(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210961631.4 (22)申请日 2022.08.11 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： C202 297 2022.07.19 CCTCC NO： C202 295 2022.07.19 (71)申请人 中山大学孙逸仙纪念医院 地址 510120 广东省广州市越秀区沿江西 路107号 (72)发明人 龚畅　罗晴　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 刘燚 (51)Int.Cl. C12N 5/09(2010.01) C12N 5/071(2010.01)C12Q 1/02(2006.01) A61K 35/13(2015.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 两种ER阳性HER-2阴性乳腺癌CDK4/6抑制剂 耐药株及其构建方法和用途 (57)摘要 本发明公开了两种ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌 CDK4/6抑制剂耐药株及其构建方法和用途； 所述 耐药株命名为人乳腺癌 细胞耐药株CDKi ‑R‑MCF‑ 7、 人乳腺癌细胞耐药株CDKi ‑R‑T47D； CDKi ‑R‑ MCF‑7和CDKi‑R‑T47D耐药株对帕博西利的耐药 指数(RI)分别为10、 9.19， 属于高度耐药； 除帕博 西利之外， 对阿贝西林具有交叉耐药， 对阿贝西 林耐药指数(RI)分别为3.83、 4.69； 可用于提供 耐药肿瘤细胞模型、 研究肿瘤耐药机制、 分析化 疗药物敏感性及筛选化疗药物、 制备抗肿瘤药 物、 开发肿瘤耐药逆转药物、 研发更有效的肿瘤 治疗方法等； 具有较高的生产和应用价 值。 权利要求书1页 说明书6页 附图4页 CN 115369089 A 2022.11.22 CN 115369089 A 1.一种ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌CDK4/6抑制剂耐药株， 所述耐药株命名为人乳腺癌细 胞耐药株CDKi ‑R‑MCF‑7； 保藏编号 为CCTCC NO： C202297。 2.一种ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌CDK4/6抑制剂耐药株， 所述耐药株命名为人乳腺癌细 胞耐药株CDKi ‑R‑T47D； 保藏编号 为CCTCC NO： C202295。 3.根据权利 要求1或2所述的耐药株， 其特征在于， 所述CDK4/6抑制剂为帕博西利和/或 阿贝西林。 4.权利要求1～3任一项所述的耐药株在筛 选、 制备抗肿瘤药物中的应用。 5.权利要求1～3任一项所述的耐药株在筛 选、 制备肿瘤耐药逆转药物中的应用。 6.权利要求1～3任一项所述的耐药株在筛 选、 制备化疗药物中的应用。 7.权利要求1～3任一项所述的耐药株在构建肿瘤耐药模型中的应用。 8.权利要求1～3任一项所述的耐药株在肿瘤耐药机制及其相关信号通路的研究中的 应用。 9.根据权利要求 4～8任一项所述的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤为乳腺癌。 10.权利要求1～3任一项所述的耐药株的制备方法， 以ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌细胞株 为亲本细胞， 采用浓度逐步提高的CDK4/6抑制剂诱导， 获得ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌CDK4/6 抑制剂耐药株。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115369089 A 2两种ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌C DK4/6抑制剂耐药株及其构建 方法和用途 技术领域 [0001]本发明属于生物医学技术领域， 具体涉及两种ER阳性Her ‑2阴性乳腺癌CDK4/6抑 制剂耐药株及其构建方法和用途。 背景技术 [0002]目前主要的体外诱导耐药株 的方式有两种： 化疗药物间歇刺激法与梯度递增 法。 药物浓度递增法， 从低浓度开始， 一般为亲本株IC50， 逐渐增加药物浓度， 最终使得细胞能 够在一定浓度的药物的培养液中持续稳定生长并传代。 剂量循序渐进， 细胞培养的外环境 逐渐改变， 细胞较易耐受， 状态较好， 缺点在于诱导耐药过程耗时很长， 且其化疗药物的作 用方式与临床上化疗药物大剂量短疗程的化疗原则存在一定的差异； 药物大剂量间歇冲击 法， 优点是与 临床上大剂量化疗药物冲击的治疗方式相 接近， 但是缺点在于大剂量药物冲 击法的药物浓度很高， 细胞培养由于外环境骤变， 细胞可能难以耐受， 细胞状态较难控制， 给予细胞较高浓度的抗肿瘤药物， 作用短暂时间后换用不含药物的培养基让其继续生长且 耐药性能不稳定。 因此需要对这两种诱导方法进行改进， 以期获得更加有效的体外诱导耐 药方法。 [0003]CDK4/6抑制剂作用靶点为CDK4/6 ‑CyclinD复合物， 抑制其活性， 从而抑制下游的 RB的磷酸 化， 抑制E2F转录因子释放， 从而 使细胞阻滞在G1期， 影响细胞增殖。 [0004]MCF‑7和T47D细胞是乳腺癌细胞株， 该细胞株ER阳性、 Her ‑2均为阴性， 属于ER阳性 HER‑2阴性乳腺癌细胞株。 该细胞株是目前研究乳腺癌， 特别是ER阳性乳 腺癌十分常用的一 种细胞株。 国内外建立乳腺癌对高剂量CDK4/6抑制剂乳腺癌的耐药细胞株仍较少见， 也只 见于低剂量的CDK4/6抑制耐药株对于由高剂量CDK4/6抑制剂间歇冲击联合剂量递增诱导 的ER阳性乳 腺癌耐药细胞株未见报道。 建立该细胞株能够为肿瘤耐药相关研究提供必 要的 研究模型， 具有实用价 值。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供两种ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌细胞耐药细胞株CDK4/6i ‑R‑ MCF‑7、 CDK4/6i‑R‑T47D及其制备 方法和应用。 [0006]本发明所采取的技 术方案是： [0007]本发明的第一方面， 提供一种ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌CDK4/6抑制剂耐药株， 所述 耐药株命名为人乳腺癌细胞耐药株CDKi ‑R‑MCF‑7； 保藏编号 为CCTCC NO： C202297。 [0008]本发明的第二方面， 提供一种ER阳性HER ‑2阴性乳腺癌CDK4/6抑制剂耐药株， 所述 耐药株命名为人乳腺癌细胞耐药株CDKi ‑R‑T47D； 保藏编号 为CCTCC NO： C202295。 [0009]在本发明的一些实施方式 中， 所述CDK4/ 6抑制剂为帕博西利和/或阿贝西林。 [0010]本发明的第三方面， 提供本发明第一方面或第二方面所述的耐药株在筛选、 制 备 抗肿瘤药物中的应用。说　明　书 1/6 页 3 CN 115369089 A 3