(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210938574.8 (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 苏州大学 地址 215137 江苏省苏州市相城区济学路8 号 (72)发明人 陈华兵　杨红　李明　柯亨特　 翟艳华　汪媛　林雪花　杨一帆　 赵振铎　王璐　 (74)专利代理 机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 3210 3 专利代理师 孙周强　陶海锋 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 31/704(2006.01)A61K 41/00(2020.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) A61K 49/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 一种载药红细胞膜纳米粒及其制备方法和 应用 (57)摘要 本发明公开了一种载药红细胞膜纳米粒及 其制备方法和应用。 以红细胞膜为反应器， 在水 相中制备具有光响应性药物释放功能的红细胞 膜仿生纳米粒， 该纳米粒具有良好的光热效果、 物理化学稳定性、 光稳定性、 肿瘤靶向性、 肿瘤深 部穿透和响应性药物释放， 准确定位肿瘤， 在近 红外光激发下产生高效光热效应， 热消融杀死肿 瘤细胞， 实现了高效安全、 可视化精准治疗肿瘤， 具有进一步开发应用于临床的潜力。 权利要求书1页 说明书15页 附图8页 CN 115252580 A 2022.11.01 CN 115252580 A 1.一种载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 将红细胞膜与阴离子反应前体 混合后挤出， 得到阴离子反应前体红细胞膜囊泡； 再将阴离子反应前体红细胞膜囊泡与阳 离子反应前体混合反应， 得到载 药红细胞膜纳米粒。 2.根据权利要求1所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 由红细胞低 渗处 理得到红细胞膜。 3.根据权利要求2所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 将红细胞悬于低 渗缓冲液中， 静置后离心处 理， 得到红细胞膜。 4.根据权利要求3所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 静置为冰浴静置 20～40分钟， 离心处 理为3000～4000g处理10～20分钟。 5.根据权利要求1所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 所述反应的温度 为25～55℃， 反应时间为3～8h 。 6.根据权利要求1所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 将红细胞膜与 阴 离子反应前体在低渗缓冲液中孵育， 然后用脂质体挤出器挤出， 得到阴离子反应前体红细 胞膜囊泡； 然后将阴离子反应前体红细胞膜囊泡与阳离子反应前体在低渗缓冲液中搅 拌反 应， 然后超滤， 得到载 药红细胞膜纳米粒。 7.根据权利要求6所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 孵育的时间为20 ～40分钟， 孵育后超声处理3～6 分钟， 再用脂质体挤出器梯度挤出； 所述超滤时截留分子量 为30～200kD， 转速为120 0～5000 r/min， 超滤的次数为10～ 20次。 8.根据权利要求1所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法， 其特征在于， 所述阳离子反应 前体为金属 化合物或者小分子药物； 所述阴离子反应前体源为硫化物、 柠檬酸化合物或者 染料药物。 9.根据权利要求1所述载药红细胞膜纳米粒的制备方法制备的载药红细胞膜纳米粒， 其特征在于， 载 药红细胞膜纳米粒的粒径为20～ 240 nm。 10.权利要求9所述载药红细胞膜纳米粒在制备具有近红外光热效应和多模态成像功 能的试剂、 具有近红外光响应性药物、 细胞核靶向输送多功能试剂、 肿瘤 诊疗一体化纳米制 剂或者肿瘤治疗药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115252580 A 2一种载药红细胞膜纳米粒 及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明公开了一种用于肿瘤靶向药物递送的红细胞膜纳 米体系， 具体涉及一种载 ICG‑DOX红细胞膜纳米粒及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]恶性肿瘤是严重威胁人类健康的重大恶性疾病之一， 其发病率和死亡率在国内外 均呈明显的上升趋势。 如何实现肿瘤的精确诊断与高效治疗是当前研究的重点及难点。 纳 米技术的发展为肿瘤的治疗提供了一种新的策略， 纳米药物因其具有肿瘤特异 性靶向药物 递送的特点， 在增强药物疗效、 降低药物毒副作用上发挥着重要作用。 [0003]在目前文献报道的不同纳米生物平台中， 通过仿生方法合成纳 米药物采用生物源 性的天然 材料例如白蛋白、 细胞、 细菌以及病毒等材料进行纳米药物递送， 该类型的纳米材 料结合了天然物质与纳米技术的各自优势， 越来越成为肿瘤治疗具有良好应用前景的新型 技术。 天然 材料仿生合成纳米材料具有 材料自身独特的生物学特征， 如长效循环、 肿瘤特异 性靶向、 免疫调节等。 目前基于白蛋白以及细胞膜的纳米药物递送体系已经被广泛应用于 肿瘤精确治疗当中 （如J  Control Release,  2021, 329, 997‑1022； Chem  Soc Rev, 2021, 50, 945‑985） 。 [0004]目前基于细胞膜的纳米药物研究中， 红细胞因其自身来源丰富， 结构简单无复杂 的细胞器， 易于提取细胞膜， 且其细胞膜表面可修饰性强， 被广泛应用于纳米药物研究。 目 前基于红细胞药物递送的研究重要有两种不同的策略， 以完整红细胞作为载体进 行药物递 送以及使用红细胞膜对现有纳米颗粒如PLGA纳米粒、 氧化铁磁性纳米粒子、 介孔二氧化硅 纳米粒子、 脂质体、 聚合物囊泡等进 行细胞膜包裹进 行纳米材料的合成。 比如现有技术水热 法制备的PEG ‑Fe3O4用经靶向修饰的红细胞膜碎片挤出包裹， 制备出有免疫逃避性和灵敏磁 响应性的纳米颗粒红细胞膜 ‑PEG‑Fe3O4； 现有技术还公开了一种红细胞膜包覆的MOFs纳米 药物载体及其制备方法与应用， 该MOFs纳米药物载体包括MOFs纳米粒子、 红细胞膜， 所述 MOFs纳米粒子的孔隙上装载有硼酸， 所述MOFs纳米粒子外部包裹红细胞膜， 该MOFs纳米药 物载体采用水热法合成。 现有技术都是采用先制备药物粒子再被红细胞膜包裹的技术方 案， 该药物递送存在载药量较低、 靶向性较差等局限， 而且合成工艺复杂、 纳米材料尺寸控 制依赖于内核纳米材 料而难以精确调控纳米材 料的尺寸大小等问题。 发明内容 [0005]为解决上述技术问题， 本发明的目的是提供一种基于红细胞膜纳米囊泡， 在其内 部实现药物反应与制备， 用于抗肿瘤药物的包载， 具有尺寸精确可调控、 制备简单、 药物原 位合成的特点， 可以实现更高的靶向性， 增加药物包载效率， 并且具有良好的生物安全性、 肿瘤靶向性、 肿瘤深部穿透和滞留， 并且所制备的细胞膜纳米粒保留细胞膜自身的柔软性， 可以发生形变实现在肿瘤部位的深部组织穿透， 提高药物在肿瘤组织的高效深部递送， 同 时ICG与DOX形成复合物 沉淀降低了DOX在正常组织中的非必要释放， 毒副作用有效降低。 而说　明　书 1/15 页 3 CN 115252580 A 3