(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211218528.7 (22)申请日 2022.10.06 (71)申请人 济南大学 地址 250022 山东省济南市 市中区南 辛庄 西路336号 (72)发明人 张君生　尹春来　张华　 (51)Int.Cl. C07D 307/77(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/06(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (54)发明名称 一类具有调节T细胞功能的二萜及其制备方 法和应用 (57)摘要 本发明提供了一类克罗烷型二萜类化合物， 其结构式为： 上述二萜类化合 物从药用植物波叶青牛胆的根茎中提取分离得 到： 先用9 5%乙醇浸提并浓缩 得到粗浸膏， 再用乙 酸乙酯/水进行萃取浓缩， 将乙酸乙酯萃取物通 过结合运用各种分离填料 （大孔树脂、 Sephadex   LH‑20凝胶、 硅胶等） 和分离技术 （如： 常规柱色 谱、 制备薄层色谱、 高效液相色谱等） 对其进行反 复纯化而获得。 上述克罗烷型二萜 类化合物具有调节T细胞功能、 抑制T细胞表面PD ‑1蛋白表达的 活性， 为后续开发波叶青牛胆的药用价值奠定基 础。 权利要求书2页 说明书5页 附图14页 CN 115433148 A 2022.12.06 CN 115433148 A 1.两种二萜类化 合物 （1~2） ， 其结构式如式 （I） 所示： 式 （I） 。 2.一种如权利要求1所述的二萜类化 合物的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： （1） 波叶青牛胆干燥 根茎， 粉碎后用乙醇浸提， 浸提液浓 缩得到粗浸膏； （2） 粗浸膏悬浮于水中， 然后用乙酸乙酯萃取， 将乙酸乙酯萃取相浓缩得到乙酸乙酯萃 取物； （3） 将乙酸乙酯萃取物过D101大孔树脂柱层析， 依次用50%、 80%和95%  v/v的乙醇 ‑水洗 脱， 得到3个组分A~C； （4） 将组分B过正相 硅胶柱层析， 依 次用10:1、 5:1、 3:1、 1:1、 1:2  v/v的石油醚 ‑乙酸乙 酯洗脱， 得到组分B1~B9； （5） 将组分B5过凝胶 （S ephedax LH‑20） 柱层析， 用4:6  v/v的二氯 甲烷‑甲醇洗脱， 得到 组分B5a和B5b； （6） 将组分B5b过正相 硅胶柱层析， 依次用50:1、 20:1、 10:1、 5:1、 2:1  v/v的石油醚 ‑丙 酮洗脱， 得到组分B5b1~B5b4， 其中组分B5b3除去溶剂为 化合物2； （7） 将组分B6a过正相 硅胶柱层析， 依次用400:1、 200:1、 100:1、 80:1  v/v的二氯甲烷 ‑ 甲醇洗脱， 得到组分B6a1~ B6a4； （8） 将组分B6a2经YMC ‑Pack ODS‑A色谱柱， 用60%  v/v的甲醇 ‑水等度洗脱， 检测波长为 210和254 nm， 收集保留时间20  min的组分， 除去溶剂得到化 合物1。 3.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 波叶青牛胆根茎与乙醇的 料液比为1:2~1:3 （w/v） 。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述波叶青牛胆根茎粉碎 至粒度直径小于 5 mm。 5.根据权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述浸提次数为3~4次， 每 次时间为7~10天。 6.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 浓缩为原体积的1/50~1/ 70。 7.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中， 所述粗浸膏与水的体积比 为1:1~1:2。 8.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中， 所述乙酸乙酯与水的体积 比为0.8:1~1.2:1； 所述乙酸乙酯萃取次数为3~4次。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115433148 A 29.一种如权利要求1所述的两种二萜类化合物在制备肿瘤免疫调节剂 或PD‑1抑制剂方 面的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特 征在于用于肿瘤免疫 治疗。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115433148 A 3