中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 ICS 65.020.20 CCS B 16 GB/T 44607—2024 木瓜秀粉蚧检疫鉴定方法 Detection and identification of Paracoccus marginatus Williams & Granara de Willink 2024 ⁃09⁃29 发布 2025 ⁃04⁃01 实施 国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布GB/T 44607—2024 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第 1部分：标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会 （SAC/TC 271）提出并归口 。 本文件起草单位 ：广州海关技术中心 、中国检验检疫科学研究院 、佛山海关综合技术中心 、广州白 云机场海关综合技术服务中心 、杭州海关 、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 、广东省农业科学 院植物保护研究所 。 本文件主要起草人 ：马骏、顾渝娟、林莉、徐晗、陈芳、李新芳、李新浩、吴晓薇、刘海军、吴志毅、 王书平、齐国君。 Ⅰ GB/T 44607—2024 木瓜秀粉蚧检疫鉴定方法 1　范围 本文件描述了木瓜秀粉蚧 （Paracoccus marginatus Williams & Granara de Willink ）的检疫鉴定 方法。 本文件适用于木瓜秀粉蚧的检疫鉴定 。 2　规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件 。 3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1　 腹脐　 circulus 腹裂 虫体腹面第 3、第4腹节的中部 ，以角质化 、狭窄的硬化框为界限的区域 ，多为圆形 、卵圆形、长方 形或沙漏形的表皮区 。 注： 腹脐的数目和大小在不同的蚧虫种类中变化很大 ，也有的种类无腹脐 。 3.2　 背孔　 ostioles 背裂 虫体背板两侧 ，形状如人眼 ，具2片孔瓣，瓣上有三格腺 、毛、瓣缘或硬化的结构 。 注： 背孔的数目有 2对，均在背板两侧 ，前背孔在前胸 ，后背孔在第 6腹节。 3.3　 肛环　 anal ring 虫体背末的环状结构 ，环上有成列环孔和 6 根环毛，此环为肛门的开口 。 3.4　 刺孔群　 cerarius 由锥状刺 （或锥刺） 、三格腺和附毛组成 ，是缘蜡丝的分泌和支持结构 。 注1： 分布在背缘 ，称背缘刺孔群或简称刺孔群 ；分布在体背 ，则称背刺孔群 。 注2： 体背缘通常有 17对或 18对刺孔群 ，头部 4对、胸部 6对、腹部 8对。 3.5　 盘孔　 disk pores 圆孔状的泌蜡结构 。 注： 此类孔分为 ：三格腺，呈三角形或近三角形 ，其内具三格 ；多格腺，圆形，具1 中心格，周围多格 （6格~12格） ，为 盘腺中最大者 ，一般分布在阴门附近 ；五格腺，大小介于三格腺和多格腺之间 ，其中心 1格、周围 5格，呈五角形 或近五角形 。 1 GB/T 44607—2024 3.6　 柱腺　 cylindrical ducts 管腺 领腺 管状的泌蜡结构 ，开口处内向有不同高度的环或领 。 注： 柱腺开口处围有窄的环区 （领区） ，为领状管 （oral collar tubular ducts ） ；柱腺在开口处围有宽的环 ，并呈一圈蘑菇 状突起为蕈状管 （oral rim tubular ducts ） 。 3.7　 尾瓣　 anal lobes 腹末节之突出部分 。 4　木瓜秀粉蚧基本信息 中文名：木瓜秀粉蚧 。 学名：Paracoccus marginatus Williams & Granara de Willink ，1992。 异名：无。 中文别名 ：木瓜粉蚧 。 英文名：papaya mealybug 。 分类地位 ：半翅目（Hemiptera ），胸喙亚目 （Sternorrhyncha ），粉蚧科（Pseudococcidae ），秀粉蚧属 （Paracoccus ） 。 木瓜秀粉蚧是一种重要的农林害虫 ，可通过空气气流进行短距离扩散 ，也可借助水 、床土、人类、家 畜和野生动物扩散 ，易随果实 、苗木和接穗的调运而远距离传播 。 注： 木瓜秀粉蚧其他信息见附录 A。 5　方法原理 5.1　形态学鉴定 根据木瓜秀粉蚧的为害状 ，在现场可借助手持放大镜检查寄主植物 ，挑取成虫 ，制作成玻片 ，用显 微镜观察 ，依据雌成虫的形态特征对其进行种类鉴定 。 5.2　分子生物学鉴定 根据成虫或若虫样品 ，通过扩增具有物种鉴别特征的 DNA条形码序列并与其他粉蚧同源序列比 对，依据最大相似度进行种类鉴定 。 6　仪器、用具和试剂 6.1　仪器、用具 显微镜、手持放大镜 、小毛笔、解剖针、眼科手术刀 、接种环、载玻片、盖玻片、小烧杯、比色板、酒精 灯、水浴装置 （如加热板等 ） 、样品袋。 PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析仪 、核酸蛋白检测仪 、台式离心机 、旋涡振荡器 、移液器、电子天平 、 pH计、水浴锅、纯水仪、高压灭菌器 、超低温冰箱等 。 2 GB/T 44607—2024 6.2　试剂 10%氢氧化钾或 10%氢氧化钠 、蒸馏水、70%乙醇、95%乙醇、无水乙醇 、酸性品红 、加拿大树 脂、丁香油、甘油、二甲苯、苯酚。 动物基因组 DNA提取试剂盒 、10×聚合酶链式反应 （PCR）缓冲液（10×PCR Buffer ） 、脱氧核糖核 苷三磷酸混合液 （dNTP Mixture ） 、DNA上下游扩增引物 （PcoF 1、LepR 1） 、Taq酶、DNA分子质量标记 （DNA Marker ） 、琼脂糖、1×三乙酸盐 ⁃乙酸缓冲液 （1×TAE） 。 除另有规定外 ，所有试剂为分析纯 。 7　现场检验 目测植株 、枝叶和果有无被粉蚧为害的症状 （见附录 B中图 B.1和图 B.2） ，用手持放大镜重点检 查植物的果实和幼嫩部分 （见图 B.1~图B.5） ，此外，果萼下和植株空隙内均是粉蚧易藏匿的部位 ，一 旦发现粉蚧虫体 ，应将粉蚧连同寄主装入样品袋中 ，做好现场记录 ，送实验室进行鉴定 。 8　实验室鉴定 8.1　形态学鉴定 8.1.1　若虫的培养 当只发现有粉蚧若虫时 ，应将其接入木瓜果实上并置于 25 ℃~ 28 ℃、相对湿度 65%~ 75%条件下 培养，待发育至成虫时再挑取雌成虫作形态鉴定 ，玻片制作方法见附录 C。 8.1.2　粉蚧科（Pseudococcidae Westwood ）的鉴定特征 粉蚧科的雌成虫具有下列特征 ：触角端节较其前节长而大 ，约呈纺锤形 ；背孔 0对~2对，位于前胸 及第 6 腹部背侧 ；腹脐 0 个~5 个，位于体腹面中区成 1 纵列，一般 1 个，位于第 3、第4腹节腹板间 ；背 缘有一系列刺孔群 ，左右侧成对 ，基数为 18对，数量少至零 ，或更多；每刺孔群为由锥刺及腺群组成 ；体 表常具有三格腺 。 8.1.3　秀粉蚧属 （Paracossus ）的鉴定特征 雌成虫通常宽椭圆形 。臀瓣通常发达 ，具硬化棒 ，从端毛或棒毛基部延伸 ，触角通常 8节。足发 达，爪无齿，跗冠毛端部膨大 ；透明孔通常出现在后足基节和胫节上 。刺孔群最多 18对，除了头部和胸 部刺孔群有 3 根或 4 根锥刺之外 ，其余刺孔群有 2 根锥刺；除了末对刺孔群之外没有附毛 。腹脐有或 无。背部具蕈状管 ，有时出现在腹部 。具领状管 。腹部具多格腺和三格腺 。 8.1.4　木瓜秀粉蚧雌成虫形态鉴别特征 8.1.4.1　目视形态鉴别特征 雌成虫体嫩黄色 ，卵圆形，长2.0 mm~ 3.5 mm，宽1.4 mm；体表具有白色粉状蜡质物 ，背部蜡粉厚 度分布不均 ，不足以掩盖体色 ，裸露体色不连续分布 ；体缘有短蜡丝 。卵囊发达 ，位于腹面后部 （见 图B.1和图 B.2） 。 3 GB/T 44607—2024 8.1.4.2　显微形态鉴别特征 雌成虫玻片标本主要显微鉴定特征如下 。 ——触角 8节。 ——背面具有 14对~17对刺孔群 ，其中第 1对、2对、4对、5对、7对、9对刺群孔具有 2根锥刺。 ——虫体背面缺多格腺 ，三格腺分散分布 ，大多位于刚毛附近 。蕈状管通常限于刺孔群边缘区 。 背部无领状管 。肛环刚毛长平均 136 μm，约为肛环宽度的 1.4倍。 ——腹部腹面具有多格腺 ，通常位于第 6~第8腹节的前端和后端 ，第4腹节和第 5腹节则仅限于 后端。三格腺集中分布于刚毛基部附近 。盘孔不常见 ，若有则与背面盘孔大小相同 。蕈状管 位于前胸到第 1腹节中部外侧 ，每节侧面 3个~6个。同一大小的领状管明显呈簇状分布于 虫体边缘和第 3~第8腹节中部及中部外侧区域 ，第1腹节通常有 2个~3个。臀叶背面无 蕈状管。 ——后足基节有大量透明孔 ；后足胫节无透明孔 （见图 B.6~图B.8） 。 8.1.5　木瓜秀粉蚧与近似种的区别 木瓜秀粉蚧依据下列形态特征与秀粉蚧属其他种区别 ： ——蕈状管仅存在于身体边缘 ； ——其后足胫节无透明孔 。 木瓜秀粉蚧与秀粉蚧属南亚分布种的分类检索表见附录 D。 8.1.6　形态鉴定结果判定 同时满足 8.1.4和8.1.5描述的形态特征即判定为木瓜秀粉蚧 。 8.2　分子生物学鉴定 8.2.1　DNA提取 由于粉蚧的个体小 ，宜选用适用微量样品提取的商用试剂盒 ，取样一般以单头虫体为宜 ，提取方法 参照试剂盒说明步骤 。 8