(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210909960.4 (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 上海交通大 学医学院附属第九人民 医院 地址 200011 上海市黄浦区制造局路6 39号 (72)发明人 孙树洋　张志愿　姚艳丽　杨桂柱　 (74)专利代理 机构 上海元好知识产权代理有限 公司 31323 专利代理师 贾慧琴　贾艺璇 (51)Int.Cl. C12Q 1/02(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种基于头颈鳞癌原代细胞的高通量药物 筛选方法及抗头 颈鳞癌药物 (57)摘要 本发明公开了一种基于头颈鳞癌原代细胞 的高通量药物筛选方法及抗头颈鳞癌药物， 涉及 生物医药技术领域。 本发明提供的抗头颈鳞癌药 物筛选方法， 以患者来源的头颈鳞癌原代细胞及 多个商品化头颈鳞癌细胞系为载体， 高通量筛选 已知针对其他适应症的药物， 通过测定细胞增殖 活性、 传统指标(IC50、 Emax和AUC)以及生长速率 抑制指标(GR50、 GRmax和GRAOC)等， 最终得到129 个具有抗头颈鳞癌活性的药物， 实现 “老药新 用”， 一方面， 为拓宽头颈鳞癌的药物选择范围提 供了新思路； 另一方面， 本发明研究可大大缩短 药物发现到临床转化的时间， 具有重要临床治疗 意义。 权利要求书3页 说明书13页 附图2页 CN 115109824 A 2022.09.27 CN 115109824 A 1.一种基于 头颈鳞癌原代细胞的高通 量药物筛 选方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1， 构建不同患者 来源的头 颈鳞癌原代细胞； S2， 任取至少部分步骤S1构建的头颈鳞癌原代细胞为载体， 分别加入单一浓度的待筛 选药物共同培养， 测定细胞增殖活力， 筛选对至少一种来源的头颈鳞癌原代细胞具有50％ 以上杀伤效果的药物， 得到第一 候选药物； S3， 任取至少部分步骤S1构建的头颈鳞癌原代细胞为载体， 分别加入不同浓度的第一 候选药物共同培养， 测定细胞增殖活力， 筛选对至少一种来源的头颈鳞癌原代细胞具有 50％以上杀伤效果且 存在浓度梯度依赖性的药物， 得到第二 候选药物； S4， 以头颈鳞癌原代细胞及细胞系为载体， 分别加入不同浓度的第二候选药物共 同培 养72h后， 测定培养液420～480 nm吸光度， 并计 算IC50、 Emax和AUC， 以及对应的GR50、 GRmax和 GRAOC值， 评价药物的潜力和有效性， 得到抗头 颈鳞癌药物。 2.如权利要求1所述的基于头颈鳞癌原代细胞的高通量药物筛选方法， 其特征在于， 步 骤S4中， 以步骤S1构建的全部头颈鳞癌原代细胞及商业购买的多个头颈鳞癌细胞系为载 体。 3.如权利要求1所述的基于头颈鳞癌原代细胞的高通量药物筛选方法， 其特征在于， 步 骤S1的具体操作包括： S1.1， 将获得的头颈鳞癌肿瘤组织进行分离剪碎处理， 离心去上清后， 加入组织消化液 重悬， 置于37℃摇床上消化3 0～60min； S1.2， 加入含10 ％胎牛血清的培养基中和消化， 依次通过由大到小不同孔径的滤网后， 分别收集滤网上的组织 块和滤网下的细胞 悬液； S1.3， 将步骤S1.2得到的组织块转移至培养瓶中进行贴壁培养； 细胞悬液离心后加入 完全培养基重悬， 进行贴壁培养， 两者筛选成功传代5次以上仍然保持高增殖活性的细胞， 即为成功构建所述的头 颈鳞癌原代细胞。 4.如权利要求3所述的基于头颈鳞癌原代细胞的高通量药物筛选方法， 其特征在于， 所 述的组织消化液配方如下： 四型胶原酶1mg/mL、 透明质酸酶20 0U/mL、 DNase  I型酶200U/mL、 无酚红胰蛋白酶1 ×。 5.如权利要求3所述的基于头颈鳞癌原代细胞的高通量药物筛选方法， 其特征在于， 所 述的完全培 养基配方如下： DMEM/F12培养基、 胰岛素5μg/ml、 两性霉素B  250ng/ml、 庆大霉素10μg/ml、 霍乱毒素 0.1nM、 EGF  0.125ng/ml、 氢化可的松 25ng/ml、 ROCK抑制剂Y ‑27632 10 μM。 6.如权利要求1所述的基于头颈鳞癌原代细胞的高通量药物筛选方法， 其特征在于， 还 包括： 步骤S5， 基于药物基因 组学分析， 筛 选所述的抗头 颈鳞癌药物的药效生物标志 物。 7.一种根据权利要求1 ‑6中任一项所述的筛选方法得到的抗头颈鳞癌药物， 其特征在 于， 所述的抗头 颈鳞癌药物如下表所示：权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115109824 A 2权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115109824 A 3