(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210815681.1 (22)申请日 2022.07.12 (71)申请人 东华大学 地址 201620 上海市松江区人民北路2 999 号 (72)发明人 史向阳　沈思妍　高悦　欧阳智俊 　 贾兵洋　 (74)专利代理 机构 上海泰能知识产权代理事务 所(普通合伙) 3123 3 专利代理师 黄志达 (51)Int.Cl. A61K 47/59(2017.01) A61K 39/00(2006.01) A61K 39/39(2006.01) A61K 41/00(2020.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种基于树状大分子包裹硫化铜纳米颗粒 的肿瘤疫苗及其制备和应用 (57)摘要 本发明涉及一种基于树状大分子包裹硫化 铜纳米颗粒的肿瘤疫苗及其制备和应用， 所述复 合材料为纳米载体负载干扰素基因刺激因子激 动剂cGAMP； 其中纳米载体为表面修饰苯硼酸PBA 分子、 内部包裹硫化铜纳米颗粒的第五代聚酰 胺‑胺树状大分子G5.NH2。 本发明操作工艺简单， 反应条件温和， 易于纯化， 所用的合成原料均为 环境友好型材料， 所开发的纳米疫苗可将光热治 疗和免疫治疗两种治疗模式集中在一个纳米平 台上用于肿瘤的治疗和预防， 具有良好的应用潜 力和产业 化实施前 景。 权利要求书1页 说明书14页 附图13页 CN 115300638 A 2022.11.08 CN 115300638 A 1.一种苯硼酸修饰树状大分子复合材料， 其特征在于， 所述复合材料为纳米载体负载 干扰素基因刺激因子激动剂cGAMP； 其中纳米载体为表面修饰苯硼酸PBA分子、 内部包裹硫 化铜纳米颗粒的第五代聚酰胺 ‑胺树状大分子G5.NH2。 2.一种苯硼酸 修饰树状大分子复合材 料的制备 方法， 包括： (1)将4‑溴甲基苯硼酸BPBA溶液、 第五代聚酰胺 ‑胺树状大分子G5.NH2溶液混合， 搅拌反 应， 透析， 冷冻干燥， 得到修饰有苯硼酸PBA的第五代聚酰胺 ‑胺PAMAM树状大分子G5 ‑PBA； (2)将G5‑PBA的水溶液中加入CuCl2·2H2O水溶液搅拌， 再加入Na2S·9H2O水溶液反应， 透析， 冷冻干燥， 得到修饰有 苯硼酸PBA的内部包裹硫化铜 纳米颗粒CuS的第五代聚酰胺 ‑胺 PAMAM树状大分子G5 ‑PBA@CuS； (3)将G5‑PBA@CuS溶液、 cGAMP溶液混合， 共同孵育， 得到苯硼酸修饰树状大分子复合材 料G5‑PBA@CuS/ cGAMP。 3.根据权利要求2所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中溶液的溶剂均为二甲基 亚砜DMSO； 所述4 ‑溴甲基苯硼酸BPBA与第 五代聚酰胺 ‑胺树状大分子G5.NH2的摩尔比为40 ～50:1； 所述 步骤(1)中搅拌 反应温度为70～80℃， 搅拌 反应时间为24～3 6小时。 4.根据权利要求2所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中G5 ‑PBA、 CuCl2·2H2O和 Na2S·9H2O的摩尔比为1:40～50:40～100； 所述步骤(2)中搅拌时间为15～30min； 反应温度 为70～80℃， 反应时间为10～ 20min。 5.根据权利要求1所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中溶液的溶剂均为PBS溶 液； 所述共同孵 育时间为15～3 0min。 6.根据权利要求1所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(1)～(2)中透析的条件为： 用 截留分子量 为8000～14000的透析袋透析2 ～3天。 7.一种纳米疫苗， 其特征在于， 权利要求1所述苯硼酸修饰树状大分子复合材料吸附肿 瘤抗原形成疫苗。 8.一种纳米疫苗的制备 方法， 包括： 收集对数生长期的B16 ‑F10细胞， 按照8 ×105～1×106个细胞每孔的密度接种在 培养皿 上， 于37℃、 5％CO2环境中培 养12～24h； 待B16‑F10细胞贴壁后更换含权利要求1所述苯硼酸修饰树状大分子 复合材料G5 ‑PBA@ CuS/cGAMP的无血清DMEM培养基， 使用1064nm激光照射5～8min， 48～ 60h后离心收集细胞悬 液， 用截留分子量 为100kD的超滤离心管进行分离， 收集离心管 下方的悬液， 即得纳米疫苗。 9.根据权利要求8所述制备方法， 其特征在于， 所述离心条件为： 8000～10000r/min， 离 心时间为5～8分钟。 10.一种权利要求8所述纳米疫苗在制备黑色素瘤的光热/免疫联合治疗药物中的应 用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115300638 A 2一种基于树状大分子包裹硫化铜纳米颗粒的肿瘤疫苗及其制 备和应用 技术领域 [0001]本发明属于功能性纳 米材料领域， 特别涉及一种基于树状大分子包裹硫化铜纳 米 颗粒的肿瘤疫苗及其制备和应用。 背景技术 [0002]免疫治疗逐渐成为应对恶性肿瘤的一大重要手段， 其通过激活机体免疫系统， 识 别并杀死特定的肿瘤细胞， 能够产生免疫记忆效应， 具有更为持久的疗效， 包括免疫检查点 阻断、 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR ‑T)、 T细胞受体工程化T细胞疗法(TCR ‑T)等在内的 免疫疗法已取得巨大成功。 近年来， 肿瘤疫苗作为免疫疗法的新兴成员， 引发了广泛关注。 肿瘤疫苗一般是将特异性且具有免疫原性的肿瘤抗原辅以激活性免疫佐剂一起导入患者 和体内， 激活或加强机体的抗肿瘤免疫反应， 进而 杀伤和清除肿瘤细胞， 并对肿瘤的发生进 行预防。 然而， 目前传统的肿瘤疫苗存在抗原/佐剂包载效率低、 淋巴结回流能力较差、 体内 利用率低和功能单一化等缺点， 导致疗效不佳。 随着纳米技术的快速发展， 基于各类生物材 料的纳米载体已经成为肿瘤治疗的强大平台， 将纳米载体应用于肿瘤疫苗的开发有望为上 述问题提供解决方案。 纳米载体可以通过静电相互作用、 疏水相互作用、 共价结合作用等多 种方式实现对抗原和佐剂的高效包载。 同时， 纳米载体易于多功能化， 有助于实现不同治疗 方式与免疫 治疗的联合， 克服单一肿瘤治疗 模式存在的缺 点。 [0003]在众多的纳 米载体材料中， 树状大分子具有高度支化、 结构稳定可控， 表面高官能 度， 低细胞毒性、 无免疫原 性等优势和特点， 是优良的载体基材。 其中， 特别表 面具有丰富氨 基的聚酰胺 ‑胺(PAMAM)树状大分子， 已被广泛应用于肿瘤的治疗和诊断研究中。 PAMAM树状 大分子是表面呈正电荷阳离子型多聚物， 因而在构建肿瘤疫苗上具有潜力， 一方面其能与 表现为负电荷的抗原及免疫佐剂产生良好相互作用， 另外蛋白质上的羧酸阴离子可以通过 离子相互作用与阳离子有效结合。 通过特定的功能化修饰或杂化过程， 可以进一步加强 PAMAM树状大分子与生物 物质的相互作用力。 [0004]目前， 检索国内外相关文献和专利， 未见基于树状大分子包裹硫化铜纳米颗粒的 肿瘤疫苗的相关研究报道。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种基于树状大分子包裹硫化铜纳米颗粒的 肿瘤疫苗及其制备和应用， 以填补现有技 术的空白。 [0006]本发明的一种苯硼酸修饰树状大分子复合材料， 所述复合材料为纳米载体负 载干 扰素基因刺激因子(STING)激动剂cGAMP； 其中纳米载体为表 面修饰苯硼酸PBA分子、 内部包 裹硫化铜纳米颗粒的第五代聚酰胺 ‑胺树状大分子G5.NH2。 [0007]本发明提供一种苯硼酸 修饰树状大分子复合材 料的制备 方法， 包括： [0008](1)将4‑溴甲基苯硼酸BPBA溶液、 第五代聚酰胺 ‑胺树状大分子G5.NH2溶液混合，说　明　书 1/14 页 3 CN 115300638 A 3