饲用果胶酶活力的测定 Determination of feed pectinase activity  ICS  65.120 CCS  B 46   中华人民共和国国家标准 GB/T 44738—2024 2024-10-2 6发布 2025-05-0 1实施     国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发 布目　　次 前言   ·····································································································   Ⅲ 1     范围   ··································································································   1 2     规范性引用文件   ······················································································   1 3     术语和定义   ···························································································   1 4     原理   ··································································································   1 5     试剂或材料   ···························································································   1 6     仪器设备   ······························································································   2 7     样品   ··································································································   2 8     试验步骤   ······························································································   2      8.1     试样溶液的制备   ·················································································   2      8.2     标准曲线绘制   ····················································································   3      8.3     测定   ······························································································   3 9     试验数据处理   ·························································································   3 10     精密度   ·······························································································   4 GB/T 44738—2024     Ⅰ 前　　言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76）提出并归口。 本文件起草单位：武汉新华扬生物股份有限公司、北京昕大洋科技发展有限公司、广东溢多利生物 科技股份有限公司、山东隆科特酶制剂有限公司、诺维信（中国）投资有限公司。 本文件主要起草人：周樱、徐丽、詹志春、赵丽芳、冯国华、张法玲、孙薛蔚、苏丹、余艳、李阳源、 王克芬、王金凤。   GB/T 44738—2024     Ⅲ 饲用果胶酶活力的测定 1　范围   本文件描述了饲用果胶酶活力的分光光度测定方法。 本文件适用于饲料添加剂果胶酶和含有果胶酶的混合型饲料添加剂酶制剂中果胶酶活力的测定。 本文件不适用于碱性果胶酶活力的测定。 本方法定量限为10 U/g（或U/mL）。 2　规范性引用文件   下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195　动物饲料　试样的制备 3　术语和定义   下列术语和定义适用于本文件。 3.1　 果胶酶活力单位　pectinase activity unit 在37 ℃、pH 3.5的条件下，每小时从质量浓度为2.25 mg/mL的果胶溶液中分解释放1 mg还原糖所 需要的酶量。 注：以U表示。 4　原理   果胶酶水解果胶溶液产生还原糖，用3，5﹘二硝基水杨酸显色，以分光光度计比色测定，计算果胶 酶活力。 5　试剂或材料   除非另有说明，仅使用分析纯试剂。 5.1　水：GB/T 6682，三级。 5.2　氢氧化钠溶液（200 g/L）：称取氢氧化钠20.0 g，加水溶解，冷却至室温后定容至100 mL。 5.3　柠檬酸溶液（0.1 mol/L）：称取一水柠檬酸21.01 g，加水溶解并定容至1 000 mL。 5.4　柠檬酸三钠溶液（0.1 mol/L）：称取二水合柠檬酸三钠29.41 g，加水溶解并定容至1 000 mL。 5.5　柠檬酸﹘柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L，pH=3.5）：取柠檬酸溶液（5.3）700 mL，柠檬酸三钠溶 液（5.4）300 mL，混匀，用柠檬酸溶液（5.3）或柠檬酸三钠溶液（5.4）调节pH至3.5。 5.6　果胶溶液（3.0 mg/mL）：称取果胶（≥74%聚半乳糖醛酸，CAS号：9000﹘69﹘5）0.3 g，精确 GB/T 44738—2024     1 至0.001 g，加入80 mL 0.1 mol/L柠檬酸﹘柠檬酸钠缓冲液（5.5），搅拌并加热，直至果胶完全溶解，加 热时间不超过1 h，在搅拌加热的过程中可补加适量的柠檬酸﹘柠檬酸钠缓冲液（5.5），总体积不超过 100 mL。继续搅拌至溶液冷却，用柠檬酸溶液（5.3）或柠檬酸三钠溶液（5.4）调节pH至3.5，用柠檬 酸﹘柠檬酸钠缓冲液（5.5）定容至100 mL。临用现配。 5.7　3，5﹘二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取DNS 3.15 g，加水500 mL，搅拌并加热至45 ℃左右至完 全溶解。然后缓慢加入100 mL氢氧化钠溶液（5.2），不断搅拌，直到溶液清澈透明（在加入氢氧化钠 过程中，保持溶液温度在45 ℃~48 ℃）。然后逐步加入91.0 g四水合酒石酸钾钠，温度控制在45 ℃~ 46 ℃，直到全部溶解。再加入2.5 g苯酚和2.5 g无水亚硫酸钠，溶液继续保持45 ℃~46 ℃并搅拌，直到 完全溶解。停止加热，冷却至室温后，用水定容至1 000 mL。过滤，取滤液，储存在棕色塑料瓶中， 避光保存，室温下存放7 d后可使用，有效期为6个月。 5.8　D﹘半乳糖醛酸标准溶液（10 mg/mL）：称取经65 ℃干燥4 h的D﹘半乳糖醛酸（纯度≥97%， CAS号：91510﹘62﹘2）1 g，精确至0.001 g，加柠檬酸﹘柠檬酸钠缓冲液（5.5）溶解，定容至100 mL。 临用现配。 5.9　D﹘半乳糖醛酸标准系列溶液：准确吸取适量的D﹘半乳糖醛酸标准溶液（5.8），用柠檬酸﹘柠檬酸 钠缓冲液（5.5）配制成质量浓度分别为0 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、1.2 mg/mL、 1.6 mg/mL的系列标准溶液。临用现配。 6　仪器设备   6.1　分光光度计：波长精度1 nm，可在540 nm比色。 6.2　分析天平：精度0.000 1 g。 6.3　pH计：精度0.01。 6.4　涡旋混合器。 6.5　振荡器。 6.6　恒温水浴锅：精度0.1 ℃。 6.7　秒表。 6.8　磁力搅拌器。 6.9　离心机：转速不低于5 000 r/min。 7　样品   按照GB/T 20195制备样品，至少200 g（或200 mL），固态样品应全部通过0.425 mm孔径的分析 筛。充分混匀，密闭保存，备用。液态样品混匀后转移至样品容器中，密封保存，备用。 8　试验步骤  8.1　试样溶液的制备  8.1.1　固态试样溶液的制备   平行做2份试验。称取样品0.2