(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210873001.1 (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 长沙医学院 地址 410219 湖南省长 沙市望城区雷锋大 道1501号 (72)发明人 门孝菊　陈昊彬　吴长锋　张哲　 李海刚　何彬生　 (74)专利代理 机构 长沙惟盛赟鼎知识产权代理 事务所(普通 合伙) 43228 专利代理师 张丁日 (51)Int.Cl. A61K 49/00(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01)B82Y 40/00(2011.01) B82Y 20/00(2011.01) C08G 61/12(2006.01) (54)发明名称 一种胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针及 其制备方法与应用 (57)摘要 本发明公开了一种胶质瘤细胞膜包覆的聚 合物点探针及其制备方法与应用， 属于半导体聚 合物纳米材料技术领域。 利用共轭聚合物 PTZTPA‑BBT和功能聚合物PS ‑PEG‑COOH通过纳米 沉淀法制备获得聚合物点(Pdots)。 使用细胞膜 蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒， 从收获的C6胶质 瘤细胞中提取细胞膜成分。 将聚合物 点和细胞膜 成分混合， 使用脂质体挤出器反复10次挤压， 从 而使得纯化的C6膜蛋白连接到聚合物点的表面， 从而获得Pdots ‑C6。 本发明将胶质瘤细胞膜融合 到聚合物 点的表面， 使 得包覆后的聚合物点探针 穿越血脑屏障的能力大大增强， 根据同源靶向机 制， 胶质瘤细胞膜包覆的聚合物 点能够实现活体 脑胶质瘤的近红外二区荧 光成像。 权利要求书2页 说明书7页 附图4页 CN 115252825 A 2022.11.01 CN 115252825 A 1.一种胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针， 其特征在于， 所述探针包括聚合物点和包 覆在聚合物点上 的胶质瘤细胞膜， 胶质瘤细胞膜的膜蛋白与聚合物点连接； 所述聚合物点 至少包括结构如式 Ⅰ的共轭聚合物和结构如式I I所示的功能 聚合物； 2.根据权利要求1所述的一种胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针， 其特征在于， 所述共 轭聚合物由PTZTPA ‑DOB和BBT‑DBr通过Suzuk i聚合反应制得。 3.根据权利要求2所述的一种胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针， 其特征在于， 所述 PTZTPA‑DOB和BBT‑DBr的摩尔比为1∶ 1。 4.根据权利要求1所述的一种胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针， 其特征在于， 所述 聚 合物点中共 轭聚合物和功能 聚合物的质量比为10:3 。 5.根据权利要求1所述的一种胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针， 其特征在于， 所述胶 质瘤细胞膜的膜蛋白与聚合物点的质量比为3:2。 6.权利要求1 ‑5任一项所述的一种胶质瘤细胞膜包覆 的聚合物点探针的制备方法， 其 特征在于， 包括以下步骤： S1、 共轭聚合物PTZTPA ‑BBT的合成 取50mL圆底烧瓶， 分别加入0.5mmol的PTZTPA ‑DOB和BBT ‑DBr、 2M碳酸钾水溶液4mL、 0.03mmol的四(三苯基膦)钯和甲苯20mL， 密封； 进行3次冻干 ‑抽泵‑解冻的循环对烧瓶进行 脱气； 将混合物加热至80℃保持48小时并在冷却至室温后用水洗涤； 将有机层浓缩并在搅 拌下滴入200mL甲醇中； 将溶液过滤， 沉淀物以已丙酮为溶剂， 通过索氏萃 取进一步纯化， 最 终得到深绿色固体产物PTZTPA ‑BBT； S2、 C6胶质瘤细胞膜的提取权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115252825 A 2采用试剂盒提取胶质瘤细 胞膜； 首先， 使用175T细胞培养瓶培养C6胶质瘤细胞约2000 ‑ 5000万个， 用磷酸盐缓冲液冲洗一遍， 用细胞刮子刮下细胞， 离心收集细胞， 吸 除上清液， 留 下细胞沉淀备用； 用适量冰浴预冷的磷酸盐缓冲液轻轻重悬细胞沉淀， 4℃， 600g离心5min 沉淀细胞， 弃上清液； 取2mL膜蛋白抽提试剂A加入 苯甲基磺酰氟， 使 苯甲基磺酰氟的最 终浓 度为1mM， 把2mL临用前添加了甲基磺酰氟的膜蛋白抽提试剂A加 入至2000 ‑5000万细胞中， 轻轻并充分悬浮细胞， 冰浴放置15分钟； 把细胞悬液转移到玻璃匀浆器中， 匀浆约50下； 4 ℃， 700g离心10分钟， 去除细胞核和未破碎的细胞， 收集上清液至一新的离心管中； 4℃， 14000g离心30分钟， 沉淀即为细胞膜 碎片； S3、 Pdots ‑C6的制备 将共轭聚合物PTZTPA ‑BBT和功能聚合物PS ‑PEG‑COOH溶解在3mL四氢呋喃中得到混合 溶液， 混合溶液中PTZTPA ‑BBT浓度为100 μg ·mL‑1， PS‑PEG‑COOH的浓度为30 μg ·mL‑1； 然后 将混合溶液快速倒入10 mL超纯水中， 并在剧烈超声作用下持续震 荡3分钟； 然后将所得悬浮 液在氮气保护下加热除去四氢呋喃； 浓缩后使用220nm过滤膜过滤除去尺 寸较大的聚集体； 从而获得Pdots溶液， 然后将S2提取的胶质瘤膜蛋白与Pdots溶液混合， 其中膜蛋白与Pdots 的质量比为3:2， 使用脂质体挤出器挤压通过200nm的滤膜， 挤压重复10次， 使 得纯化的C6膜 蛋白连接 到聚合物点的表面， 从而获得Pdots ‑C6纳米探针。 7.根据权利要求6所述的胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针的制备方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述混合溶 液中还包括0‑100 μg·mL‑1的PFBT。 8.权利要求1 ‑5任一项所述的一种胶质瘤细胞膜包覆 的聚合物点探针在荧光成像和/ 或荧光传感中的应用。 9.权利要求1 ‑5任一项所述的一种胶质瘤细胞膜包覆的聚合物点探针在制备治疗颅 内 胶质瘤药物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115252825 A 3