(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210999395.5 (22)申请日 2022.08.19 (71)申请人 上海市第一人民医院 地址 200080 上海市虹口区武进路85号 (72)发明人 金新蒙　汪红胜　许婧　孙伟　 华莹奇　 (74)专利代理 机构 上海申新 律师事务所 31272 专利代理师 郎祺 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/54(2017.01) A61K 31/44(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 31/198(2006.01) (54)发明名称 一种甘露糖修饰的纳米颗粒在制备治疗骨 肉瘤药物中的应用 (57)摘要 本发明涉及一种甘露糖修饰的纳米颗粒在 制备治疗骨肉瘤药物中的应用， 所述甘露糖修饰 的纳米颗粒含有瑞戈非尼和α ‑二氟甲基鸟氨 酸。 本发明制备的含有瑞戈非尼和α ‑二氟甲基 鸟氨酸的甘露糖修饰的纳米颗粒可以促进巨噬 细胞从M2表型向M1表型极化， 同时抑制血管的生 成， 产生协 同抗肿瘤的效果， 且全身毒性可忽略 不计。 此外， 巨噬细胞复极化促进免疫细胞的活 化(如增加CD8+T细胞浸润和减少Treg细胞)， 有 助于重编程骨肉瘤的肿瘤微环境。 权利要求书1页 说明书9页 附图5页 CN 115531555 A 2022.12.30 CN 115531555 A 1.一种甘露糖修饰的纳米颗粒在制备治疗骨肉瘤药物中的应用， 其特征在于， 所述甘 露糖修饰的纳米颗粒含 瑞戈非尼和 α ‑二氟甲基鸟氨酸。 2.一种甘露糖修饰的纳米颗粒的制备方法， 所述甘露糖修饰的纳米颗粒含有瑞戈非尼 和 α‑二氟甲基鸟氨酸， 其特 征在于， 步骤 包括： S1、 将α‑二氟甲基鸟氨酸的水溶液加至甘露糖修饰 的PLGA‑PEG的二氯甲烷溶液中， 将 瑞戈非尼的二甲基亚砜溶 液在搅拌下缓慢地 滴加至混合溶 液中， 于冰上超声得到w/o乳液； S2、 将步骤S1所得到的所述w/o乳液加至第一聚乙烯醇水溶液中， 于冰浴超声均质得到 w/o/w乳液； S3、 将步骤S2所得到的所述w/o/w乳液加至第二聚乙烯醇水溶液中， 于室温下缓慢搅拌 过夜， 去离 子水清洗若干次后， 冷冻干燥， 即得 所述甘露糖修饰的纳米颗粒。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述瑞戈非尼的二甲基亚砜溶液的浓 度为10mg/mL。 4.根据权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述甘露糖修饰的PLGA ‑PEG的制备步 骤包括： S1‑1、 将PLGA ‑PEG纳米颗粒溶解于2 ‑(N‑吗啡)乙磺酸缓冲液中， 并添加过量 的N‑羟基 琥珀酰亚胺以及1 ‑(3‑二甲基氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺， 搅拌一段时间后， 将4 ‑异硫氢酸 苯基‑A‑D‑甘露糖苷加至混合溶 液中， 并于室温下搅拌过夜； S1‑2、 用冷乙醚以及甲醇沉淀甘露糖修饰 的PLGA‑PEG， 并去除未反应 的4‑异硫氢酸苯 基‑A‑D‑甘露糖苷以及过量的反应物后， 真空干燥， 即得。 5.根据权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述甘露糖修饰的PLGA ‑PEG的二氯甲 烷溶液的浓度为10 0mg/mL。 6.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述α ‑二氟甲基鸟氨酸的水溶液的浓 度为50mg/mL。 7.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述第一聚乙烯醇水溶液的浓度为 1.0％， w/v。 8.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述第二聚乙烯醇水溶液的浓度为 0.3％， w/v。 9.一种如权利要求2 ‑8任一项所述制备 方法制得的甘露糖修饰的纳米颗粒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115531555 A 2一种甘露糖修饰的纳米颗粒在制备治疗骨肉瘤药物中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医药技术领域， 尤其涉及 一种甘露糖修饰的纳 米颗粒在制备治疗 骨肉瘤药物中的应用。 背景技术 [0002]骨肉瘤(OS)是一种起源于间充质组织的原发性骨恶性肿瘤， 最常见于儿童和青少 年。 免疫治疗在癌症治疗中的成功依赖于肿瘤细胞与宿主免疫反应之间的有益相互作用。 然而， 骨肉瘤被认为是相对的 “冷肿瘤”， 由于PD‑L1的低表达， 其对免疫检查点抑制剂PD ‑1 和PD‑L1的反应较差。 低肿瘤浸润 淋巴细胞(TILs)， 包括缺 乏CD8+T细胞以及高免疫抑制细 胞群， 如调节性T细胞(Tregs)、 骨髓源性抑制细胞(MDSCs)和巨噬细胞， 可能限制免疫治疗 的益处， 从而导 致骨肉瘤预后不良。 [0003]肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)作为骨肉瘤微环境中主要的浸润性免疫细胞， 与肿瘤血 管生成、 免疫抑制、 进展和转移密切相关。 根据极化状态和功能的不同， TAMs分为抗肿 瘤M1 表型(称为TAM1)和促肿瘤M2表型(称为TAM2)。 TAM1可以释放细胞毒性化学物质， 如肿瘤坏 死因子‑α(TNF‑α )和干扰素 ‑γ(IFN‑γ)， 以增强免疫反应并攻击肿瘤细胞。 TAM2浸润倾向 于促进肿瘤血管生成和免疫逃逸， 最 终导致肿瘤进展和转移。 相反， 血管生 成也可以也可以 通过极化M2 表型的巨噬细胞， 抑制免疫系统来调节免疫应答。 [0004]使用多激酶抑制剂和抗血管内皮生长因子单克 隆抗体阻断VEGF/VEGFR信号通路 抑制新生血管形成是影响TME中免疫细胞群的一种治疗策略。 瑞戈非尼是一种FDA批准的多 激酶抑制剂， 通过靶向参与调节细胞信号转导和肿瘤血管生成的致癌激酶来抑制肿瘤进 展。 更重要的是， 瑞戈非尼可将M2型TAMs转化为M1型， 诱导T细胞活化， 并与抗PD ‑1致敏肿瘤 结合以实现协同免疫调节作用。 然而， 由于对VE GF/VEGFR信号阻断， 瑞戈非尼产生了对生理 性血管生 成的抑制的不良反应。 在II期临床试验中， 与安慰剂相比， 瑞戈非尼显著 提高了晚 期骨肉瘤患者的无进展生存期， 但在总生存期上没有明显的统计学差异。 因此， 从单一靶点 到多靶点治疗方法的转变对于触发宿主免疫系统和提供长期疗效至关重要。 [0005]抗血管生成治疗已被证明对肿瘤微环境有一定影响， 但最近发现其他的药物治疗 也可以调节免疫系统。 特别 是， 多胺阻断疗法(PBT)涉及多胺生物合成和转运的抑制， 在免 疫活性荷瘤小鼠中显著抑制肿瘤 进展， 但在缺乏T细胞的裸鼠中没有发生。 肿瘤中多胺水平 显著升高， 对肿瘤生存至关重要， 这有助于肿瘤免疫抑制、 血管生成和细胞增殖。 α ‑二氟甲 基鸟氨酸(DFMO)是一种FDA批准的鸟氨酸脱羧酶(ODC)抑制剂， 可以阻断多胺生物合成。 在 具有免疫功能的小鼠中， DFMO治疗已被证明可以通过增加CD8+T细胞浸润和降低MDSCs活性 来抑制肿瘤生长。 因此， PBT联合抗血管生成治疗可能是提高免疫治疗效果、 降低药物毒副 作用以及重塑骨肉瘤微环境的可 行方案。 [0006]基于甘露糖受体在TAMs和骨肉瘤细胞上的大量表达， 因此， 亟需一种甘露糖修饰 的纳米颗粒在制备治疗骨肉瘤药物中的应用。说　明　书 1/9 页 3 CN 115531555 A 3