(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211037496.0 (22)申请日 2022.08.29 (71)申请人 新乡医学院 地址 453003 河南省新乡市金穗大道6 01号 (72)发明人 郝永伟　周婷　陈红丽　南文滨　 姬盛路　解丽芹　宋青霞　李雪　 (74)专利代理 机构 郑州天阳专利事务所(普通 合伙) 41113 专利代理师 李松莲 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 47/62(2017.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 31/551(2006.01)A61K 33/32(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 15/14(2006.01) (54)发明名称 一种碳自由基和免疫调节协同治疗肿瘤的 纳米药物粒子的制备方法及应用 (57)摘要 一种碳自由基和免疫调节协同治疗肿瘤的 纳米药物粒子的制备方法， 是先由碳酸锰、 JQ1和 AIPH制成MnCO3/AIPH/JQ1纳米粒， 再由DSPE ‑ PEG2000‑Mal包裹及肿瘤靶向基团LyP ‑1修饰而 成； 先将AIPH装载于介孔碳酸锰纳米粒中， 得 MnCO3/AIPH纳米粒水溶液， 然后将大豆磷脂、 JQ1、 DSPE ‑PEG2000‑Mal共溶于氯仿， 置于茄形瓶 旋蒸后， 再加入MnCO3/AIPH纳米粒水溶液， 得 MnCO3/AIPH/JQ1纳米粒， 再加入LyP ‑1进行修饰， 即得MnCO3/AIPH/JQ1/LyP ‑1纳米粒。 方法稳定可 靠， 原料价格低廉且来源广泛。 所制备的纳米粒 具有的介孔结构可以负载药物； 本发 明将碳自由 基引发剂AIPH和小分子抑制剂JQ1联合用于肿瘤 治疗， AIPH装载于碳酸锰纳米粒中， 而JQ1装载于 碳酸锰纳米粒表面的脂质层中， 既克服了肿瘤乏 氧对于自由基疗法的限制， 又避免了免疫逃逸， 社会和经济效益显著。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115252822 A 2022.11.01 CN 115252822 A 1.一种碳自由基和免疫调节协同治疗肿瘤的纳米药物粒子的制备方法， 其特征在于， 是先由碳酸锰、 JQ1和AIPH制成MnCO3/AIPH/JQ1纳米粒， 再由DSPE ‑PEG2000‑Mal包裹及肿瘤 靶向基团LyP ‑1修饰而成； 其中， 先通过物理搅拌将AIPH装载于介孔碳酸锰纳米粒中， 得 MnCO3/AIPH纳米粒水溶液， 然后将大豆磷脂、 JQ1、 DSPE ‑PEG2000‑Mal共溶于氯仿， 置于茄形 瓶旋蒸后， 得脂质薄膜， 再加入M nCO3/AIPH纳米粒水溶液， 旋 转孵育， 得M nCO3/AIPH/JQ1纳米 粒， 再加入LyP ‑1进行修饰， 搅拌 反应即得MnCO3/AIPH/JQ1/LyP ‑1纳米粒。 2.根据权利要求1所述的碳自由基和免疫调节协同治疗肿瘤的纳米药物粒子的制备方 法， 其特征在于， 包括以下步骤： （1） 介孔碳酸锰纳米粒制备： 取1.0  g溴化十六烷基三甲基胺， 加入 甲苯和正戊醇的混 合溶液中， 缓慢滴加0.75  mol/L氯化锰溶液， 300  rpm搅拌15  min至澄清， 得第一溶液； 再取 1.0 g溴化十六烷基三甲基胺， 加入甲苯和正戊醇的混合溶液中， 然后缓慢滴加0.75  mol/L 碳酸铵溶液， 300  rpm搅拌15  min至澄清， 得第二溶液； 将第一溶液和第二溶液混合， 搅拌均 匀后， 密封于反应釜中， 120℃反应4  h， 反应结束后， 取出溶液， 加入120  mL乙醇， 混匀后静 置1h， 12000  rpm离心10  min， 得沉淀， 沉淀用120  mL去离子水分散洗涤， 如此重复洗涤3次 后， 45 ℃真空干燥12  h， 即得介孔 碳酸锰纳米粒； 所述甲苯的体积30  mL， 甲苯与正戊醇的体积比为10 ‑20： 1， 氯化锰的滴加体积为0.5 ‑1  mL， 碳酸铵的滴加体积为0.5  ml‑1 mL； （2） MnCO3/AIPH的制备： 将4.0  mg介孔碳酸锰纳米粒溶于16.0  mL超纯水中， 超声分散 后， 加入1 ‑8 mg AIPH， 避光磁力搅拌24  h， 然后12 000 rpm离心2 0 min， 收集沉淀， 加入2  mL 去离子水， 超声分散， 即得MnCO3/AIPH纳米粒 水溶液； （3） 脂质薄膜的制备： 取大豆磷脂、 JQ1、 DSPE ‑PEG‑Mal于茄形瓶中， 加入2  mL氯仿， 超声 溶解， 45℃， 2 00 rpm， 0.04 ‑0.05 MPa旋蒸30  min， 得脂质薄膜； 其中， 大豆磷脂、 JQ1和DSPE ‑ PEG‑Mal的质量比为15:1:1， 大豆磷脂为15  mg； （4） MnCO3/AIPH/JQ1/LyP ‑1纳米粒的制备： 将2  mL MnCO3/AIPH纳米粒水溶液分散于水 中， 加入步骤 （3） 所述的茄形瓶中， 与脂质薄膜混合， 200  rpm室温旋转孵育30  min， 即得 MnCO3/AIPH/JQ1纳米粒， 再加入 0.1‑1 mg LyP‑1， 室温避光搅拌12  h， 即得MnCO3/AIPH/JQ1/ LyP‑1纳米粒。 3.根据权利要求2所述的碳自由基和免疫调节协同治疗肿瘤的纳米药物粒子的制备方 法， 其特征在于， 所述 步骤 （1） 中介孔 碳酸锰纳米粒的尺寸 为100 nm‑150 nm。 4.权利要求1 ‑3任一项所述方法制备的纳米药物粒子在肿瘤碳自由基和免疫调剂治疗 药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115252822 A 2一种碳自由基和免疫调节协同治疗肿瘤的纳米药物粒子的制 备方法及应用 技术领域 [0001]本发明医药技术领域， 特别是一种碳自由基和免疫调节协同治疗肿瘤的纳米药物 粒子的制备 方法及应用。 背景技术 [0002]乳腺癌是影响女性健康的恶性疾病之一。 乳腺癌具有快速转移的特点， 传统的治 疗方式化疗易导致癌症的复发， 也影响患者预后。 如何利用有效治疗手段抑制原位肿瘤及 转移灶生长是转移性乳腺癌治疗中 需要解决的关键问题。 [0003]光敏剂在激光的作用下， 可以产生能够杀伤肿瘤的单线态氧。 但该过程还需要氧 气的参与。 因此， 肿瘤的乏氧状态不利于肿瘤的光动力治疗。 相比于光子和质子放疗对肿瘤 DNA是以单链裂解为主， 碳离子治疗对肿瘤DNA以双链断裂为主， 显示出更高效的杀灭效应。 遗憾的是， 临床上的碳离子治疗需要 特殊的放疗设备。 利用化学原理， 利用碳自由基引发剂 以产生碳自由基用于肿瘤治疗值得进一步探索。 有研 究证明2,2 ‑偶氮双[2 ‑(2‑咪唑啉‑2‑ 基)丙烷]二盐酸盐((2,2 ’ ‑azobis[2 ‑(2‑imidazolin ‑2‑yl)propane]  dihydrochloride， AIPH)易溶于水， 进入细胞后在外界热刺激下会加速产生一种碳自由基。 该自由基的产生不 需要氧气参与， 却也能够诱导氧化损伤， 进而 杀伤肿瘤细胞。 但是， 该过程也会促进γ ‑干扰 素的分泌， 导致肿瘤细胞程序性死亡配体1(Programme d cell death ligand 1， PD‑L1)升 高。 PD‑L1升高不利于调动免疫系统进行抗肿瘤治疗， 进而也限制了该疗法在临床中的应 用。 研究表明， 转移 性乳腺癌对原发灶和转移灶的PD ‑L1均有高表达的趋势。 遗憾的是， 一些 乳腺癌患者对PD ‑L1抑制剂的治疗响应仍然有限。 一方面， 肿瘤部位缺乏细胞毒性T细胞直 接影响疗效。 另一方面， 易转移 性乳腺癌分泌的携带PD ‑L1的外泌体和肿瘤细胞表 面的糖基 化PD‑L1， 也分别参与免疫治疗抵抗。 鉴于乳 腺癌细胞表 面PD‑L1的高表达作用， 使 得肿瘤治 疗受到一定的限制。 因此， 迫切需要应用适应性免疫检查点PD ‑L1的抑制剂， 以期深层次逆 转乳腺癌的免疫耐受。 研 究发现， 小分子抑制剂JQ1可以抑制PD ‑L1的表达。 但是， 目前尚无 AIPH和JQ1的联用报道， 因此基于AIPH和JQ1的纳米药物的开发以实现高效肿瘤碳自由基疗 法和免疫调节联合具有实际应用价 值。 发明内容 [0004]针对上述情况， 为克服现有技术之缺陷， 本发明之目的就是提供一种碳自由基和 免疫调节协同治疗肿瘤的纳米药物粒子的制备方法及应用， 可有效解决目前尚无AIPH和 JQ1的联用 用以治疗肿瘤的问题。 [0005]为实现上述目的， 本发明解决的技术方案是， 一种碳自由基和免疫调节协同治疗 肿瘤的纳米药物粒子的制备方法， 是先由碳酸锰、 JQ1和AIPH制成MnCO3/AIPH/JQ1纳米粒， 再由DSPE ‑PEG2000‑Mal包裹及肿瘤靶向基团LyP ‑1修饰而成； 其中， 先通过物理搅拌将AIPH 装载于介孔碳酸锰纳米粒中， 得MnCO3/AIPH纳米粒水溶液， 然后将大豆磷脂、 JQ1、 DSPE ‑说　明　书 1/4 页 3 CN 115252822 A 3