(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211334401.1 (22)申请日 2022.10.28 (71)申请人 中国人民解 放军陆军特色医学中心 地址 400042 重庆市渝中区大坪长江支路 10号 申请人 重庆大学 (72)发明人 豆远尧　何勇　唐丽灵　王莉萍　 韩睿　王玉波　 (74)专利代理 机构 重庆双马智翔专利代理事务 所(普通合伙) 50241 专利代理师 顾晓玲 (51)Int.Cl. C08G 83/00(2006.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 9/50(2006.01)A61K 31/506(2006.01) A61K 31/675(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种高孔隙COF纳米颗粒及其制备方法和作 为药物载体的应用 (57)摘要 本发明公开了一种高孔隙COF纳米颗粒及其 制备方法和在药物载体中的应用， 制备方法包括 如下步骤： (1)合成COP纳米颗 粒： 以4,4' ‑二硫二 酰二苯甲醛、 1,3,5 ‑三(氨基甲基)苯三盐酸 盐为 原料， 采用三氟乙酸或醋酸作为席夫碱反应的催 化剂， 采用席夫碱型亚胺键连接方式合成含有二 硫键的非晶共价有机聚合物COP纳米颗 粒； (2)重 结晶法合成高孔隙COF纳米颗 粒： 将制备的COP纳 米颗粒分散到刻蚀液中， 在50 ‑120℃条件下充分 反应后， 离心收集高介孔COF纳米颗粒， 洗涤去除 残留反应物。 采用本发明方法合成的结晶度高、 孔隙丰富的COF纳米载体， 能够实现对B rig和Osi 药物的分层装载和级联响应释放。 权利要求书1页 说明书7页 附图6页 CN 115449088 A 2022.12.09 CN 115449088 A 1.一种高孔隙COF纳米颗粒的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)合成COP纳米颗粒： 以4,4' ‑二硫二酰二苯甲醛、 1,3,5 ‑三(氨基甲基)苯三盐酸盐为 原料， 采用三氟 乙酸或醋酸作为席夫碱反应的催化剂， 采用席夫碱型亚胺键连接方式合成 含有二硫键的非晶共价有机聚合物COP纳米颗粒； (2)重结晶法合成高孔 隙COF纳米颗粒： 将制 备的COP纳米颗粒分散到刻蚀液中， 在50 ‑ 120℃条件下充分反应后， 离心收集高介孔COF纳米颗粒， 洗涤去除残留反应物， 即得。 2.根据权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于： 步骤(1)中4,4' ‑二硫二酰二苯甲醛、 1,3,5 ‑三(氨基甲基)苯三盐酸盐的溶剂为乙腈， 向4,4'‑二硫二酰二苯甲醛的乙腈分散溶液中加入三氟乙酸， 搅拌、 充分反应； 再加入1,3, 5‑三(氨基甲基)苯三盐酸盐的乙腈溶液， 室温充分反应， 离心收集产物， 用乙醇和N,N ‑二甲 基乙酰胺洗涤去除残留的反应物， 获得COP纳米颗粒。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于： 所述催化剂为三氟乙酸， 三氟乙酸的 用量为每0.01摩尔4,4' ‑二硫二酰二苯甲醛使用400 ‑600μL三氟乙酸， 优选每0.01摩尔4, 4'‑二硫二酰二苯甲醛使用45 0‑550 μL或者5 00 μL三氟乙酸； 优选4,4' ‑二硫二酰二苯甲醛溶液的浓度为0.35 ‑0.55mM或0.4 ‑0.5mM， 1,3,5 ‑三(氨基 甲基)苯三盐酸盐溶 液的浓度为0.2 ‑0.4mM或0.25 ‑0.35mM； 优选4,4' ‑二硫二酰二苯甲醛与1,3,5 ‑三(氨基甲基)苯三盐酸盐的使用量比例为摩尔 比3:2。 4.根据权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于： 步骤(2)中将制备的COP纳米颗粒分散到刻蚀液中， 在50 ‑100℃或50 ‑90℃或60 ‑80℃条 件下反应12 ‑60h， 优选42 ‑54h或44‑52h或48h； 离心收集介孔COF纳米颗粒用乙醇洗涤去除 残留反应物； 所述刻蚀液包含： 10～40ml  N,N‑二甲基乙酰胺、 10～40ml  1,3,5‑三甲基苯、 0.5 ‑3ml 水和0.5‑2.5ml三氟乙酸， 其中N,N ‑二甲基乙酰胺、 1,3,5 ‑三甲基苯的体积比为： 1～4﹕1～ 4， 优选4﹕ 1； 水的体积优选2ml， 三氟乙酸的体积优选2ml。 5.根据权利 要求4所述的制备方法， 其特征在于： COP纳米颗粒与刻蚀液的用量比为COP 纳米颗粒的质量与刻蚀液的体积比为1mg﹕ 40～6 0ml， 优选1mg﹕ 45～5 5ml或50ml。 6.权利要求1至 5任一项所述的制备 方法制得的高孔隙COF纳米颗粒。 7.权利要求6所述的高孔隙COF纳米颗粒在作为药物载体中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于： 所述应用为以COF纳米颗粒作为药物载体 制备靶向肺癌耐药肿瘤的仿生载药体系， 所述仿生载药体系是将布加替尼药物锚定到权利 要求6所述的COF纳米颗粒上得到COF ‑Brig纳米材料， 将奥希替尼药物包埋到COF ‑Brig纳米 材料的介孔结构中得到C OF‑Brig@Osi纳米材料， 然后采用肺癌奥希 替尼耐药细胞的细胞膜 对COF‑Brig@Osi纳米材 料进行包裹得到 。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于： COF ‑Brig纳米材料的合成是利用COF纳米 颗粒中的亚胺氮上的孤对电子通过氢键锚定布加替尼药物分子； COF ‑Brig@Osi纳米材料的 制备是通过BSA包埋的方法， 将奥希替尼药物包埋到 COFs材料的介孔结构中。 10.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于： 采用物理挤压的方法将肺癌奥希替尼耐 药细胞的细胞膜包裹到 COF‑Brig@Osi纳米材 料表面。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115449088 A 2一种高孔隙COF纳米颗粒 及其制备方 法和作为药物载体的 应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物制药技术领域， 具体涉及一种高孔隙COF纳米颗粒及其制备方法 和作为药物载体的应用。 背景技术 [0002]肺癌是世界范围内癌症相关死亡的主要原因， 非小细胞肺癌占肺癌的85％， 5年存 活率只有19％。 奥希替尼(Osi mertinib,Osi)作为第三代EGFR ‑TKI被FDA批准用于EGFR突变 晚期NSCLC患者的一、 二线治疗， 且疗效显著。 但接受奥希替尼治疗的患者最终会产生耐药 而导致疾病进展。 既往报道， 化疗药物： 西妥昔单抗； ALK抑制剂： 布加替尼(Brigatinib， Brig)等药物与奥希替尼联用可有效克服 奥希替尼获得性 耐药。 然而， 肿瘤异质性决定了耐 药细胞的分布不均， 传统给药方式限制 了药物在耐药细胞 的局部浓度， 加大药物剂量会增 加毒副作用。 如何提高耐药肿瘤部位的药物浓度是增强抗肿瘤疗效的关键 。 [0003]纳米技术是传递药物的新策略。 共价有机框架(COF)是一种由共价键连接的结晶 多孔聚合物。 与传统高分子材料相比， C OF具有良好的化学稳定性， 丰富可调节的微孔结构， 对组成、 拓扑和孔隙度的可预测性控制等优势， 很容易地将诊断和治疗药物固定在其结构 中， 实现药物的有效装 载。 同时， 与新兴的无机纳米颗粒(金属、 碳、 二氧化硅等)相比， COF具 有更好的生物相容性、 更有前景的生物降解和更容易的表面功能化， 广泛用于药物传递。 尽 管当前的COF材料具有丰富、 规则的微孔道结构的优点。 但其介孔率较低， 很难实现对双药 或多药的独立装载和级联响应释放(Wang  B,Liu X,Gong P,et al.Fluorescent  COFs  with a highly conjugated  structure  for visual drug loading and responsive   release[J].Ch emical Communication s,2020,56(4):519 ‑522.)。 因此， 迫切需要开发一种 高结晶、 多孔隙的COF纳米载 药系统用于多重药物递送。 [0004]由于纳米材料自身不具靶向性， 只能依靠 “增强阻滞与渗透效应(EPR效应) ”被动 富集到肿瘤部位。 如何实现纳米载体对肿瘤细胞的主动靶性一直是人们努力解决的方向。 据报道， 癌细胞膜具有免疫逃逸和同源黏附能力。 因此， 大量研究者采用癌细胞膜伪装纳米 颗粒实现对同源细胞的特异 性结合。 然而， 人们还 未考虑对敏感和耐药细胞的单独靶向性。 目前的技术手段仍然无法实现靶向奥希替尼耐药细胞的功 能。 因此， 如何实现载药系统主 动靶向到耐药细胞而非敏感细胞 是人们面临的又一关键难题。 发明内容 [0005]发明人意外发现采用奥希替尼耐药细胞膜包裹的载药系统对耐药肿瘤的靶向性 更强， 但用敏感细胞膜包裹的纳米载药系统却未能区分敏感和耐药细胞。 针对C OF纳米载体 装载双药和响应级联响应释放的难题， 我们采用重结 晶方法成功的合成了结 晶度高、 孔隙 丰富的COF纳米载体， 以实现对Br ig和Osi药物的分层装 载和级联响应释放。 针对COF纳米载 药体系对耐药肿瘤的主动靶向功能性差的难题， 我们采用奥希替尼耐药细胞膜包裹的载药说　明　书 1/7 页 3 CN 115449088 A 3