(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211118103.9 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 北京多能赛尔生物科技有限公司 地址 102308 北京市门头沟区美安路7号院 1号楼9层903室 (72)发明人 王磊　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种可募 集并激活NK细胞的CAR T细胞及应 用 (57)摘要 本发明提供了一种可募集并激活NK细胞的 CART细胞及应用， 涉及生物医药技术领域。 本发 明所述双特异性抗体， 一端可结合到肿瘤细胞， 另一端可结合并募集NK细胞。 本发明利用表达所 述双特异性抗体的CART细胞， 通过CAR结构趋化 到肿瘤组织周围后， 持续分泌上述双特异性抗 体。 同时启动CART细胞和NK细胞对肿瘤细胞的杀 伤。 利用CART技术特异性靶向， 在肿瘤组织周围 募集并激活NK细胞， 发挥其杀肿瘤作用， CART细 胞和NK细胞相互结合互相促进， 达到杀 灭肿瘤细 胞的作用。 本发明所述CART细胞， 可在肿瘤组织 中产生局部大量的抗体， 募集并激活NK细胞， 从 而对肿瘤细胞产生特异性杀伤。 权利要求书1页 说明书14页 附图5页 CN 115286717 A 2022.11.04 CN 115286717 A 1.一种重组双特异性抗体， 其特征在于， 所述双特异性抗体的N端包括靶向肿瘤细胞的 单链抗体1、 靶向肿瘤细胞的单链抗体2和靶向肿瘤细胞的单链抗体3中的至少一种， C端包 括靶向NK细胞的单链抗体4和靶向NK细胞的单链抗体5的至少一种。 2.根据权利要求1所述双特异性抗体， 其特征在于， 在所述双特异性抗体的N端， 包括单 链抗体1， 或单链抗体2， 或单链抗体1和单链抗体2的组合， 或单链抗体1和单链抗体3的组 合， 或单链抗体2和单链抗体3的组合， 或单链抗体1、 单链抗体2和单链抗体3的组合。 3.根据权利要求1或2所述双特异性抗体， 其特征在于， 所述单链抗体1、 单链抗体2和单 链抗体3独立 地包括： 肿瘤相关抗体， 或特异性 抗原抗体， 或抑制性受体 配体抗体。 4.根据权利要求3所述双特异性抗体， 其特征在于， 所述肿瘤相关抗体和特异性抗原抗 体， 独立地包括： 抗CD7抗体、 抗EGF R抗体、 抗EpCA M抗体、 抗Glypican ‑3抗体、 抗NKG2D受体抗 体、 抗GPC3抗体、 抗Claudin18.2抗体、 抗NY ‑ESO‑1抗体、 抗MSLN抗体、 抗HER2抗体、 抗GD2抗 体、 抗GPA7抗体、 抗P SCA抗体或抗EGFRvI II抗体； 所述抑制性受体配体抗体包括： 抗PD ‑L1抗体、 抗PD ‑L2抗体、 抗Gal9抗体、 抗CD155抗 体、 抗CD1 12抗体、 抗CD 80抗体、 抗CD 86抗体或抗HLA ‑E抗体。 5.根据权利要求1所述双特异性抗体， 其特征在于， 在所述双特异性抗体的C端， 包括单 链抗体4， 或单链抗体4和单链抗体5的组合。 6.根据权利要求1或5所述双特异性抗体， 其特征在于， 所述单链抗体4和单链抗体5独 立地包括： 激活分子抗体， 或抑制性受体抗体。 7.根据权利要求6所述双特异性抗体， 其特征在于， 所述激活分子抗体包括： 抗CD16抗 体、 抗NKG2D抗体、 抗NKp30抗体、 抗NKp46抗体、 抗NKp44抗体、 抗NKp80抗体、 抗CD2抗体、 抗 LFA‑1抗体、 抗2B4 抗体、 抗CD69抗体、 抗CD40L 抗体或抗 ILT‑1抗体； 所述抑制性受体抗体包括： 抗KIRs抗体、 抗CD94/NKG2抗体、 抗PD ‑1抗体、 抗LA G‑3抗体、 抗TIM‑3抗体、 抗Tigit抗体或抗 NKG2A抗体。 8.一种表达 权利要求1～7任一项所述双特异性 抗体的CAR  T细胞。 9.权利要求8所述CAR  T细胞在制备抗肿瘤的药物中的应用。 10.根据权利要求9所述应用， 其特 征在于， 所述肿瘤包括实体瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115286717 A 2一种可募集 并激活NK细胞的CAR  T细胞及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一种可募集并激活NK细胞的CART细胞及 应用。 背景技术 [0002]CAR‑T(Chimeric  Antigen Receptor  T‑Cell Immunotherapy， 嵌合抗原 受体T细 胞疗法)是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法。 它把病人自身免疫系统的T细胞提取出来， 经过体外培养和改造嵌入目标抗原受体， 再将经过修饰的T细胞回输到患者体内， T细胞通 过识别并攻击特定的癌细胞最终实现肿瘤治疗效果。 由于其疗效和无耐药性等优势， CAR ‑T 技术更是被2013年 《科 学》 杂志评为全球十大 科技创新之首。 [0003]CAR‑T产品研发多数集中于血液肿瘤特别是急性淋巴细胞白血病和 大B细胞淋巴 瘤。 目前已经有2个针对B细胞性淋巴瘤的CAR ‑T产品得到了商业化应用并实现了规模销售， 分别是Gilead旗下Kite的YesCARTa和诺华的Kymriah。 CAR ‑T的优势和不足对于现有CAR ‑T 技术来说， 优缺点都非常明显， 尤其是应用限制较大， CAR ‑T技术应用下的临床进展主要来 源于血液肿瘤， 实体瘤由于复杂的肿瘤内环境等原因进展相对较少， 在疗效方面也不尽如 人意； 另一方面CAR ‑T也存在技术缺点和毒副反应， 如细胞因子释放 综合征(CRS)、 脱靶毒性 和神经毒性等， 在反应严重时甚至危及生命。 另外， CAR ‑T作为非标准化产品， 高昂的治疗费 用也是扩大应用的一个难题。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种可募集并激活NK细胞的CART细胞及应用， 可在肿瘤组织周围募集并激活NK细胞， 发挥其杀肿 瘤作用， CART细胞和NK细胞相互结合互 相促进， 达 到杀灭肿瘤 细胞的作用。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种重组双特异性抗体， 所述双特异性抗体的N端包括靶向肿瘤细 胞的单链抗体1、 靶向肿瘤细胞的单链抗体2和靶向肿瘤细胞的单链抗体3中的至少一种， C 端包括靶向NK细胞的单链抗体4和靶向NK细胞的单链抗体5的至少一种。 [0007]优选的， 在所述双特异性抗体的N端， 包括单链抗体1， 或单链抗体2， 或单链抗体1 和单链抗体2的组合， 或单链抗体1和单链抗体3的组合， 或单链抗体2和单链抗体3的组合， 或单链抗体1、 单链抗体2和单链抗体3的组合。 [0008]优选的， 所述单链抗体1、 单链抗体2和单链抗体3独立地包括： 肿瘤相关抗体， 或特 异性抗原抗体， 或抑制性受体 配体抗体。 [0009]优选的， 所述肿瘤相关抗体和特异性抗原抗体， 独立地包括： 抗CD7抗体、 抗EGFR抗 体、 抗EpCAM抗体、 抗Glypican ‑3抗体、 抗NKG2D受体抗体、 抗GPC3抗体、 抗Claudin  18.2抗 体、 抗NY‑ESO‑1抗体、 抗MSLN抗体、 抗HER2抗体、 抗GD2抗体、 抗GPA7抗体、 抗PSCA抗体或抗 EGFRvIII抗体；说　明　书 1/14 页 3 CN 115286717 A 3