(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221097513 3.5 (22)申请日 2022.08.15 (71)申请人 浙江省肿瘤医院 地址 310022 浙江省杭州市拱 墅区半山 东 路1号 (72)发明人 陈巍　李夏　吴军舟　倪茂巍　 戴五敏　陈忠坚　陈肖皖　 (74)专利代理 机构 杭州星河慧专利代理事务所 (普通合伙) 33410 专利代理师 周丽娟 (51)Int.Cl. A61K 45/00(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 31/513(2006.01) A61K 31/255(2006.01)A61P 35/00(2006.01) C12Q 1/6886(2018.01) G01N 33/574(2006.01) G01N 33/573(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与结直肠癌化疗药物耐药相关的靶点及应 用 (57)摘要 本发明公开了与结直肠癌化疗药物耐药相 关的靶点及应用。 本发明首次发现： 硫醇氧化应 激在5‑Fu耐药性CRC逆转中可能发挥重要作用， 可通过S‑谷胱甘肽 依赖性降解TGM2， 增强5 ‑Fu诱 导的5‑Fu耐药CRC细胞凋亡， 从而增强5 ‑Fu的治 疗效果。 CRC细胞TMG2蛋白表达量的变化影响其 对5‑Fu的治疗敏感性， TGM2与CRC患者对5 ‑Fu的 耐药性和预后不良有关。 TGM2有可能作为一个潜 在的治疗靶点， 并可被硫醇氧化应激通过C193的 S‑谷胱甘肽化所调控。 较之5 ‑Fu单药， 5 ‑Fu与2‑ APPA的联合， 显著提高结直肠癌治 疗效果。 权利要求书1页 说明书15页 附图17页 CN 115317613 A 2022.11.11 CN 115317613 A 1.抑制TGM2基因表达量或者下调TGM2蛋白水平的物质的应用， 为以下(1)～(3)中的至 少一种： (1)制备用于提高耐药 结直肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的敏感度的药品； (2)制备用于降低或逆转结耐药肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的耐药性的药品； (3)制备用于增 加耐药结直肠癌细胞凋亡的药品。 2.如权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述抑制TGM2基因表达量或者下调TGM2蛋白 水平的物质包括： TGM2敲低慢病毒颗粒或小分子化 合物的TGM2抑制剂。 3.诱导TGM2蛋白的S ‑谷胱甘肽化的物质的应用， 为以下(1)～(3)中的至少一种： (1)制备用于提高耐药 结直肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的敏感度的药品； (2)制备用于降低或逆转结耐药肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的耐药性的药品； (3)制备用于增 加耐药结直肠癌细胞凋亡的药品。 4.如权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述诱导TGM2蛋白的S ‑谷胱甘肽化的物质为 诱导TGM2蛋白的C193位 点的S‑谷胱甘肽化的物质。 5.GR抑制剂的应用， 为以下(1)～(3)中的至少一种： (1)制备用于提高耐药 结直肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的敏感度的药品； (2)制备用于降低或逆转结耐药肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的耐药性的药品； (3)制备用于增 加耐药结直肠癌细胞凋亡的药品。 6.硫醇氧化应激诱 导剂的应用， 为以下(1)～(3)中的至少一种： (1)制备用于提高耐药 结直肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的敏感度的药品； (2)制备用于降低或逆转结耐药肠癌细胞对5 ‑氟尿嘧啶的耐药性的药品； (3)制备用于增 加耐药结直肠癌细胞凋亡的药品。 7.一种治疗结直肠癌的药物， 包括： 5 ‑氟尿嘧啶和以下至少一种的5 ‑氟尿嘧啶耐药逆 转剂： (X1)抑制TGM2基因表达量或者下调TGM2蛋白水平的物质； (X2)诱导TGM2蛋白的S ‑谷胱甘肽化的物质； (X3)GR抑制剂； (X4)硫醇氧化应激诱 导剂。 8.如权利要求7所述的治疗结直肠癌的药物， 其特征在于， 所述抑制TGM2基因表达量或 者下调TGM2蛋白水平的物质为TGM2敲低慢病毒颗粒或小分子化 合物的TGM2抑制剂。 9.TGM2检测试剂在制备以下至少一种诊断试剂中的应用： (Y1)结直肠癌的5 ‑氟尿嘧啶耐药性的诊断试剂； (Y2)结直肠癌 患者预后的诊断试剂。 10.如权利要求8所述的用途， 其特征在于， 所述TGM2检测试剂包括TGM2mRNA检测试剂 或TGM2蛋白检测试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115317613 A 2与结直肠癌化疗药物耐药相关的 靶点及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医学和制药领域， 具体涉及与结直肠癌化疗药物耐药相关的靶点 及应用。 背景技术 [0002]结直肠癌(CRC)是世界上最常见的癌症之一。 根据2018年全球癌症统计数据， CRC 在癌症相关死亡排名第一， 发病率排名第三。 目前， 结直肠癌患者的一线治疗方法是手术联 合化疗药物。 作为结直肠癌化疗中的基础用药， 5 ‑Fu通过抑制胸腺嘧啶合成酶的生物活性， 阻止结直肠癌细胞内的DNA合成， 进一步干扰肿瘤的生长和转移。 然而， 在罹患结直肠癌患 者身上长期使用5 ‑Fu容易导致肿 瘤对于5‑Fu不敏感。 根据大量的文献报道， 使用5 ‑Fu作为 基药的化疗失败， 其中最重要的原因之一是结直肠癌患者对于5 ‑Fu耐药。 尤其令人担忧的 是， 既往对于5 ‑Fu敏感的结直肠癌患者， 当他的肿瘤复发时， 更容易表现为对5 ‑Fu耐药。 晚 期结直肠癌患者对以5 ‑Fu为基础的化疗的有效率仅为10 ‑15％， 超过80％的晚期结直肠癌 患者最终复发， 尽管他们最初对化疗有反应。 对5 ‑Fu的耐药性已被视为晚期结直肠癌化疗 的主要障碍之一， 因此， 迫切需要确定治疗靶点并制定新的治疗策略， 以提高结直肠癌患者 对5‑Fu为主的化疗的反应。 [0003]研究表明， CRC对5 ‑Fu耐药的机制有： 跨膜转运蛋白功能增强， 导致胞内药物浓度 下降； 胸甘 酸合成酶(TS)活性增加， 拮抗5 ‑Fu抑制TS的作用； 二氢嘧啶脱氢酶(DPD)过表达， 加速5‑FU分解代谢； 凋亡抑制蛋白家族(IAPs)作用增强， 使药物 诱导的细胞凋亡减少； 磷脂 酰肌醇3激酶/蛋 白激酶B(PI3K ‑Akt)信号通路、 丝裂原活化蛋 白激酶(MAPK)信 号通路等异 常激活； 热休克蛋白27(HS P27)高表达， 对肿瘤 细胞损伤保护作用增强等。 [0004]在上述过程中发挥关键作用的分子往往是与肿瘤预后相关的生物标志物， 也是逆 转耐药、 改进化疗效果的重要靶点。 由于引起结直肠癌化疗耐药的原因和机制众多， 逆转化 疗耐药充满了挑战， 仍需要开发新的有效的治疗靶点来对抗层出不穷的耐药成因， 需要大 量的科学研究及临床试验以攻克难关。 因此， 积极开展对结直肠癌耐药机制的研究， 寻找 新 的关键分子和治疗 靶点， 对结直肠癌的干预和治疗具有重要的意 义。 发明内容 [0005]针对结直肠癌治疗中的5 ‑Fu耐药情况， 迫切需要发现调控结直肠癌耐药的新因 子， 阐明结直肠癌耐药的分子机制， 从而为结直肠癌临床治疗提供新的靶点和策略。 有鉴于 此， 本发明的目的就是寻找提高5 ‑Fu耐药结直肠癌对5 ‑Fu敏感性的关键靶点。 [0006]为了达成上述目的， 本发明针对结直肠癌耐药机制进行了相关研究。 [0007]本发明以小分子化 合物2‑APPA(CAS号 为1133387‑90‑2， 结构式如下式)说　明　书 1/15 页 3 CN 115317613 A 3