ICS67.080.01 CCSB31 中华人民共和国国家标准 GB/T44620—2024 苹果及苹果制品中根皮苷的检测方法 高效液相色谱法 Determinationofphloridzininappleandappleproducts— Highperformanceliquidchromatographymethod 2024-09-29发布 2025-04-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国标准化研究院提出并归口。 本文件起草单位:北京化工大学、中国标准化研究院、中华全国供销合作总社济南果品研究所、中国 农业大学、深圳市易瑞生物技术股份有限公司、浙江天草生物科技股份有限公司、河北冠卓检测科技股 份有限公司、北京市科学技术研究院分析测试研究所(北京市理化分析测试中心)、合肥师范学院、山东 天元盈康检测评价技术有限公司、河北省晨光检测技术服务有限公司、中山洪力健康食品产业研究院有 限公司、食药环检验研究院(山东)集团有限公司、利和味道(青岛)食品产业股份有限公司、南京中科药 业有限公司。 本文件主要起草人:魏芸、路艳珍、席兴军、兰韬、严义勇、郑晓冬、倪汉文、周文峰、魏彤宇、曹宁、 鲁润华、刘媛媛、刘聪、靳兰、曾加佳、于迎春、王文娟、王尉、贺天雨、闫晨、邵云东、黄孟乔、张敬轩、张与弛、 翟翠翠、雷敏芝、张晓芳、焦利卫、孙学文、黄雯雯、鞠小敏、李盼盼、赵兴利、钟离建民、李国升、张永泽、 张梦颖、管煜伟、冯鹏、张永昌、周亚杰、莫秋华、段佳欣。 ⅠGB/T44620—2024 苹果及苹果制品中根皮苷的检测方法 高效液相色谱法 1 范围 本文件描述了苹果及苹果制品中根皮苷含量的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于苹果及苹果制品中根皮苷的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 样品经乙醇水溶液(80%)提取,C18吸附剂净化,采用液相色谱分离,紫外检测器或二极管阵列检测 器检测,以保留时间定性,外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有规定,仅用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,一级。 5.2 抗坏血酸(C6H8O6,CAS号:50-81-7)。 5.3 乙腈(C2H3N,CAS号:75-05-8):色谱纯。 5.4 乙醇水溶液(80%):量筒量取80mL乙醇(C2H6O,CAS号:64-17-5)及20mL水至试剂瓶中, 摇匀。 5.5 三氟乙酸水溶液(0.01%):量筒量取1000mL水至试剂瓶中,用移液枪吸取0.1mL的色谱纯三 氟乙酸(C2HF3O2,CAS号:76-05-1)至试剂瓶中,摇匀。 5.6 标准品:根皮苷(Phloridzin,C21H24O10,CAS:60-81-1),含量≥98.0%。 5.7 标准储备液(1.0mg/mL):准确称取根皮苷标准品25mg(精确至0.0001g)于25mL容量瓶 中,用乙腈(5.3)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。0℃~4℃冰箱避光保存,有效期为30d。 5.8 根皮苷系列标准工作液:分别吸取根皮苷标准储备液(5.7)0.1mL、0.25mL、0.5mL、1.0mL、 1GB/T44620—2024 2.5mL至10mL容量瓶中,用乙腈(5.3)定容至刻度,配制成质量浓度为10.0μg/mL、25.0μg/mL、 50.0μg/mL、100.0μg/mL、250.0μg/mL,再分别取0.1mL及1mL质量浓度为10.0μg/mL的标准工 作液至10mL容量瓶中,用乙腈(5.3)定容至刻度,配制质量浓度为0.1μg/mL及1.0μg/mL标准工作 液。现用现配。 5.9 C18吸附剂:十八烷基键合硅胶吸附剂(40μm~63μm)。 5.10 滤膜:0.22μm,有机相。 5.11 离心管:100mL。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 6.2 分析天平:感量为0.0001g和0.01g。 6.3 超声波清洗器:功率不低于100W,频率不低于40kHz,或相当的设备。 6.4 离心机:转速不低于6000r/min,或相当的设备。 6.5 涡旋混匀仪:功率不低于60W,或相当的设备。 6.6 便携式榨汁机:功率不低于20W,或相当的设备。 6.7 0.22μm微孔有机相滤膜。 6.8 移液枪:10μL~100μL或100μL~1000μL。 7 分析步骤 7.1 试样制备 鲜苹果:取苹果500g全果,洗净,用干净纱布轻轻将苹果表面擦净,将其可食用部分(只去除苹果 梗,保留果核)切碎,加入0.1g抗坏血酸(样品量不足500g的可根据检验需要适量调整取样量,并等比 例缩小抗坏血酸添加量),便携式榨汁机匀浆,取混合均匀后的供试样品作为供试试样。 固态苹果制品:取固态苹果制品(如苹果脆等)100g,加入0.1g抗坏血酸,绞碎并均质,取均质的供 试样品作为供试试样。 半固态苹果制品:半固态苹果制品应摇动或使用搅拌器搅拌,使其达到均匀后采样取样,取样 100g,加入0.1g抗坏血酸,充分混合均匀后作为供试试样。 液态苹果制品:液态苹果制品混匀后应立即取样,取样100g,加入0.1g抗坏血酸,充分混合均匀 后作为供试试样。 平行做两份试验。 7.2 提取 称取20g(精确至0.01g)试样于100mL离心管中,加入乙醇水溶液(80%)40mL,涡旋混匀,将 离心管置于超声清洗器中超声提取10min,超声后6000r/min离心5min,取出上清液,置于100mL 容量瓶中,再加入40mL乙醇水溶液(80%)于离心管中,重复超声提取1次,离心,合并上清液至 100mL容量瓶,用乙醇水溶液(80%)定容至刻度,摇匀备用。 7.3 净化 取4mL定容后的提取液,加入10mgC18吸附剂,涡旋1min,6000r/min离心5min,取上层清液 1mL过0.22μm滤膜,用于高效液相色谱测定。 2GB/T44620—2024 7.4 色谱测定 7.4.1 参考色谱条件 参考色谱条件如下: a) 色谱柱:C18色谱柱(250mm×4.6mm,粒径5μm),或等效色谱柱。 b) 流动相:A相为乙腈,B相为0.01%三氟乙酸水溶液。 c) 流速:1.0mL/min。 d) 柱温:30℃±1℃。 e) 测定波长:285nm。 f) 进样体积:10μL。 g) 梯度洗脱程序见表1。 表1 流动相梯度洗脱条件 时间/min A/% B/% 0 25 75 15 45 55 20 25 75 25 25 75 7.4.2 标准曲线的绘制 将根皮苷系列标准工作液在7.4.1色谱条件下分别注入高效液相色谱仪中,以系列标准工作液的 浓度为横坐标、峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,根皮苷标准色谱图见附录A中图A.1。 7.4.3 试样测定 将试样液(7.3)在7.4.1色谱条件下注入高效液相色谱仪中,以保留时间定性(与根皮苷标准样品保 留时间一致),同时记录其峰面积,根据标准曲线计算出试样液中根皮苷的浓度,平行测定两次,试样液 色谱图见图A.2。待测试样中根皮苷的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应稀释后再 进行分析。 7.4.4 空白试验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行。 8 结果计算与表示 试样中根皮苷的含量按公式(1)计算: X=(ρ-ρ0)×V×1000 m×1000×n …………………………(1) 式中: X———试样中根皮苷的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); ρ———试样液中根皮苷的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); ρ0———空白试验中根皮苷的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); 3GB/T44620—2024 V———被测试样的最终定容体积,单位为毫升(mL); m———称取试样的质量,单位为克(g); n———稀释倍数。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。 9 精密度 9.1 重复性 在重复性条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 9.2 再现性 在再现性条件下,获得的不同实验室间独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 10 其他 当称样量为20g时,本文件方法在苹果及苹果制品中的根皮苷检出限为0.15mg/kg,定量限为 0.50mg/kg。 4GB/T44620—2024