(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210925240.7 (22)申请日 2022.08.03 (71)申请人 四川省医学 科学院·四川省人民医 院 地址 610000 四川省成 都市青羊区一环路 西2段32号 (72)发明人 钟磊　赵志鹏　彭雪润　师建友　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 任燕妮 (51)Int.Cl. C12N 15/867(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 5/10(2006.01) C12N 5/09(2010.01)C12N 5/071(2010.01) C12Q 1/02(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种重组慢病毒载体、 重组慢病毒质粒、 细 胞模型及相关应用 (57)摘要 本发明公开了一种重组慢病毒 载体、 重组慢 病毒质粒、 细胞模型及相关应用， 涉及生物医药 技术领域， 本发 明提供的重组慢病毒载体含有双 荧光素酶报告基因和VGLL4基因， 双荧光素酶报 告基因可以作为检测指标， 准确有效地反应 VGLL4基因的表达或VGLL4基因受药物调控 的情 况。 采用该载体构建的细胞模型可用于筛选 VGLL4调控剂或以VGLL4为靶点的抗肿瘤产品， 为 VGLL4基因的功能研究、 其调控剂和以VGLL4为靶 点的抗肿瘤药物的开发提供了新的途径。 此外， 本发明利用上述载体构建的细胞模型筛选出了 新的VGLL4小分子调控剂。 权利要求书1页 说明书9页 附图2页 CN 115181756 A 2022.10.14 CN 115181756 A 1.一种重组慢病 毒载体， 其特征在于， 其包括： 双荧光素酶报告基因慢病 毒载体和位于 双荧光素酶报告基因载体中的VGL L4基因。 2.根据权利要求1所述的重组慢病毒载体， 其特征在于， 所述VGLL4基因位于双荧光素 酶报告基因载体的酶切位 点之间； 优选地， 所述双荧 光素酶报告基因载体为CV0 60载体； 优选地， 所述VGL L4基因位于 CV060载体的PacI酶切位 点和NheI酶之间； 优选地， 所述VGL L4基因的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 3.一种慢病 毒载体系统， 其特征在于， 其包括： 包装质粒和如权利要求1或2所述的重组 慢病毒载体； 优选地， 所述包 装质粒包括pHelper  1.0载体和pHelper  2.0载体。 4.一种重组慢病 毒质粒， 其特征在于， 其由如权利要求3所述的慢病 毒载体系统经慢病 毒包装后获得。 5.如权利要求4所述的重组慢病毒质粒的构建方法， 其特征在于， 其包括： 采用 如权利 要求3所述的慢病毒载体系统进行慢病毒包 装； 优选地， 所述慢病毒包 装包括： 将所述慢病毒载体系统转染入宿主细胞； 优选地， 所述宿主细胞选自2 93T细胞。 6.一种细胞模型， 其特 征在于， 其含有权利要求 4所述的重组慢病毒质粒。 7.如权利要求6所述的细胞模型的构建方法， 其特征在于， 其采用 如权利要求4所述的 重组慢病毒质粒转染细胞后， 筛 选获得高表达VGL L4基因的细胞； 优选地， 所述细胞包括A549细胞。 8.如权利要求1或2所述的重组慢病 毒载体或如权利要求3所述的慢病 毒载体系统或如 权利要求4所述的重组慢病毒质粒或如权利要求6所述的细胞模型在筛选VGLL4调控剂或以 VGLL4为靶点的抗肿瘤产品中的应用； 优选地， 所述VGL L4调控剂包括VGL L4小分子调控剂。 9.目标化合物在制备VGLL4调控剂或以VGLL4为靶点的抗肿瘤产品中的应用， 其特征在 于， 所述目标化合物包括PI3K/mTOR抑制剂、 mTOR抑制剂、 VEGFR抑制剂、 甘草酸铵和GSK ‑3β 抑制剂中的至少一种； 优选地， 所述PI3K/mTOR抑制剂包括Dactolisib， 所述mTOR抑制剂包括WYE ‑354和KU‑ 0063794中的至少一种， 所述VEGFR抑制 剂包括Lini fanib(ABT ‑869)， 所述GSK ‑3β 抑制剂包 括TWS119； 优选地， 所述VGL L4调控剂包括VGL L4小分子调控剂。 10.一种以VGLL4为靶点的抗肿瘤产品， 其特征在于， 其活性成分包括如权利要求9所述 的目标化 合物和其 他VGLL4调控剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115181756 A 2一种重组 慢病毒载体、 重组 慢病毒质粒、 细胞模型及相关应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 具体而言， 涉及一种重组慢病毒载体、 重组慢病毒 质粒、 细胞模型及相关应用。 背景技术 [0002]Hippo通路是维持组织稳定的关键信号通路， 其失调将引起细胞增殖过度而凋亡 不足， 组织器官过度增生， 从而 大大增加人体罹患癌症的风险。 YAP是Hippo信号通路下游的 效应分子， 其表达量上调 与多种类型肿瘤的发生、 耐药和肿瘤干细胞自更新密切相关， 是潜 在的肿瘤 治疗靶点。 YAP可通过与TEADs相互作用来调控靶基因的表达， 从而促进细胞增殖， 抑制细胞凋亡。 与YAP的作用方式相似， 哺乳动物退变样蛋白(Vestigial ‑like proteins， VGLL4/VGL4)也可以通过与TEADs的结合来发挥其转录调 控功能。 由此可见， YAP与VGLL4是 互相竞争的关系， 过表达或上调VGLL4可以阻碍YAP与TEADs的结合， 从而抑制其下游靶基因 的表达和肿瘤生长， 还 可以避免直接抑制YAP功能可能导致的毒副作用， 如图1。 从文献报道 来看， 采用VGLL4的多肽类似物对胃癌模 型进行治疗， 可以有效抑制癌蛋白YAP的活性， 得到 较好的阳性治疗效果； 采用转染VGLL4过表达载体的方法在肺癌细胞中上调VGLL4表达水 平， 可以显著抑制肿瘤的生长。 上述研究结果均显示， VGLL4可以通过与YAP竞争性结合 TEADs来抑制YAP的活性， 进 而抑制Hip po信号通路异常导 致的肿瘤发生和进 展。 [0003]然而， 目前上调VGLL4的治疗方法尚停留在使用VGLL4多肽类似物和基因过表达阶 段， 针对VGLL4靶点的抗肿瘤试剂主要包括； 重组溶瘤基因 ‑腺病毒Ad ‑sp‑E1A‑ΔE1B‑ VGLL4、 miR ‑130a反义核酸及其衍生物、 VGLL4蛋 白类似物等， 存在成药性低， 不易储存的缺 点。 [0004]鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种重组慢病毒载体、 重组慢病毒质粒、 细胞模型及相关 应用。 [0006]本发明是这样实现的： [0007]第一方面， 本 发明实施例提供了一种重组慢病毒载体， 其包括： 双荧光素酶报告基 因慢病毒载体和位于双荧 光素酶报告基因载体中的VGL L4基因。 [0008]第二方面， 本 发明实施例提供了一种慢病毒载体系统， 其包括： 包装质粒和如前述 实施例所述的重组慢病毒载体。 [0009]第三方面， 本发明实施例提供了一种重组慢病毒质粒， 其由如前述实施例 所述的 慢病毒载体系统经慢病毒包 装后获得。 [0010]第四方面， 本发明实施例提供了如前述实施例所述的重组慢病毒质粒的构建方 法， 其包括： 采用如前述实施例所述的慢病毒载体系统进行慢病毒包 装。 [0011]第五方面， 本发明实施例提供了一种细胞模型， 其含有前述实施例 所述的重组慢说　明　书 1/9 页 3 CN 115181756 A 3