(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211382134.5 (22)申请日 2022.11.07 (71)申请人 中国海洋大学 地址 266100 山东省青岛市崂山区松岭路 238号 (72)发明人 于广利　李佳　蔡超　蒋昊　 李国云　 (74)专利代理 机构 北京硕慧云知识产权代理事 务所(特殊普通 合伙) 16000 专利代理师 赵慧敏 (51)Int.Cl. C07K 7/06(2006.01) C07K 1/10(2006.01) A61K 38/08(2019.01) A61K 47/61(2017.01)A23L 33/18(2016.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (54)发明名称 一种β-葡聚糖胸腺五肽偶联物、 制备方法 及其在免疫调节和抗肿瘤药物、 保健品的应用 (57)摘要 本发明属于化学合 成医药技术领域， 具体涉 及一种β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物的制备方法及 其在制备免疫调节药物和保健品中的应用。 本发 明的β‑葡聚糖与胸腺五肽偶联物是通过β ‑葡 聚糖还原端半缩醛基团与胸腺五肽的游离氨基 共价偶联得到。 本发明的方法反应效率高、 产物 结构明确、 反应位点专一及无副产物。 本发明首 次合成了β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物， 该糖肽具 有显著的免疫调节及抗肿瘤作用， 对RAW2 64.7巨 噬细胞无细胞毒性且可显著促进其吞噬能力， 对 环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠骨髓抑制状态有 较强的恢复能力， 对4T1及B16F10肿瘤模型小鼠 具有显著抑制肿瘤生长作用， 可以用于制备免疫 增强剂、 抗肿瘤药物、 保健品以及特殊医学用途 配方食品。 权利要求书2页 说明书7页 附图4页 CN 115536732 A 2022.12.30 CN 115536732 A 1.一种β‑葡聚糖胸腺五肽偶联物， 其特征在于， 所述β ‑葡聚糖与胸腺五肽偶联物的结 构如下： 其中所述糖肽偶联物结构式 中n＝1～100， m＝1～3 0。 2.一种如权利要求1所述的β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物(BG ‑TP)的制备方法， 其特征在 于： 所述的β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物通过β ‑葡聚糖还原端半缩醛基团与免疫调节药物胸腺 五肽的氨基共价偶联 得到。 3.根据权利要求2所述的β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物的制备方法， 其特征在于， 所述的β ‑ 葡聚糖与胸腺五肽偶联物的具体制备步骤如下： (1)将β‑葡聚糖(BG)与胸腺五肽(TP5)溶解于二甲亚砜/乙酸混合反应溶剂中， 氮气保 护下， 于60℃水浴中反应1小时； (2)氰基硼氢化钠(NaBH3CN)溶于水中， 加入上述反应溶液， 继续反应24小时； 再次加入 氰基硼氢化钠(NaBH3CN)固体粉末， 继续反应24小时； (3)反应结束后， 加入等体积氯化钠(NaCl)盐溶液， 混匀， 加入4～5倍体积无水乙醇醇 沉， 离心10分钟， 沉淀再次加氯化钠溶液至刚好溶解， 继续醇沉， 反复3次后收集沉淀， 透析 48小时后经减压浓缩后经冷冻干燥即可得β ‑葡聚糖与胸腺五肽共价偶联的糖肽偶联物 (BG‑TP)。 4.根据权利要求3所述的β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物的制备方法， 其特征在于： β ‑葡聚糖 分子量为0.1kDa～300kDa， 单糖组成以葡萄糖为主， 其含量在95％以上， 连接方式为主链由 葡萄糖通过β ‑1,3糖苷键连接而成， 同时在主链上 具有β‑1,6分支， 分支度为1％～5 0％。 5.根据权利要求3所述的β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物的制备方法， 其特征在于， 所选肽为 胸腺五肽(Thymopenti n， TP5)和含有胸腺五肽活性片段(RKDVY)的其 他肽类药物类似物。 6.根据权利要求3所述的β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物的制备方法， 其特征在于， 所述二甲 亚砜/乙酸混合反应溶剂， 二甲亚砜和乙酸 二者体积比例为83:17(v/v)。 7.根据权利要求3所述的β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物 的制备方法， 其特征在于， 所述β葡 聚糖与胸腺五肽当量比为1:10； 所述β 葡聚糖与氰基硼氢化钠(NaBH3CN)当量比为1:50， 所 加入的氰基硼氢化钠为水 溶液； 在醇沉和透析 过程中用到氯化钠溶 液的浓度为 4～32％。 8.如权利要求1 ‑7任意一项所述β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物在调节免疫系统和抗肿瘤的 药物、 保健品以及特殊医学用配方食品的用途。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115536732 A 29.根据权利要求8所述的用途， 其特征在于： 所述β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物在调节免疫 系统的药物、 保健品以及特殊医学用配方食品的用途， 具体表现为对环磷酰胺诱导的免疫 低下小鼠模型骨髓抑制 状态具有显著改善作用， 促进腹腔巨噬细胞吞噬能力， 提高脾脏中 淋巴细胞总数及CD4+/CD8+T比值恢复免疫系统的能力， 以及促进小鼠血清中TNF ‑α、 IL‑1β 和IFN‑γ等细胞因子以及IgG和sIgA等抗体分泌能力； 所述β ‑葡聚糖与胸腺五肽偶联物免 疫调节的用途， 具体为对RAW264.7巨噬细胞的无细胞毒性， 可显著促进其吞噬能力以及细 胞因子释放的能力， 且效果较单独使用β ‑葡聚糖、 单独使用 胸腺五肽以及β ‑葡聚糖与胸腺 五肽的混合物显著， 所述药物、 保健品以及特殊医学用途配方食品呈注射剂、 粉针剂、 口服 液、 片剂、 胶囊、 软胶囊以及散剂形式。 10.根据权利要求8所述的用途， 其特征在于： 所述β ‑葡聚糖胸腺五肽偶联物在抗肿瘤 的药物、 保健品以及特殊医学用配方食品的用途， 具体为对4T1及B16F10肿瘤模 型小鼠具有 抑制肿瘤生长作用， 能促进小鼠血清中TNF ‑α、 IL‑1β 和IFN‑γ等细胞因子分泌能力， 所述药 物、 保健品以及特殊医学用途配方食品呈注射剂、 粉针剂、 口服液、 片剂、 胶囊、 软胶囊以及 散剂形式。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115536732 A 3