(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211065090.3 (22)申请日 2022.09.01 (71)申请人 广东龄值 生物科技有限公司 地址 528200 广东省佛山市南海区桂城街 道港口路12号三山科创中心1座第16 层1602、 1603、 1604室 (72)发明人 陈祥　马铎　 (74)专利代理 机构 深圳天融专利代理事务所 (普通合伙) 44628 专利代理师 杜英 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/59(2017.01) A61K 35/17(2015.01) A61K 41/00(2020.01)A61P 1/16(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/00(2006.01) (54)发明名称 一种γδT细胞功能化的磁性微球、 制备方 法及其用途 (57)摘要 本发明提出了一种γδT细胞功能化的磁性 微球、 制备方法及其用途， 所述磁性微球由中空 的多孔二氧化硅微球中， 磁性物质原位沉积在微 球内部， 微球表面经过聚多巴胺改性后， 粘附γ δT细胞， 得到γδT细胞功能化的磁性微球。 本 发明γδT细胞功能化的磁性微球能够通过靶点 作用， 以及磁性物质的加热作用， 特异性高效杀 伤肿瘤细胞， 对多种肿瘤细胞均有较强的杀伤能 力， 细胞毒活性明显强于常规方法及抗原制备的 γδT细胞， 且本发明所提供的制备方法的制备 成本低廉、 工序简单、 条件易控、 对设备的要 求较 低、 易于规模化生产， 给医药工作者的科研和医 疗工作均带来巨大的便利。 权利要求书2页 说明书8页 附图1页 CN 115381965 A 2022.11.25 CN 115381965 A 1.一种γδT细胞功能化的磁性微球的制备方法， 其特征在于， 所述磁性微球由中空的 多孔二氧化硅微球中， 磁性物质原 位沉积在微球内部， 微球表面经过聚多巴胺改性后， 粘附 γ δT细胞， 得到γ δT细胞功能化的磁性 微球。 2.根据权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.二氧化硅微球的制备： 将正硅酸烷基酯溶于有机溶剂中， 加入含有致孔剂的水中， 搅拌混合后， 用SPG膜进行快速膜乳化， 形成乳液， 滴加氨水， 加热搅拌反应， 过滤， 洗涤， 干 燥， 得到二氧化硅微球； S2.磁性微球的制备： 将步骤S1制得的二氧化硅微球分散在水中， 加入氯化亚铁溶解， 搅拌混合均匀后， 滴加氨水， 加热超声 使其充分反应， 过 滤， 洗涤， 干燥， 得到磁性 微球； S3.聚多巴胺改性磁性微球的制备： 将步骤S2制得的磁性微球分散在水中， 加入多巴胺 盐酸盐和催化剂溶 液， 加热反应， 过 滤， 洗涤， 煅烧， 得到聚多巴胺改性磁性 微球； S4.γδT细胞的分离和提取： 将人外周血抗凝处理， 离心， 取细胞沉淀， 加入培养基中重 悬， 得到细胞悬液， 将细胞悬液加入 人淋巴细胞分离液中， 离心， 得到多层液体， 取白膜层的 单个核细胞再次加入培养基， 经过多种细胞因子诱导增值， 混匀后离心， 取细胞沉淀， 生理 盐水洗涤， 得到γ δT细胞； S5.γδT细胞功能化的磁性微球的制 备： 将步骤S4制得的γδT细胞和步骤S3制得的聚 多巴胺改性磁性微球均加入生理盐水中， 搅拌混合反应， 过滤， 洗涤， 得到γδT细胞功能化 的磁性微球。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S 1中所述正硅酸烷基酯为正硅酸 乙酯和/或正硅酸甲酯； 所述有机溶剂为酯类有机溶剂， 选自乙酸乙酯、 乙酸甲酯、 甲酸甲 酯、 甲酸乙酯、 丙酸乙酯中的至少一种； 所述SPG膜的孔隙为50 ‑100 μm； 所述致孔剂 选自聚氧 乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、 聚乙二醇辛基苯基醚和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯中的至少 一种； 所述氨水浓度为25 ‑35wt％； 所述正硅酸烷基酯、 致孔剂、 氨水的质量比为100： (2 ‑5)： (12‑15)； 所述加热温度为5 0‑70℃， 时间为3 ‑5h。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S2中所述氨水浓度 为25‑35wt％； 所述二氧化硅微球、 氯化亚铁、 氨水的质量比为100： (25 ‑40)： (12‑17)； 所述加热至温度为 60‑90℃， 超声功率 为1000‑1500W， 反应时间为1 ‑2h。 5.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S3中所述磁性微球、 多巴胺盐酸 盐和催化剂溶液的质量比为100： (30 ‑45)： (2‑5)； 所述催化剂溶液为含有0.01 ‑0.05mol/L   CoCl2， pH值为5.5 ‑6的Tris‑HCl溶液， 所述加热温度为35 ‑45℃， 反应时间为2 ‑4h； 所述煅烧 温度为300‑500℃， 时间为1 ‑3h。 6.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S4中所述离心转速为3000 ‑ 4000r/min， 时间为10 ‑20min； 所述培养基为含有1 ‑3mM的谷氨酰胺的1640培养基； 所述细胞 悬液和人淋巴细胞分离液的质量比为(1 ‑2)： 1； 所述细胞沉淀和培养基的质量比为1： (1 ‑ 2)； 所述单个核细胞和培 养基的质量比为(1 ‑3)： 100。 7.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S5中所述γδT细胞和聚多巴胺改 性磁性微球的质量比为(1 ‑3)： 10； 所述反应时间为1 ‑2h。 8.一种如权利要求1 ‑7任一项所述的制备 方法制得的γ δT细胞功能化的磁性 微球。 9.一种如权利要求8所述γδT细胞功能化的磁性微球用于制备用于诊断和治疗癌症、权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115381965 A 2退行性疾病、 脑部疾病、 心血管疾病、 传染病、 移植相关疾病、 自体免疫性疾病， 或用于治疗 肿瘤、 脑部疾病、 心血管疾病、 退行性疾病、 传染病、 移植相关疾病、 肝硬化和特征在于纤维 发生的其他疾病、 特征在于复发性胎儿丢失的疾病、 子宫内胎 儿死亡、 新生儿疾病、 先天性 和获得性凝血功能障碍、 遗传疾病 、 自体免疫性疾病， 或用于疼痛缓解的药物的用途。 10.一种如权利要求8所述γδT细胞功能化的磁性微球用于制备用于诊断和治疗肿瘤 及其并发症相关疾病的药物的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115381965 A 3