(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210787637.4 (22)申请日 2022.07.06 (71)申请人 厦门大昌生物技 术服务有限公司 地址 361100 福建省厦门市同安区西柯镇 同集北路158号-2101 (72)发明人 黄贞胜　 (74)专利代理 机构 广州京诺知识产权代理有限 公司 44407 专利代理师 吴嘉滨 (51)Int.Cl. C12N 1/16(2006.01) C12P 7/6463(2022.01) C12M 1/38(2006.01) C12M 1/24(2006.01) C12M 1/12(2006.01)C12M 1/02(2006.01) C12M 1/04(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种圆红冬孢酵母培 养工艺 (57)摘要 本发明公开了一种圆红冬孢酵母培养工艺， 包括以下步骤： S1： 菌种激活： 先从YPD斜面培养 基上保存的圆红冬孢酵母挑取少量菌体转移到 新配制的培养中， 置于28℃恒温培养箱中活化培 养36‑48h， 获得新的斜面培养菌种。 本发明以圆 红冬孢酵母菌株出发， 通过了解圆红冬孢酵母的 菌落形态， 测定圆红冬孢酵母的生长曲线， 比较 鉴定、 提取圆红冬孢酵母的油脂含量的方法， 最 后确定了以下的条件能有最高的油脂提取率， 可 以为发展利用圆红冬孢酵母生产微生物油脂打 下根基。 权利要求书2页 说明书5页 附图4页 CN 115074262 A 2022.09.20 CN 115074262 A 1.一种圆红冬孢酵母培 养工艺， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 菌种激活： 先从YPD斜面培养基上保存的圆红冬孢酵母挑取少量菌体转移到新配制 的培养中， 置于28℃恒温培 养箱中活化培 养36‑48h， 获得新的斜 面培养菌种； S2： 菌种分裂： 通过斜面活化培养后， 用接种环在无菌环境下从培养好的新鲜菌种斜面 上挑取菌体接入装有50ml己灭过菌的液体种子培养基250ml三角瓶中， 并在28℃、 转速为 180‑200 r/min的条件下摇瓶培 养24h‑48h； S3： 菌种实验培养基： 将种子液以10%的接种量接入装有1L产油脂培养基的3L三角瓶中 进行摇瓶发酵， 在28℃和  180 rpm下振荡培 养120h和设置6个不同碳氮比； S4： 确定碳氢比并培养菌种： 根据培养环境的温度、 湿度等参数改变， 制作相应的圆红 冬孢酵母生长图， 并找到拐点， 记录碳氢比， 将此碳氢比下的产油脂培养基重新接种圆红冬 孢酵母菌体培 养即可。 2.根据权利要求1所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 所述YPD斜面培养 基包括蛋白胨、 酵母 粉、 葡萄糖和琼脂 。 3.根据权利要求1所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 所述产油脂培养基 包括MgSO4·7H2 O、 KH2PO4、 (NH4)2S04、 CaCl2、 FeCl3·6H2O、 FeCl3·7H2O、 MnSO4·H2O、 酵母粉 和葡萄糖， 且其中酵母 粉为调节碳氢比的物料。 4.根据权利要求1至3任一权利要求所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 还包括酵母菌培养增殖工艺， 所述培养增殖工艺采用酵母培养增殖装置进行， 所述装置包 括多个串联的环形管道式培养腔体(1)， 相邻两培养腔 体(1)之间的通路通过可开闭的第一 挡板(2)控制开闭； 所述培养腔体(1)包括外壁(11)和 套设在外壁(11)内的内壁(12)； 所述 外壁(11)与内壁(12)之间设置有第一 温度调节层(13)； 所述外壁(11)和内壁(12)均为导热 材料； 所述第一温度调节层(13)包括密集排列的多个第一半导体制冷片(14)； 所述培养腔 体(1)内部中心沿其长度方向设置有空心的内温度调节棒(15)； 所述内温度调节棒(15)内 部填充有固 ‑液相变材料(16)； 所述内温度调节 棒(15)可连通外界循环 其内部的固 ‑液相变 材料(16)； 所述固 ‑液相变材料(16)的相变温度在酵母菌的安全温度范围内； 所述内温度调 节棒(15)外表 面设置有第二 温度调节层(17)； 所述第二 温度调节层(17)也包括密集排列的 多个第二半导体制冷片(18)； 所述内温度调节 棒(15)棒体为导热材料； 所述培养腔体(1)的 外壁(11)上分别沿其切线方向设置有分别可开闭的用于补充 所需无菌气体的进气管(3)以 及用于补充所需培 养液及菌体的进料 管(4)。 5.根据权利要求4所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 相邻两培养腔体 (1)之间通过连接管(6)连通， 所述连接管(6)同时与两培养腔体(1)的外壁(11)相切； 所述 第一挡板(2)铰接在前一道培养腔体(1)的出料口处， 通过转动实现在闭合连接管(6)的同 时使前一道培养腔体(1)保持循环通路， 而在打开连接管(6)的同时使前一道培养腔体(1) 的循环通路闭合。 6.根据权利要求5所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 后一道培养腔体 (1)的进料口处铰接有第二挡板(7)； 所述第二挡板(7)通过转动实现在闭合连接管(6)的同 时使后一道培养腔体(1)保持循环通路， 而在打开连接管(6)的同时使后一道培养腔体(1) 的循环通路闭合。 7.根据权利要求6所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 所述第一挡板(2)权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115074262 A 2为多孔结构， 且表 面蒙附有防水透气膜(21)； 一抽气管(22)连通连接管(6)向外抽气使 连接 管(6)内保持负压 。 8.根据权利要求7所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 所述外壁(11)外表 面均匀设置有多片环形导热片； 所述环形导热片与外壁(11)长度方向垂直； 所述内壁(12) 内表面设置有螺 旋膛线或圆滑凸起。 9.根据权利要求8所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 多个培养腔体(1) 整体上下分布。 10.根据权利要求9所述的一种圆红冬孢酵母培养工艺， 其特征在于， 所述酵母培养增 殖方法为： ①将初始酵母菌混合培养液通过进料管(4)以一定的速度注入培养腔体(1)中， 同时以 连续或脉冲的形式通过进气管(3)向培养腔体(1)内注入压缩的利于酵母菌培养的无菌气 体， 由于进气管(3)与进料管(4)均与培养腔体(1)相切， 因此可使酵母菌 混合培养液在培养 腔体(1)内循环流动， 同时内壁(12)内表面的螺旋膛线或圆滑凸起能够使混合培养液具有 更强的紊流， 促进酵母菌混合培养液 的物质交换和气体溶解， 便于其中的培养液和气体更 新以及温度的均匀； 培养腔体(1)中的多余气体和废弃穿过防水透气膜(21)和第一挡板(2) 通过抽气管(2 2)抽出， 从而保障培 养腔体(1)中的气压稳定和气体新鲜度； ②通过第一半导体制 冷片(14)和第二半导体制 冷片(18)从内外两个方向同时对培养 腔体(1)内的酵母菌混合培养液的温度进行精确的控制， 以保障酵母菌高效的培养增殖， 固‑液相变材料(16)不仅可通过循环流动以及自身较大的比热容在突 发情况下半导体制冷 片故障或失效时快速的排除多余的热量， 而且能够通过自身固 ‑液相变特点自动平衡酵母 菌混合培 养液的温度， 在一段时间内避免酵母菌大规模死 亡； ③在设定培养时间达成后， 第一挡板(2)和第二挡板(7)分别向前一道培养腔体(1)和 后一道培养腔 体(1)内旋转， 使流动的酵母菌培养液在惯 性作用下从上一道培养腔 体(1)通 过连接管(6)进入 下一道培养腔体(1)内， 完成后， 第一挡板(2)和第二挡板(7)重新闭合， 前 一道培养腔体(1)继续注入新的酵母菌混合培养液或更之前一道培养腔体(1)的酵母菌混 合培养液， 后一道培养腔体(1)继续培养之前的酵母菌培养液， 直至在进行N道培养后达成 培养增殖目标后排出。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115074262 A 3