(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210966624.3 (22)申请日 2022.08.12 (71)申请人 重庆工业职业 技术学院 地址 401120 重庆市渝北区桃源大道10 00 号 (72)发明人 刘蒙恩　白莉　 (74)专利代理 机构 深圳运赢知识产权代理事务 所(普通合伙) 44771 专利代理师 王倩斐 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01) A61K 31/45(2006.01) A61K 9/52(2006.01) A61K 47/04(2006.01) A61K 9/06(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61K 49/00(2006.01) A61N 5/06(2006.01) C12Q 1/02(2006.01) G01N 3/08(2006.01) G01N 33/00(2006.01) (54)发明名称 一种光热光敏治疗与化疗协同抗肿瘤方法 及应用设备 (57)摘要 本申请涉及一种光热光敏治疗与化疗协同 抗肿瘤方法及应用设备， 属于以所用的非有效成 分为特征的医用配制品， 例如载体、 惰性添加剂 领域， 具体属于高分子化合物领域， 装载姜黄素 类似物EF24和ICG的响应性联硒介孔二氧化硅纳 米粒杂化可注 射水凝胶， 在病灶 处形成以该水凝 胶为支架的长时间作用缓释递药体系， 实现光热 光敏治疗与化疗的协同抗肿瘤作用， 为口腔癌治 疗提供新思路， 具有重要的临床应用价值， 并且 利用水凝胶作为载体， 在水中稳定， 在体内不易 被清除。 权利要求书3页 说明书8页 附图10页 CN 115414479 A 2022.12.02 CN 115414479 A 1.一种光热光敏治疗与化疗协同抗肿瘤方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤一、 合成： 采用改进后的经典St öber法合成单分散实心二氧化硅球， 再利用选择性 一步刻蚀法合成中空介孔 二氧化硅纳米 球； 步骤二、 装载： 取HMSN于去离子水中， 超声使其分散均匀， 取EF24、 ICG溶解于水中， 并将 此溶液加 入到HMSN的水溶液中， 搅拌使EF24、 ICG在HMSN孔道中达到吸附饱和后， 将溶液进 行离心分离， 沉淀用去离子水洗除多余的EF24和ICG， 只保留牢牢吸附在HMSN孔道中的EF24 和ICG； 步骤三、 载药率分析： 将HMSN制备步骤得到的液体上清液标定为500ml， 然后提取5ml   上清液， 与5 ml 无水乙醇混合， 上清液中姜黄素的残留量通过紫外线光谱仪计算出来的， 波 长为433nm， 包封率=载 药量/总量， 载 药率=载量/载 药纳米粒子总量   ×  100%； 步骤四、 水凝胶体系制备： 在70℃的去离子水中， 用温和的磁力搅拌， 使失去的甲基纤 维素粉末形成均相， 冷却后， 将装载了EF24和ICG介孔二氧化硅纳米粒缓慢倒入容器中， 搅 拌充分混合， 将混合物置于4℃条件下过夜， 然后将混合物置于37℃水浴中5min， 形成最终 杂交水凝胶； 步骤五、 性能检测： 使用检测装置对样品进行光热效应、 膨胀比、 拉伸强度以及力学强 度检测； 步骤六、 细胞培养： 提取原口腔组织细胞， 按照2 ×104 cell/cm2  接种至T25一次性培 养瓶， 用含10%胎牛血清和1%双抗的α ‑MEM 培养基， 于  37 ℃、 5% CO2和95%相对湿度的培养 箱中培养， 每天在显微镜下观察细胞生长状况， 每两天换液一次， 当细胞生长汇合率达到   80%‑90%时， 加入0.25%  的胰酶‑EDTA 消化， 按1:3  的比例传代； 步骤七、 细胞加 载： 0.25%  的胰酶A  ‑EDTA 消化悬浮口腔组织细胞  ， 加入 150uL 培 养基， 再加 入150IU的抑肽酶， 吹打混匀后制成细胞密度为4x  106个/mL  的悬液， 将上述悬 液与加载于水凝胶上， 并加入5 00 μL含500IU抑肽酶的培 养基培养； 步骤八、 凝胶的细胞相容性测定： 将凝胶浸泡于DMEM培养基24  h后， 收集凝胶浸取液 体， 设置不同凝胶浸取液浓度组， 分别含有0%， 6.25%， 12.5%， 2 5%， 50%， 75%， 100%  浸取液， 培 养人口腔组织细胞， 分别于24  h， 48h后MT T法570nm检测吸 收峰， 计算细胞活性； 步骤九、 凝胶体内生物相容性测试： 3％戊巴比妥进行腹腔麻醉后， 消毒， 铺巾， 将体积 约1mL水凝胶注入体重约120g  balb/c小鼠背部皮下， 剃毛后于背部做一皮下切口， 剥离组 织后， 将凝胶注入皮下， 于1、 2、 4、 8周处死小鼠后， 用手术刀做切口翻开皮肤， 肉 眼观察水凝 胶形态与大小变化， H &E染色与Mas son染色， 评价炎性反应程度； 步骤十、 CBA小鼠口腔癌模型的构建： A、 实验对象及分组： 对实验小鼠进行分组； B、 动物模型的建立： 皮下注射口腔癌细胞， 得到小鼠口腔癌模型； C、 肿瘤治疗效果评估： 每隔一天测量肿瘤尺寸， 考 察小鼠生存期。 2.根据权利要求1所述的一种光热光敏治疗与化疗协同抗肿瘤方法， 其特征在于， 测试 样品光热效应时， 用808nm激光照射水凝胶5mi n， 测试性能变化； 测试样品膨胀比， 制备形成的三个形状大小各不相同的圆柱形凝胶浸泡于去离子水中 直至平衡 状态， 测试膨胀比； 测定凝胶拉伸强度， 取体积约 5mm x 3 mm x 3mm的水凝胶， 标记测试样原始长度， 拉伸权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115414479 A 2水凝胶， 测量水凝胶断裂前的最大拉伸长度； 测定凝胶力学强度， 将样品置于容器中央， 对容器 内的水凝胶进行施压， 控制施压的力 度大小相同， 根据测试 前后水凝胶 在容器内厚度的变化， 测定 凝胶的弹性模量。 3.根据权利要求1所述的一种光热光敏治疗与化疗协同抗肿瘤方法， 其特征在于， 所述 步骤十中， 选取3 0只体重20 0g的健康CBA小鼠， 随机分成A、 B、 C、 D、 E、 F共6组： A组： 空白对照组， 小鼠口腔癌未采取任何修复； B组： 单纯水凝胶组， 小鼠口腔癌病灶处注射不装载药物的可注射水凝胶， 不加光热治 疗； C组： 游离药物组， 对口腔癌小鼠直接注射EF24药物进行治疗； D组： 实验组1， 小鼠口腔癌病灶处注射入装载EF24和ICG的介孔二氧化硅纳米粒杂化可 注射水凝胶， 不加光热治疗； E组： 实验组2， 小鼠口腔癌病灶处注射入装载EF24和ICG的介孔二氧化硅纳米粒杂化可 注射水凝胶， 并给予 1次光热治疗； F组： 实验组3， 小鼠口腔癌病灶处注射入装载EF24和ICG的介孔二氧化硅纳米粒杂化可 注射水凝胶， 并给予5天 1次光热治疗， 总计三次。 4.一种应用设备， 包括如权利要求1所述的检测装置， 其特征在于， 还包括框架 （1） ， 所 述框架 （1） 内部的底端设置有用于检测水凝胶膨胀比以及拉伸强度的测量机构 （2） ， 所述框 架 （1） 的顶部设置有与测量机构 （2） 配合用于检测水凝胶力学强度的检测机构 （3） ； 所述测量机构 （2） 包括三个设置在框架 （1） 内腔底部的测量部以及设置在测量部上的 拉伸部； 所述测量部用于测量水凝胶的膨胀比， 所述测量部包括两个设置在框架 （1） 内腔底部 的封堵板 （203） ， 所述封堵板 （203） 内侧的中部铰接有两个可转动的透明弧形架 （204） ， 所述 透明弧形架 （204） 靠近封堵板 （203） 的一侧固定连接有柔性磁板 （205） ， 所述透明弧形架 （204） 的外壁设有刻度线； 所述拉伸部包括两个开设在封堵板 （203） 靠近透明弧形架 （204） 一侧的第三滑槽 （208）， 所述第三滑槽 （208） 的内部滑动连接有用于推动透明弧形架 （204） 转动的滑杆 （209） ； 所述检测机构 （3） 包括设置在框架 （1） 顶部的推压部， 所述推压部配合测量部可用于检 测水凝胶的弹性模量， 所述推压部包括开设在框架 （1） 顶端中部的L形滑槽 （301） ， 所述L形 滑槽 （301） 的内部设置有矩形板 （306） ， 所述矩形板 （306） 的两侧均 设置有活动架 （305） ， 所 述矩形板 （306） 上设置有三个与测量部对应的压杆 （313） ， 所述压杆 （313） 的底端固定连接 有用于推压水凝胶的压盘 （314） 。 5.根据权利要求4所述的一种应用设备， 其特征在于， 所述拉伸部还包括两个分别开设 在框架 （1） 内腔底端前后侧的第一滑槽 （201） ， 两个所述第一滑槽 （201） 之间开设有多个第 二滑槽 （202） ， 所述测量部设置在第二滑槽 （202） 的内部， 所述封堵板 （203） 的两侧均设置有 波纹罩 （206） ， 两个所述波纹罩 （206） 的一侧均固定连接有连接条 （207） ， 所述第二滑槽 （202） 内部两侧的两端均开设有用于固定连接条 （207） 的定位槽 （220） ， 所述框架 （1） 内部的 底端设有 多个位于 定位槽 （2 20） 侧边刻度线。 6.根据权利要求5所述的一种应用设备， 其特征在于， 所述拉伸部还包括两个设置在封权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115414479 A 3