ICS65.020.01 CCSB30 中华人民共和国国家标准 GB/T44739—2024 枸杞及其制品中枸杞多糖的测定 离子色谱法 DeterminationofLyciumbarbarumpolysaccharidesinwolfberryand interrelatedproduct—Ionchromatographymethod 2024-10-26发布 2025-05-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国标准化研究院提出并归口。 本文件起草单位:中国科学院兰州化学物理研究所、宁夏回族自治区药品检验研究院、青岛市资源 化学与新材料研究中心、中国标准化研究院、甘肃药业集团科技创新研究院有限公司、日照市质量检验 检测研究院、宁夏农林科学院枸杞科学研究所、兰州市食品药品检验检测研究院、北京林业大学、西北师 范大学、北京市科学技术研究院分析测试研究所(北京市理化分析测试中心)、甘肃中医药大学、内蒙古 自治区产品质量检验研究院、瑞士万通中国有限公司、青岛盛瀚色谱技术有限公司、宁夏中杞生态农业 科技有限公司、莱阳市检验检测中心、广东一方制药有限公司、汤臣倍健股份有限公司、无限极(中国)有 限公司、浙江天草生物科技股份有限公司、完美(广东)日用品有限公司、南京中科药业有限公司、苏州 大学。 本文件主要起草人:王宁丽、邸多隆、裴栋、马玲、张澜、黄新异、席兴军、兰韬、赵溪、刘建飞、邱国玉、 张曦燕、雷建都、臧娅妮、李燕、郁晓艺、杨颖丽、马宗卫、平吉文、王尉、乐胜锋、王晗、王小芳、刘笑笑、 孟玲玲、周旋、郭玫、高杨、李柚、田海峰、贾占魁、陈向东、李振雨、孙红梅、刘伟德、武俊超、周亚杰、冯鹏、 李笃信、王勇、张育生、谭琦。 ⅠGB/T44739—2024 枸杞及其制品中枸杞多糖的测定 离子色谱法 1 范围 本文件描述了枸杞及其制品枸杞原浆中枸杞多糖含量的离子色谱测定方法。 本文件适用于经干燥加工制成的各品种的枸杞成熟果实及枸杞制品枸杞原浆中枸杞多糖含量的测 定,其他枸杞制品中枸杞多糖含量的测定也能参考本方法。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 枸杞多糖 Lyciumbarbarumpolysaccharides 以半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等为单糖单元的多 糖,通过脱水缩合以糖苷键聚合而成的高分子化合物。 4 原理 样品经乙醇除杂、水回流提取得到枸杞多糖后,用三氟乙酸消解,产物经阴离子色谱柱分离,经离子 色谱仪测定,外标法定量,以各单糖的峰面积为基准计算出样品中枸杞多糖的含量。 5 试剂与材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,一级。 5.2 半乳糖(C6H12O6,CAS号:59-23-4):纯度≥98%。 5.3 阿拉伯糖(C5H10O5,CAS号:5328-37-0):纯度≥98%。 5.4 葡萄糖(C6H12O6,CAS号:50-99-7):纯度≥98%。 5.5 鼠李糖(C6H14O6,CAS号:10030-85-0):纯度≥98%。 5.6 木糖(C5H10O5,CAS号:58-86-6):纯度≥98%。 5.7 甘露糖(C6H12O6,CAS号:3458-28-4):纯度≥98%。 5.8 半乳糖醛酸(C6H10O7,CAS号:14982-50-4):纯度≥98%。 1GB/T44739—2024 5.9 葡萄糖醛酸(C6H10O7,CAS号:6556-12-3):纯度≥98%。 5.10 80%乙醇溶液:将400mL无水乙醇(CH3CH2OH,CAS号:64-17-5)加入500mL容量瓶中,用 水定容,混匀。 5.11 60%乙醇溶液:将300mL无水乙醇(CH3CH2OH,CAS号:64-17-5)加入500mL容量瓶中,用 水定容,混匀。 5.12 三氟乙酸溶液(2mol/L):准确移取15mL三氟乙酸(CF3COOH,CAS号:76-05-1),加入 100mL容量瓶中,用水定容,混匀。 5.13 氢氧化钠(100mmol/L)和乙酸钠(150mmol/L)混合溶液:准确称量8.00g氢氧化钠 (NaOH,CAS号:1310-73-2,色谱纯)和24.60g无水乙酸钠(CH3COONa,CAS号:127-09-3,色谱纯) 至预先加入约300mL水的500mL烧杯中,待完全溶解且温度降至室温后,转移至2000mL容量瓶 中,再用预先脱气的水溶解定容。 5.14 单糖标准储备溶液:分别准确称取100mg、210mg、150mg、60mg、140mg、30mg、510mg和 30mg(精确至0.1mg)半乳糖(5.2)、阿拉伯糖(5.3)、葡萄糖(5.4)、鼠李糖(5.5)、木糖(5.6)、甘露糖 (5.7)、半乳糖醛酸(5.8)和葡萄糖醛酸(5.9)标准品置于50mL烧杯中,用水溶解并转移至100mL容量 瓶,用水定容至刻度,混匀,4℃避光保存。葡萄糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸标准储备溶液有效期为 2个月,其他单糖标准储备溶液有效期为6个月。 5.15 混合单糖标准中间溶液:准确吸取10mL各单糖标准储备溶液(5.14),加入100mL容量瓶 中,用水稀释至刻度,混匀,4℃避光保存,有效期为1个月。 5.16 反相净化小柱(RP前处理小柱):C18填料。 5.17 尼龙水系膜:0.22μm。 6 仪器 6.1 离子色谱仪:配脉冲安培检测器(Au为工作电极,Pd为参比电极)。 6.2 微波消解仪:配有聚四氟乙烯消解管(升温参数:0~8min,升温至120℃)。 6.3 分析天平:感量0.0001g、感量0.01g。 6.4 小型粉碎机:460W、24000r/min。 6.5 旋转蒸发仪/平行浓缩仪。 6.6 涡旋混合器。 7 样品 7.1 试样制备 7.1.1 枸杞样品:取60℃真空干燥至恒重的枸杞样品,去除果蒂、叶子等杂质,粉碎,混匀备用。 7.1.2 枸杞制品:市售枸杞原浆,混匀备用。 7.2 试样提取 称取0.5g~5.0g(精确至0.01g)试样,置入250mL圆底烧瓶中,加入150mL乙醇溶液(5.10),加 热回流1h,趁热过滤,弃去滤液,滤渣与滤器用约50mL、45℃~75℃的80%乙醇溶液(5.10)分5次过 滤洗涤并弃去洗涤液;滤渣连同滤纸置烧瓶中,用150mL60%乙醇溶液(5.11)重复提取2次后,滤渣连 同滤纸置烧瓶中,将烧瓶置于80℃水浴锅中挥去残留的乙醇;加150mL水,加热回流2h,趁热过 滤,用约50mL、70℃~100℃的水过滤洗涤滤器,合并滤液与洗涤液于500mL浓缩瓶中,在70℃水 浴中旋转蒸发浓缩至约10mL,待冷却后转移至25mL容量瓶中,用水少量多次清洗旋蒸瓶,并将清洗 2GB/T44739—2024 液转移至容量瓶,定容,即得枸杞多糖提取液。 7.3 试样消解 准确移取4mL枸杞多糖提取液于微波消解管中,加入4mL三氟乙酸溶液(5.12),置于120℃微 波消解仪中消解20min后,冷却至室温;准确移取1mL消解液至旋蒸瓶中,于45℃水浴浓缩至样品 完全干燥。用水少量多次完全溶解上述干燥样品,并将溶液转移至5mL容量瓶中,定容,混匀,得试样 溶液。 8 测定步骤 8.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下: a) 色谱柱:基于聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物填料的阴离子交换色谱柱(4.0mm×250mm, 5μm),或性能相当者; b) 进样量:20μL; c) 流速:0.6mL/min; d) 柱温:30℃; e) 流动相:A相为水,B相为100mmol/L氢氧化钠和150mmol/L乙酸钠混合溶液(5.13),梯度 洗脱程序见表1; f) 检测器:脉冲安培检测器,Au工作电极,Pd参比电极,检测器电位波形程序见表2。 表1 梯度洗脱程序 时间 minA相 %B相 % 0.0 100 0 4.5 100 0 4.6 98 2 25.0 98 2 25.1 0 100 50.0 0 100 50.1 100 0 55.0 100 0 表2 检测器电位波形程序 时间 s电位 V积分 0.00 +0.05 — 0.20 +0.05 开始 3GB/T44739—2024 表2 检测器电位波形程序(续) 时间 s电位 V积分 0.30 +0.05 结束 0.30~0.35 +0.55 — 0.35~0.55 -0.10 — 8.2 标准曲线的绘制 混合单糖标准系列工作溶液:分别移取混合单糖标准中间溶液(5.15)0mL、1mL、5mL、10mL、 15mL、20mL、25mL至500mL容量瓶,用水定容至刻度,混匀,配制成不同质量浓度的混合单糖标准 系列工作溶液,见附录A中表A.1。 将反相净化小柱(5.16)依次用5mL甲醇、10mL水活化,放置30min后使用。吸取4mL混合单 糖标准系列工作溶液过0.22μm尼龙水系膜(5.17)后,加载至反相净化小柱(5.16),弃去前2mL~ 3mL流出液,收集续滤液,待测。按照8.1设定的色谱条件