(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210973221.1 (22)申请日 2022.08.15 (71)申请人 中山大学附属第五医院 地址 519000 广东省珠海市香洲区梅 华东 路52号 (72)发明人 黄曦　穆罕默德·尤尼斯　 (74)专利代理 机构 广州正明知识产权代理事务 所(普通合伙) 44572 专利代理师 成姗 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 31/352(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 47/46(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 一种负载艾拉莫德-铑纳米颗粒的PD-1纳米 囊泡及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一 种负载艾拉莫德 ‑铑纳米颗粒的PD ‑1纳米囊泡及 其制备方法和应用。 本发明提供了一种负载艾拉 莫德‑铑纳米颗粒的PD ‑1纳米囊泡， 以PD ‑1纳米 囊泡为承药载体， 包裹艾拉莫德和铑纳米颗粒。 所述纳米囊泡具有抗肿瘤生长和抗肿瘤转移的 作用。 首先， 所述纳米囊泡表达PD ‑1受体， 通过破 坏PD‑1/PD‑L1免疫抑制 轴增强癌症免疫疗法； 其 次， IGU通过抑制AKT/mTOR通 路提供化疗功能； 最 后， Rh通过JNK/ERK通路进行光热治疗抑制肿瘤 生长。 因此， 该联合疗法可为肿瘤治疗提供一种 新的思路， 展现出良好的临床应用前 景。 权利要求书1页 说明书6页 附图5页 CN 115501334 A 2022.12.23 CN 115501334 A 1.一种负载艾拉莫德 ‑铑纳米颗粒的PD ‑1纳米囊泡， 其特征在于， 以PD ‑1纳米囊泡为承 药载体， 包裹艾拉莫德和铑纳米颗粒。 2.一种权利要求1所述负载艾拉莫德 ‑铑纳米颗粒的PD ‑1纳米囊泡的制备方法， 其特征 在于， 包括以下步骤： S1、 表达PD ‑1细胞膜来源的纳米囊泡的制备： 构 建稳定表达PD ‑1的细胞， 收集细胞并将 其悬浮于分离缓冲液中， 经均质研磨后离心收集上清液， 上清液再经离心弃上清得到质膜 沉淀， 质膜沉淀经洗涤纯化， 超声处 理后采用聚碳 酸酯膜挤出器挤压， 得到纳米囊泡； S2、 采用电穿 孔技术将铑纳米颗粒和艾拉莫德引入步骤S1所 得纳米囊泡。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S1所述稳定表达PD ‑1的细胞为 HEK293T、 HepG2、 Huh ‑7、 Hepa1‑6、 SK‑Hep‑1、 淋巴细胞中的任意 一种。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S2所述纳米囊泡： 艾拉莫德： 铑纳 米颗粒的用量比为1:1:2。 5.权利要求1所述的一种负载艾拉莫德 ‑铑纳米颗粒的PD ‑1纳米囊泡在制备肿瘤治疗 药物中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤包括肝癌、 肺癌、 食管癌、 胃癌、 黑 色素瘤、 结直肠癌、 膀胱癌、 胰腺癌、 卵巢癌、 乳腺癌、 神经母细胞瘤。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤为肺癌。 8.根据权利要求5 ‑7任一所述的应用， 其特 征在于， 所述药物用于抑制肿瘤 细胞增殖。 9.根据权利要求5 ‑7任一所述的应用， 其特 征在于， 所述药物用于抑制肿瘤 细胞转移。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115501334 A 2一种负载艾拉莫德 ‑铑纳米颗粒的PD ‑1纳米囊泡及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一种负载艾拉莫德 ‑铑纳米颗粒的PD ‑1 纳米囊泡及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]肺癌是全世界癌 症相关死亡的最常见原因。 每年有180万人被确诊患有肺癌， 其中 有160万人死于这种疾病。 尽管在不同时期和不同地区存在差异， 但肺癌总体的5年生存率 仅为4‑17％。 联合疗法是一个重要的治疗肺癌方案， 它通过同时调节多种细胞信号通路， 克 服肿瘤的多重耐药， 具有协同治疗作用， 并降低全身 毒性。 [0003]癌症免疫疗法的目的是利用人体免疫系统来消灭癌细胞。 其中， 针对程序性死亡 ‑ 1(programmed death‑1,PD‑1)和程序 性死亡配体1(programmed  death‑ligand 1,PD‑L1) 通路的免疫检查点阻滞(immune  checkpoint  blockade,ICB)方法在部分类型的癌症如黑 色素瘤、 肾细胞癌、 非小细胞肺癌、 膀胱癌等发挥了显著的临床效果。 PD ‑L1是PD‑1的配体， 在癌细胞中表达上调， 抑制效应T细胞。 因此， 通过抗体阻断PD ‑1和PD‑L1之间的相互作用， 可以增强T细胞对癌细胞的免疫应答。 [0004]然而， 抗PD ‑1治疗并不是对所有类型的癌 症都有效， 仅仅只有少数患者从ICB疗法 中受益。 同时， 现有的人源化抗体大多来自小鼠， 需要复杂的设计和分离过程， 增加了制作 成本， 导致免疫检查点阻滞抗体治疗的费用对许多患者来说仍然 无法负担。 因此， 需要开 发 一种替代或者改进P D‑1/PD‑L1抑制剂的方法。 [0005]光动力疗法(photodynamic  therapy,PDT)由于其高选择性， 可防止健康组织受 损， 有望替代传统方法来治疗不同类型 的癌症。 由于纳米材料具有独特 的结构特征和功 能 特性， 在光动力疗法中使用纳米材料比传统的光敏剂有多重优势。 有意思的是在金属纳米 颗粒的使用中发现， 它能够吸收电磁辐射， 并将这种能量转移到氧分子中以产生活性氧 (ROS)， 或者将其作为热量散发出去。 尽管之前的报道已经证明了Rh衍生物具有作为抗肿瘤 药物的能力， 但据我们 所知， 还没有关于Rh纳米颗粒作为光敏剂在光动力治疗中的潜在应 用的研究。 [0006]此外， 艾拉莫德是一种新型的抗风湿病药物， 目前在中国和日本广 泛使用。 以往的 研究表明， 艾拉莫德具有抗炎作用。 在体外实验中， 艾拉莫德能 降低单核巨噬细胞、 滑膜成 纤维细胞和肺泡巨噬细胞中白细胞介素 ‑6(IL‑6)、 肿瘤坏死因子 ‑α(TNF‑α )、 白细胞介素 ‑1 (IL‑1)和白细胞介素 ‑8(IL‑8)的表达 。 发明内容 [0007]针对目前现有技术存在的单一疗法效果不佳的缺陷和不足， 本发明提供了一种工 程化细胞膜来源表达PD ‑1的纳米囊泡(PD ‑1NVs)， 它通过抑制PD ‑1/PD‑L1信号轴来增强癌 症免疫疗法， 本发 明以PD‑1仿生纳米囊泡为承 药载体， 分别装载艾拉莫德(IGU)作为化疗剂说　明　书 1/6 页 3 CN 115501334 A 3