(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210920686.0 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 安徽工程大学 地址 241000 安徽省芜湖市北京中路8号 (72)发明人 林英　刘雅雯　宋庆平　宋红　 刘智博琦　 (74)专利代理 机构 北京元本知识产权代理事务 所(普通合伙) 11308 专利代理师 范奇 (51)Int.Cl. C08F 251/00(2006.01) C08F 220/06(2006.01) C08F 220/34(2006.01) C08F 222/38(2006.01) A61K 9/06(2006.01)A61K 31/704(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种酸化响应的透明质 酸纳米凝胶及其制 法与应用 (57)摘要 本发明公开了一种酸化响应且拥有半互穿 结构透明质酸纳米凝胶的制法与应用， 以透明质 酸为模板， 基于2 ‑氨基乙基甲基丙烯酸酯盐酸 盐、 丙烯酸和两个端双键的酰胺化合物水相聚 合， 可以制备出粒径可控的纳米凝胶， 利用单体 聚合形成的半互穿网络和聚合物间的非共价作 用组装的纳米粒子体现出酸性微环 境敏感特征， 赋予了其用作活性分子(如： 药物)载体的酸响应 功能。 本发明的透明质酸纳米凝胶分散性高、 胶 体稳定性好且 具有良好的生物相容性， 所携带丰 富的官能团， 给予了凝胶优秀的药物负载能力， 未共价损耗羧基的透明质酸拥有细胞特异靶向 性。 本发明所提供的透明质酸纳米凝胶在药物负 载释放领域具有潜在应用价 值。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 115368508 A 2022.11.22 CN 115368508 A 1.一种酸 化响应的透明质酸纳米凝胶的制备 方法， 其特 征在于， 所述 步骤如下： 将2g透明质酸HA和0.5～2.5g丙烯酸AA溶解于1.2L去离子水中， 搅拌下加入1～3g  2‑ 氨基乙基甲基丙烯 酸酯盐酸盐AMH与0.5～2g两个端双键的酰胺 化合物并充分溶解， 配制成 总浓度为3.75～7.08g/L的配方液； 在氮气保护条件下， 配方液加热至70℃后加入0.8 ‑ 3.5mg/mL的过硫酸钾， 搅拌反应60～180min， 获得白色乳液产品进行过滤， 所得滤液用Cut ‑ off分子量为10000的透析袋在去离子水中透析48h以去除体系内的小分子， 余下即为酸化 响应的透明质酸纳米凝胶。 2.根据权利要求1所述的一种酸化响应的透明质酸纳米凝胶的制备方法， 其特征在于， 所述两个端双键的酰胺化合物选自N,N ‑亚甲基双丙烯酰胺MBAAm、 N,N ‑双(丙烯酰)胱胺酸 BACy、 N,N’ ‑(丙烷‑1,3‑二基)二丙烯酰胺PDDA、 N,N ′ ‑(1,2‑二羟乙烯)二丙烯酰胺DHEB A、 N, N’ ‑(丁烷‑1,4‑二基)二丙烯酰胺BD DA中的任何一种。 3.根据权利要求1所述的一种酸化响应的透明质酸纳米凝胶的制备方法， 其特征在于， 所述酸化响应的透明质酸纳米凝胶的水合粒径为95.3 ±2.1nm～1203.8 ±23.2nm； 电位为 ‑ 45.2±6.1mV～‑23.2±3.7mV。 4.一种采用权利要求1至3任何一项所述合成方法得到的酸化响应的透明质酸纳米凝 胶。 5.权利要求4所述的一种酸化响应的透 明质酸纳米凝胶在体外释放和细胞毒性方面的 应用， 其特 征在于， 所述 步骤如下： a.负载阿霉素的酸 化响应透明质酸纳米凝胶的制备 取几份分量相同的上述方法制备得的酸响应透明质酸纳米凝胶乳液各5mL用1mol/L的 氢氧化钠溶液调节pH至7.4～8， 搅拌条件 下依次滴加梯度体积的2.5g/L的盐酸阿霉素水溶 液； 避光条件 下分别继续搅拌8～12h， 通过高速离心和超声再分散于pH＝7.4的磷酸 缓冲液 PBS中， 即得不同负载量阿霉素的透明质酸纳米凝胶； b.该负载阿霉素的酸 化响应透明质酸纳米凝胶 在体外释放和细胞毒性方面的应用 取几份分量相同的步骤a制得的负载阿霉素的酸响应透明质酸纳米凝胶溶液各1mL置 于Cut‑off分子量为10000的透析袋内， 将透析袋完全浸入装有不同pH指数的5mL  0.01mol/ L的PBS液中， 在37℃搅拌下进行释放实验； 每隔一段时间用等量新鲜的释放介质替换原来 介质， 用荧光光谱通过标准 曲线法测定介质中阿霉素 的含量， 根据介质中药物含量计算其 释放的百分率； 通过MTT法先检测酸化响应的透明质酸纳米凝胶的生物相容性， 然后以MTT法测定阿霉 素裸药与负载阿霉素的透明质酸纳米凝胶对小鼠肝癌细胞H22细胞的体外杀伤效果， 时间 为48小时， 结果进行比对。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115368508 A 2一种酸化响应的透明质酸纳米凝胶及其制法与应用 技术领域 [0001]本发明属于高分子材料纳米技术领域， 具体涉及 一种新型酸化响应的透明质酸纳 米凝胶及其基于非共价作用与半互穿协同的制备 方法和应用。 背景技术 [0002]透明质酸(Hyaluronic  acid， HA)是一种带负电的非硫酸化糖胺聚糖， 由d ‑葡萄糖 醛酸与N‑乙酰基‑d‑葡萄糖胺的重复二糖单元构成。 作为广泛分布于结缔组织细胞外基质 (ECM)和眼睛玻璃体中的粘多糖， 其在细胞内功能方面发挥着重要作用， 如： 影响细胞增殖 与迁移、 参与细胞内信号传导的调节。 鉴于迷人的理化与生物学特征， 透明质酸被开 发用作 各种功能材料及材料的构造模块。 透明质酸也是备受青睐的细胞表面受体配体， CD44、 RHAMM和LYVE ‑1等是过量表达在多种癌细胞(淋巴瘤细胞系、 转病毒细胞系、 肺巨噬细胞和 胶质瘤细胞系等)膜上的HA特异性受体， CD44为跨膜受体， RHAMM为一种膜外受体 (Biomaterials  Science,2021,9:1363)。 以具有CD44受体的细胞为例， 低分子量的透明质 酸可竞争性的与肿瘤细胞膜上 受体结合， 影响细胞移动， 并能够由受体介导胞吞进入细胞。 因此， 透明质酸及其衍生物被广泛用于开发大量形貌各异且拥有肿瘤靶向能力的复合材 料。 [0003]聚合物自组装形成的响应性纳米载体有望成为肿瘤靶向传输并控制释放各类活 性小分子(如： 小分子抗癌药物、 基因试剂和蛋白质)的纳米工具。 聚合物组装体的生理环 境 稳定性是活性 分子有效递送的关键(J.Controlled  Release,2 012,164:108)。 然而， 赋 予组 装体稳定性的理化交联却会影响被递送活性分子的病灶点释放， 进而减弱诊疗效果。 基于 该生物学屏障解决的需求， 研究者不断进行包含可逆弱键的功 能结构探索， 以期整合创新 性特征设计至纳米级组装体结构内， 开发多功能纳米负载系统。 通常， 微环境响应是这类新 型纳米组装体的重要特征。 因此， 在具有靶向能力的递送系统中， 通过各种内源性刺激， 诸 如温度、 pH值、 离子强度、 酶、 乏氧及氧化还原微环 境， 由“稳定”纳米载体于病灶点触发活性 分子富集,进而实现肿瘤等疾病的精确诊疗。 [0004]基于交联与非共价相互作用的协同构造形成纳米尺寸天然聚合物水凝胶， 因自身 生物相容性、 可降解性、 亲水性及体循环的高通透与滞留效应， 备 受生物医药领域的专家青 睐。 尺寸和形貌可调的纳米凝胶用作活性分子载体拥有丰富多样的优点。 例如： 优秀的分子 负载能力、 活性分子控制释放能力、 灵活的可修饰与设计性、 良好的溶胀性能、 可延长参与 体循环时间、 正常生理环境稳定性和控制响应性等。 因此， 携带丰富功能基团且拥有靶向特 定细胞能力的环境响应性 天然高分子纳米凝胶， 为一些疾病药物制剂的开发提供了有利的 平台。 发明内容 [0005]针对上述情况， 本发明的目的在于提供一种环境酸响应的非共价作用与半互穿协 同透明质酸纳米凝胶。说　明　书 1/6 页 3 CN 115368508 A 3