(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210651686.5 (22)申请日 2022.06.10 (71)申请人 东华大学 地址 201620 上海市松江区人民北路2 999 号 (72)发明人 郭睿　刘俊洁　史向阳　 (74)专利代理 机构 上海泰能知识产权代理事务 所(普通合伙) 3123 3 专利代理师 黄志达 (51)Int.Cl. A61K 48/00(2006.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 47/54(2017.01) A61K 47/59(2017.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 一种用于递送CRISPR/Cas系统的包裹纳米 金颗粒的双响应核-壳树状大分子 (57)摘要 本发明涉及一种用于递送CRISPR/Cas系统 的包裹纳米金颗粒的双响应核 ‑壳树状大分子， 所述包裹纳米金颗粒的核 ‑壳树状大分子材料为 纳米载体， 递送pDNA形式的CRISPR/Cas系统。 本 发明具有易制备、 产率高、 低毒 安全、 响应性释放 等优点， 而且有良好的基因转染效率， 在实现肿 瘤基因治疗、 免疫治疗方面具有潜在的应用前 景。 权利要求书2页 说明书9页 附图7页 CN 114984248 A 2022.09.02 CN 114984248 A 1.一种包裹纳米金颗粒的核 ‑壳树状大分子材料， 其特征在于， 所述材料为乳糖酸修饰 且内部包裹纳米金颗粒 的第五代聚酰胺‑胺树状大分子为核， 四溴甲基苯硼酸修饰的第三 代聚酰胺 ‑胺树状大分子为壳的材 料。 2.一种包裹纳米金颗粒的核 ‑壳树状大分子材 料的制备 方法， 包括： (1)乳糖酸LA、 EDC、 NHS反应， 得到活化的乳酸糖LA； 将第五代聚酰胺 ‑胺树状大分子溶 液PAMAM G5、 活化的乳糖酸LA混合， 室温搅拌反应， 透析、 冷冻干燥， 得到第五代树状大分 子‑乳糖酸G5 ‑LA； (2)将G5‑LA的水溶液中加入氯金酸水溶液， 冰浴搅拌混合， 加入硼氢化钠 水溶液， 冰浴 搅拌反应， 然后透析， 冷冻干燥， 得到干燥的得到干燥的包裹纳米金 的第五代树状大分子 ‑ 乳糖酸(Au0)25‑G5‑LA； (3)将四溴甲基苯硼酸PBA溶液、 第三代聚酰胺 ‑胺树状大分子PAMAM  G3溶液混合， 水浴 搅拌反应， 透析， 冷冻干燥， 得到第三代树状大分子 ‑苯硼酸G3 ‑PBA； (4)将(Au0)25‑G5‑LA的水溶液、 G3 ‑PBA的水溶液混合， 室温搅拌反应， 透析， 冷冻干燥， 得到包裹纳米金颗粒的核 ‑壳树状大分子材 料Au CSTDs。 3.根据权利要求2所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中G5与乳糖酸LA的摩尔比 为1:10～1:3 0； 所述室温搅拌 反应时间为 46‑48h； 所述活化的乳糖酸LA具体为： 将乳糖酸LA的水溶液中加入EDC溶液， 室温搅拌反应30 ‑ 40min， 再加入NHS溶液室温搅拌反应3 ‑4h， 得到活化的乳糖酸LA； 其中乳糖酸LA与EDC、 NHS 的摩尔比为1:10 ‑20： 10‑20。 4.根据权利 要求2所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中G5 ‑LA的水溶液中加入氯 金酸水溶液， 冰浴搅拌混合15 ‑30min， 加入硼氢化钠水溶液， 冰浴搅拌反应3 ‑4h； 所述G5 ‑LA 和氯金酸的摩尔比为1:25～1:5 0； 氯金酸和硼氢化钠的摩尔比为1:3 ‑4。 5.根据权利 要求2所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中水浴水浴65 ‑75℃搅拌反 应时间为22 ‑24h； 所述四溴甲基苯硼酸PBA溶液的溶剂为二氯亚砜DMSO； 所述G3和PBA的摩 尔比为1:24～1:3 6。 6.根据权利要求2所述制备方法， 其特征在于， 所述步骤(4)中中室温搅拌反应22 ‑24h； (Au0)25‑G5‑LA和G3‑PBA的摩尔比为1:10～1:15 。 7.一种递送CRISPR/Cas系统的包裹纳米金颗粒的双响应核 ‑壳树状大分子材料， 其特 征在于， 权利要求1所述包裹纳米金颗粒的核 ‑壳树状大分子材料为纳米载体， 递送pDNA形 式的CRIS PR/Cas系统。 8.一种递送CRISPR/Cas系统的包裹纳米金颗粒的双响应核 ‑壳树状大分子材料的制备 方法， 包括： 将 权利要求 1所述包裹纳米金颗粒的核 ‑壳树状大分子材料溶解在水中， 然后与 含有CRISPR/Cas系统的PD ‑L1 pDNA溶液共孵育15 ‑20min， 得到递送CRISPR/Cas系统的包 裹 纳米金颗粒的双响应核 ‑壳树状大分子材 料Au CSTDs/PD‑L1 pDNA。 9.根据权利要求8所述制备方法， 其特征在于， 所述包裹纳米金颗粒的核 ‑壳树状大分 子材料与PD ‑L1 pDNA的N/P为0.125:1～30:1； 所述水为DEPC水； 所述PD ‑L1 pDNA为PX330， 其中Cas蛋白类型为 spCas9， 靶点序列的序列为TCCAAAGGACTTGTA CGTGG； PD ‑L1 pDNA溶液的 溶剂为DEPC水。 10.一种权利 要求7所述递送CRISPR/Cas系统的包裹纳米金颗粒的双响应核 ‑壳树状大权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114984248 A 2分子材料在制备肿瘤的基因治疗或免疫 治疗材料中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114984248 A 3