(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210706744.X (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 浙江大学 地址 310012 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 朱永良　吴敬妮　吴有禾　余琳　 (74)专利代理 机构 杭州杭诚专利事务所有限公 司 33109 专利代理师 施雨婧 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C12N 15/13(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 33/68(2006.01) (54)发明名称 一种抗人MICA/B α3区二价纳米抗体及其 应用 (57)摘要 本发明涉及生物工程技术领域， 公开了一种 抗人MICA /B α3区二价纳米抗体及其应用。 该二 价纳米抗体的重链可变区包 括如SEQ ID NO:1所 示的氨基酸序列， 或者包括与SEQ  ID NO:1具有 相似或相近生物学活性的氨基酸序列。 本发明的 抗人MICA/B  α3区二价纳米抗体具有纳米抗体 的优势， 且能够在体内长时间稳定存在， 特异性 地结合人MICA /B α3区， 有效抑制肿瘤细胞表面 MICA/B的水解脱落， 进而恢复NK细胞的免疫监 视， 实现肿瘤的靶向治 疗。 权利要求书1页 说明书5页 序列表3页 附图2页 CN 115368459 A 2022.11.22 CN 115368459 A 1.一种抗人MICA/B  α3区的二价纳米抗体， 其特征在于， 包括重链可变区； 所述重链可 变区包括如SEQ  ID NO:1所示的氨基酸序列， 或者包括与SEQ  ID NO:1具有相似或相近生物 学活性的氨基酸序列。 2.如权利要求1所述的二价纳米抗体， 其特征在于， 还包括重链恒定区； 所述重链恒定 区包括如SEQ  ID NO:3所示的氨基酸序列， 或者包括与SEQ  ID NO:3具有相似或相近生物学 活性的氨基酸序列。 3.如权利要求1所述的二价纳米抗体， 其特征在于， 还包括轻链恒定区； 所述轻链恒定 区包括如SEQ  ID NO:4所示的氨基酸序列， 或者包括与SEQ  ID NO:4具有相似或相近生物学 活性的氨基酸序列。 4.一种编码如权利要求1~3之一所述二价纳米抗体的核酸分子， 其特征在于， 包括编码 重链可变区的核苷酸序列； 所述编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 5.一种包 含如权利要求 4所述核酸分子的克隆或表达载体。 6.一种含有如权利要求 4所述核酸分子或如权利要求5所述载体的宿主细胞。 7.如权利要求1~3之一所述二价纳米抗体或如权利要求4所述核酸分子或如权利要求5 所述载体或如权利要求6所述宿主细胞在制备 特异性结合人MICA/B  α 3区的药物中的应用。 8.如权利要求1~3之一所述二价纳米抗体或如权利要求4所述核酸分子或如权利要求5 所述载体或如权利要求6所述宿主细胞在制备抑制肿瘤细胞表 面MICA/B蛋白水解脱落的药 物中的应用。 9.如权利要求1~3之一所述二价纳米抗体或如权利要求4所述核酸分子或如权利要求5 所述载体或如权利要求6所述宿 主细胞在制备靶向治疗肿瘤的抗体药物或抗体偶联物产品 中的应用。 10.如权利要求1~3之一所述二价纳米抗体或如权利要求4所述核酸分子或如权利要求 5所述载体或如权利要求6所述宿主细胞在制备结合MICA/B  α3区蛋白的检测试剂中的应 用， 其特征在于， 所述检测试剂为免疫组织化学试剂或酶联免疫吸 附试验检测试剂或蛋白 质印迹检测试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115368459 A 2一种抗人MICA/B  α3区二价纳米抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物工程技术领域， 尤其涉及一种抗人MICA/B  α3区二价纳米抗体及 其应用。 背景技术 [0002]结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一， 发病率及死亡率在我国均逐渐上升， 带来较 大的社会及经济负担。 有效干预及阻断结直肠癌转移对改善患者预后及延 长生存预期具有 重要意义， 然而目前尚无理想的治疗手段。 激活或改造自身活性免疫细胞对肿瘤转移 “窗口 期”的肿瘤细胞进行免疫监视和清除是目前一个理想的治疗手段， 然而如何有效干预肿瘤 免疫逃逸并恢复免疫细胞监视是抗肿瘤免疫治疗中的关键问题。 MICA/B是自然杀伤细胞 （Natural  killer cell， NK） 等多种免疫效应细胞识别肿瘤细胞的重要配体， 与NKG2D受体 高亲和性结合后促进NK细胞释放穿孔素和颗粒素等溶解肿瘤细胞或诱导其死亡。 有研究表 明， 高侵袭性的肿瘤细胞尤其是肿瘤转移 “窗口期”的肿瘤细胞可释放多种蛋白酶通过水解 MICA/B α 3区促使MICA/B 从肿瘤细胞表面脱落， 造成NK细胞不能有效识别和杀灭侵入脉管 系统的肿 瘤细胞， 从而使肿 瘤细胞实现 “免疫逃逸 ”。 抑制MICA/B从肿瘤细胞表面脱落可以 恢复NK细胞对其杀伤作用， 是实现免疫监视肿瘤 细胞的重要环 节。 [0003]骆驼科动物 （如羊驼、 骆驼等） 和一些软骨鱼类 （如鲨鱼、 鼠鱼等） 的外周血中存在 一种天然轻链缺失而只包含一个重链可变区 （VHH） 和两个常规的CH2和CH3区的抗体， 是自 然存在可以和抗原结合的最小片段。 VHH可以单独稳定地存在于体外并具有独立抗原识别 能力， 被称为纳米抗体或驼类单域抗体， 纳米抗体晶体宽度为2.5  mm， 长4 nm， 分子量仅为 传统抗体的1/10。 和传统的抗体相比， 纳米抗体 分子量小且结构简单， 有 更高的理化性质稳 定性 （良好的溶解性， 不同的温度和pH中均具有良好的稳定性） ， 与靶点结合特异 性强， 有更 高的组织穿透力 （更好地渗透到组织中并能够识别隐藏的、 传统抗体无法结合的表位） ， 适 合工业化大规模生产 （在细菌和酵母中可大量生产） ， 更容易改造和优化， 并且更容易人源 化 （可在不显著改变其特异性及活性的情况下通过取代少数氨基酸而进行人源化） 。 此外， 这些可变域的结构与人类免疫球蛋白IgG3的一个亚类的可变域高度同源， 不会在人体中引 起剧烈的免疫反应。 纳米抗体在未来的研究和临床诊断、 治疗中可被广泛应用， 有广阔的前 景。 [0004]研发一种抗人MICA/B  α3区的二价纳米抗体， 用以特异性结合MICA/B  α3区， 抑制 MICA/B从肿 瘤细胞表面水解脱落， 从而恢复NK细胞的免疫监视， 是一种靶向治疗肿 瘤的可 能策略。 纳米抗体分子量小且结构简单， 在人体内代谢较快， 而二价纳米抗体提高了纳米抗 体在人体内的稳定性， 延 长抗体在体内的生物作用时间。 然而， 目前尚无特异性结合MICA/B   α 3区二价纳米抗体的相关报道。 发明内容 [0005]为了解决现有技术中没有特异性结合MICA/B  α3区的二价纳米抗体的技术问题，说　明　书 1/5 页 3 CN 115368459 A 3