用乙醇提取， 得到提取液， 步骤3： 提取液经过色谱柱层 析得洗脱液， 步骤4： 用制备液相色谱梯度洗脱得到的洗脱液， 流动相为水和乙腈， 收集 10.8‑13.8分钟洗脱液 得到有效组分。 [0005]采用植物提取法制备黄独素B的生产周期长(黄独种植需4 ‑5个月)， 其生产效率低 (约1.5g/kg黄独)， 因此， 亟需提供一种生产黄独素B周期短， 且生产效率高的制备 方法。 发明内容 [0006]针对上述不足， 本发明提供了一种分离自黄独、 产黄独素B的内生菌。 本发明通过 组织块法， 从黄独块茎中分离得到一株内生菌， 该内生菌可发酵产生黄独素B， 采用该内生 菌发酵生产黄独素B， 可 大大缩短发酵周期， 提高生产效率， 降低生产成本 。 [0007]本发明的技 术方案如下： [0008]一方面， 本发明提供了一株内生菌， 所述的内生菌为木贼镰孢菌， 所述的木贼镰孢 菌(Fusarium  equiseti)DS J12于2022年06月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心(C GMCC)， 其地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 中国科学院微生物研说　明　书 1/4 页 3 CN 115141758 A 3