(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221084158 8.8 (22)申请日 2022.07.18 (71)申请人 河南大学 地址 475000 河南省开封市顺河回族区明 伦街85号 (72)发明人 师冰洋　郑蒙　邹艳　杨青山　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 宋南 (51)Int.Cl. A61K 48/00(2006.01) A61K 47/62(2017.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 47/54(2017.01) A61K 47/69(2017.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A61P 7/04(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 一种纳米组合物、 制备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种纳米组合物、 制备方法及 应用， 涉及肿瘤治疗技术领域。 其包括内核和静 电吸附于内核外周的外壳， 内核包括腺相关病毒 载体， 外壳的包裹使 得纳米组合物整体具有免疫 逃逸的结果， 并且能够延长其在血液中的循环时 间， 从而避免了裸露的病毒注 射到人体内由于中 和抗体的存在降低了转染效果， 有利于提升基因 治疗效果。 另外， 发明人在外壳上连接有靶向剂， 使得整个纳米组合物实现对目标组织或细胞的 靶向效果。 本发 明提供的纳米组合物可以满足静 脉注射的需求， 避免了原位注 射对患者带来创伤 性手术的损伤和风险， 无创性的注 射能够更好的 利用腺相关病毒 优秀的转染效率。 权利要求书2页 说明书10页 附图8页 CN 115054704 A 2022.09.16 CN 115054704 A 1.一种纳米组合物， 其特征在于， 其包括内核和静电吸附于所述内核外周的外壳， 所述 内核包括腺相关病毒载体， 所述外壳的原料包括带正电单体、 肿瘤微环境敏感性分子和丙 烯酸酯聚乙二醇琥珀 酰羧甲酯， 其中， 所述带正电单体静电吸 附于所述腺相关病毒载体的 蛋白外壳， 所述丙烯 酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯通过所述肿瘤微环境敏感性分子与所述正 电单体连接， 所述丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰 羧甲酯上还连接有靶向剂以靶向目标细胞。 2.根据权利要求1所述的纳米组合物， 其特征在于， 所述腺相关病 毒载体为重组腺相关 病毒； 优选地， 所述重组腺相关病毒携带有肿瘤治疗基因或神经退行性疾病治疗基因； 优选 地， 所述肿瘤治疗基因选自肿瘤坏死因子超家族、 抑癌基因、 细胞因子基因、 促细胞凋亡基 因、 血管抑制基因、 自杀基因或其他基因； 所述其他基因选自sflt ‑1、 Omi、 Bax或Eorf4； 所述 神经退行性疾病治疗基因选自Tau基因和 /或SNCA基因及其它能够导致神经退行性疾病发 生的基因； 优选地， 所述肿瘤坏死因子超家族选自TRAI L； 所述抑癌基因选自p53、 PTEN、 Rb、 NF1、 VHL或APC； 所述细胞因子基因选自IL ‑2、 IL‑12、 IL‑24、 GM‑CSF、 IFN ‑a、 IFN‑β或IFN‑Y； 所述促细胞凋亡基因选自TRAIL、 Bax、 Caspase或 Smac； 所述血管抑制基因选自angiostatin、 sflt ‑l或endostatin； 所述自杀基因选自cd或 tk； 优选地， 所述Caspase选自Caspase ‑3或Caspase ‑7； 所述angiostatin选自angiostatin  kl、 angiostatin  k2、 angiostatin  k3、 angiostatin k4或angiostatin k5。 3.根据权利要求2所述的纳米组合物， 其特征在于， 所述带正电单体为胍基丙烯酸酯； 优选地， 所述肿瘤微环 境敏感性分子选自还原敏感性分子、 酸敏感性分子和ROS响应 分子中 的至少一种； 优选地， 所述肿瘤微环境敏感性分子选自还原敏感性分子； 优选地， 所述还原敏感性分 子为包含二硫键的分子； 优选地， 所述还原敏感性分子为 N,N’ ‑双(丙烯酰)胱胺； 优选地， 所述靶向剂为载脂蛋白E肽。 4.根据权利要求1所述的纳米组合物， 其特征在于， 所述目的细胞为脑胶质瘤、 非小细 胞肺癌或宫颈癌； 优选地， 所述 目的细胞为脑胶质瘤， 更优选地， 所述 目的细胞为胶质母细 胞瘤。 5.根据权利要求3所述的纳米组合物， 其特征在于， 所述纳米组合物中， 所述带正电单 体、 丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯和肿瘤微环 境敏感性分子的摩尔比为 1‑3:1‑3:1‑3， 优 选为1:1： 1； 所述腺相关病毒载体与所述丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯的质量 比为1: 200‑1： 220。 6.根据权利要求3所述的纳米组合物， 其特征在于， 所述靶向剂与所述丙烯酸酯聚乙二 醇琥珀酰 羧甲酯的摩尔比为1:3 。 7.一种如权利要求1 ‑6任一项所述的纳米组合物 的制备方法， 其特征在于， 其包括： 将 腺相关病毒载体、 带正电单体、 肿瘤微环境敏感性分子和丙烯酸酯聚乙二醇琥珀 酰羧甲酯 混合， 反应制得 所述纳米组合物。 8.根据权利要求7所述的纳米组合物的制备方法， 其特征在于， 所述混合包括先将腺相权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115054704 A 2关病毒载体与胍基丙烯酸酯混合， 在丙烯酸酯聚乙二醇琥珀 酰羧甲酯上修饰靶向剂， 然后 将修饰有靶向剂的丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯、 腺相关病毒载体与胍基丙烯酸酯的结 合体、 肿瘤微环境敏感性分子混合进行聚合反应； 所述聚合反应还包括加入催化剂和加速剂； 优选地， 所述催化剂为过硫酸铵， 所述加速 剂为四甲基乙二胺； 优选地， 腺相关病毒载体与胍基丙烯酸酯的混合是在HPEPS缓冲液中进行， 反应温度为 0‑4℃； 优选地， 所述聚合反应在隔绝氧气的环境下进行； 所述丙烯酸酯聚乙二醇琥珀酰羧甲酯上修饰靶向剂是在37 ‑40℃下避光反应， 所述反 应时间为18 ‑24h； 优选地， 反应后进行透析。 9.一种如权利要求1 ‑6任一项所述的纳米组合物在制备脑部疾病治疗药物中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述脑部疾病为脑部原发性肿瘤、 脑部继 发性肿瘤、 脑部血 管性疾病； 优选地， 所述脑部原发性肿瘤为脑胶质瘤； 所述脑部继发性肿瘤为肺癌、 乳腺癌、 前列 腺癌或结直肠癌发生的脑部转移； 所述脑部血 管性疾病为颅内动脉瘤或高血压性脑出 血。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115054704 A 3