(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210636988.5 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 中南大学 地址 410083 湖南省长 沙市岳麓区麓山 南 路932号 (72)发明人 熊炜　邓湘赢　范春梅　曾朝阳　 王忆安　晏其佳　石磊　范松青　 张姗姗　龚朝建　李夏雨　李桂源　 (74)专利代理 机构 长沙市融智专利事务所(普 通合伙) 43114 专利代理师 袁靖 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 31/713(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 circSTX6在制备鼻咽癌诊断和/或预后、 治 疗制剂中的应用和诊断、 治 疗制剂 (57)摘要 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域， 具体 涉及circSTX6在制备鼻咽癌诊断和/或预后、 治 疗制剂中的应用和诊断、 治疗制剂。 首次发现 circSTX6在鼻咽癌中差异表 达， 可以作为诊断或 预后分子标记物， 还可能成为鼻咽癌治疗的潜在 靶 点 。本 发 明 采 用 反 义 寡 核 苷 酸 (antisenseoligonu cleotide,ASO)针对环状RNA 头尾相接处的拼接位点设计序列对circSTX6进 行干扰， 在鼻咽癌 细胞系HNE2、 CNE2和HONE1中进 行基质胶侵袭实验、 划痕愈合实验， 相对于NC组， ASO组细胞的侵袭和迁移能力明显减弱， 即沉默 circSTX6抑制了 鼻咽癌细胞的侵袭转移,即抑制 circSTX6能治疗鼻咽癌， 具有深远的临床意义和 重要的推广应用前 景。 权利要求书1页 说明书12页 序列表3页 附图6页 CN 114921550 A 2022.08.19 CN 114921550 A 1.circSTX6在制备鼻咽癌诊断和/或预后制剂中的应用， 所述的circSTX6序列如SEQ   ID NO.1所示。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的鼻咽癌诊断和/或预后制 剂包括PCR 或者原位杂交检测circSTX6表达量的试剂。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的PCR或者原位杂 交检测circSTX6表 达量的试剂中包 含： 环状RNA circSTX6实时定量PCR引物 上游引物： 5' ‑GGCTGGACAATGTGATGA AG‑3' 下游引物： 5' ‑AGTTCTGGCTGCCACTGTCT ‑3'； 或者扩增circSTX6全长引物 上游引物： 5' ‑CCATCGATGACATGA AAGATCAGATGTCA ACTTCAT‑3' 下游引物： 5' ‑TCCCCGCGGCACTGGTCATATGAGATACT TTTGCAAG‑3'； circSTX6原位杂交探针序列： 5' ‑TGATCTTTCATGTCCACTGGTCATATGAG ‑3'。 4.一种鼻咽癌诊断和/或预后制剂， 其特征在于， 包含PCR或者原位杂 交检测circSTX6 表达量的试剂， 所述的circSTX6序列如SEQ  ID NO.1所示。 5.根据权利要求4所述的鼻咽癌诊断和/或预后制 剂， 其特征在于， 包含权利要求3 中所 述的引物或者原位杂交探针。 6.抑制circSTX6表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用， 所述的circSTX6序列如 SEQ ID NO.1所示。 7.根据权利 要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的抑制circSTX6表达的试剂包括反义 寡核苷酸。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于， 所述的反义寡核苷酸： 正义链(5'‑3')CAUAUGAC CAGUGGACAUGAT T 反义链(5' ‑3')UCAUGUC CACUGGUCAUAUGT T。 9.一种治疗鼻咽癌的制剂， 其特征在于， 包括抑制circSTX6表达的试剂， 所述的 circSTX6序列如SEQ  ID NO.1所示。 10.根据权利要求9所述的治疗鼻咽癌的制剂， 其特征在于， 所述的抑制circSTX6表达 的试剂包括反义寡核苷酸， 优选所述的反义寡核苷酸： 正义链(5'‑3')CAUAUGAC CAGUGGACAUGAT T 反义链(5' ‑3')UCAUGUC CACUGGUCAUAUGT T。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921550 A 2circSTX6在制备鼻咽癌诊断和/或预后、 治疗制剂中的应用和 诊断、 治疗制剂 技术领域 [0001]本发明属于肿瘤分子生物学技术领域， 具体涉及一种circSTX6在制备鼻咽癌诊断 和/或预后、 治疗制剂中的应用和诊断、 治疗制剂。 背景技术 [0002]鼻咽癌(Nasopharyngeal  carcinoma， NP C)是我国南方常见的头颈部恶性肿瘤， 有 明显的区域聚集性和人种好发性。 鼻咽癌的发病因素主要包括遗传因素、 EB病毒感染和环 境因素等。 鼻咽癌多为 非角化型鳞癌， 恶性程度较高， 早期即可出现颈部淋巴结转移。 目前， 鼻咽癌的治疗方法主要是放疗、 联合化疗和 手术治疗等， 虽然早期NPC患者的5年总生存率 高达95％， 但鼻咽和颈淋巴结复发率为8.6％～23.7％。 这是由于NPC的发生和发展涉及复 杂的基因调控和多阶段过程， 其分子机制尚不清楚， 加之肿瘤异质性和 放疗抵抗引起的个 体差异， 传统放疗的治疗效果不是非常的理想。 因此， 研究治疗鼻咽癌的治疗靶标和诊断分 子标记物至关重要。 [0003]环状RNA(Circular  RNA,circRNA)主要来源于蛋白质编码基因的外显子区， 也可 以由内含子区、 UTR区、 基因间区、 非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。 CircRNA是 由前体(mRNA  precursor  messenger  RNA,pre‑mRNA)反向拼接而形成的一类不具有5'末端 帽子和3'末端po ly(A)尾巴并以共价键形成环状套索结构的非编码RNA分子 。 [0004]CircRNA形成过程可以分为两大类， 即外显子环化(exon  circularization)和内 含子环化(intron  circularization)两 大机制。 Jeck等提出外显子来源的circRNA(exonic   circRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lari at‑driven circularization)和内含子 配对驱动环化(intron ‑pairing‑driven circularization)两种形成方式， 套索驱动环化 是外显子3'端作为剪接 供体(splic e donor)攻击5'端剪接受体(splic e receptor)， Alu区 共价结合而形成套索结构， 套索结构进 行内部拼接后切除内含子形成circRNA； 内含子配对 驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后， 剪除内含子形成circRNA。 其实 内含 子本身也可以环化， 可以形成内含子来源circRNA(circular  intronic  RNA， ciRNA)。 CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴并 以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。 有着高度的稳定性、 保守性、 特异性， 并且含量高的特点。 [0005]CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现， 随后Hsu  MT等人使用电子显微镜技 术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。 近年来越来越多的circRNA被发现， 目前为止 已知的circRNA数目已经达到三万多个。 CircRNA也不再被认 为是错误的RNA转录本， 而是作 为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。 发现更多的新型circRNA作为肿瘤 诊断和预后的 生物标志物及其应用， 并能尽早在专利领域得到好的保护， 能显著提升我国在该技术领域 的国际竞争力。 [0006]本发明检测到一个长度为391bp的环状RNA  circSTX6。 通过实验发现该环状RNA在说　明　书 1/12 页 3 CN 114921550 A 3