(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210935849.2 (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 江苏丰华 生物制药有限公司 地址 224001 江苏省盐城市大丰区高新 技 术区五一路1号 (72)发明人 张慧君　严志军　张文学　陈太标　 花亚东　 (74)专利代理 机构 江苏盐城世 拓专利代理事务 所(普通合伙) 32526 专利代理师 陈翠翠 (51)Int.Cl. G01N 21/31(2006.01) G01N 21/01(2006.01) (54)发明名称 一种利用紫外-可见分光光度法测定替奈普 酶中尿素残留量的方法 (57)摘要 本发明涉及一种利用紫外 ‑可见分光光度法 测定替奈普酶中尿素残留量的方法， 其采用在酸 性反应环境中加热， 使尿素与二乙酰缩合， 生成 色素原二嗪， 再以紫外 ‑可见分光光度法进行测 定， 从而实现了替奈普酶(TNK ‑tPA)中尿素的残 留量的准确测定； 同时， 该方法具有检测专属性 高、 重复性好、 线性系数良好、 精密度高等优点， 为提高替奈普酶(T NK‑tPA)产品的质量制定了一 个科学、 严格的内控 标准， 对提高替奈普酶(T NK‑ tPA)产品的质量具有指导 性意义。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115308149 A 2022.11.08 CN 115308149 A 1.一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法， 其特征在于： 该 方法的步骤如下： 步骤1： 取替奈普酶供 试样品放入试 管中进行 溶解， 得到样品溶 液； 步骤2： 在样品溶液中加入1ml的0.2％二乙酰一肟溶液， 混和均匀后再加0.2％安替比 林的50％硫酸溶 液2ml， 混合均匀得到混合溶 液； 步骤3： 将试管置于沸水浴中水浴加热， 加热完毕后取出置于流动的水中冷却； 冷却至 室温后， 取适量待测溶液放入紫外 ‑可见分光光度计中进行检测， 记录吸光度， 根据外标法 计算替奈普酶供 试样品中尿素残留量。 2.根据权利要求1所述的一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量 的方法， 其特 征在于： 所述 步骤1的替奈普酶供 试样品中尿素残留量≤10 0ug/瓶。 3.根据权利要求1或2所述的一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留 量的方法， 其特 征在于： 所述 步骤3中， 水浴加热时长为 45～55min。 4.根据权利要求1或2所述的一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留 量的方法， 其特 征在于： 所述 步骤3中， 冷却时长为2 ～10min。 5.根据权利要求1或2所述的一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留 量的方法， 其特 征在于： 所述 步骤3中， 检测波长为 460nm。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115308149 A 2一种利用紫外 ‑可见分光 光度法测定替奈 普酶中尿素残留量 的方法 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 尤其是涉及一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定 替奈普酶中尿素残留量的方法。 背景技术 [0002]替奈普酶(TNK ‑tPA)是迄今为止最安全有效且使用最方便的溶栓药， 目前国内已 上市的有第一代重组天然tPA类产品， 商品名 “爱通立”； 第二代为采用大肠杆菌表达的tPA 类产品， 即瑞替普酶； 而替奈普酶(TNK ‑tPA)是世贸天阶制药(江苏)有限责任公司生产的第 三代tPA类产品， 是目前可以单次静脉推注的溶栓药品种， 其具有一针救命， 使用方便的特 点， 更加适合急救， 使得溶栓治疗在院外进行成为可能， 具有划时代的意义。 而为了提高替 奈普酶(TNK ‑tPA)的质量标准， 需要建立制剂中辅料尿素残留量的检验方法和控制要求。 [0003]对于原辅料中尿素含量的检测， 2020版 《中国药典》 中收纳的方法为凯氏定氮法测 定尿素的含量， 但由于生物制品中尿素是作为辅料使用， 含量较低， 且生物制品中组分较为 复杂， 辅料之间存在一定影响， 因此 上述方法不 适用于该产品中尿素残留量测定 。 [0004]现有技术中公开了众多测定尿素含量的方法， 如脲酶 ‑改良波氏法， 尿素氮检测试 剂盒微量法， 但由于该方法均基于血清中尿素测定， 存在重复性和准确度差， 操作繁琐， 检 测设备要求高等缺点； 因此， 针对 上述问题， 为了提高替奈普酶(TNK ‑tPA)制剂的质量， 亟需 提供一种特别适用于检测替奈普酶(TNK ‑tPA)中尿素残留量的检测方法。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定替奈普 酶中尿素残留 量的方法。 [0006]为达到本发明之目的， 采用如下技 术方案： [0007]一种利用紫外 ‑可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法， 该方法的步 骤如下： [0008]步骤1： 取替奈普酶供 试样品放入试 管中进行 溶解， 得到样品溶 液； [0009]步骤2： 在样品溶液中加入1ml的0.2％二乙酰一肟溶液， 混和均匀后再加0.2％安 替比林的5 0％硫酸溶 液2ml， 混合均匀得到混合溶 液； [0010]步骤3： 将试管置于沸水浴中水浴加热， 加热完毕后取出置于流动的水中冷却； 冷 却至室温后， 取适量待测溶液放入紫外 ‑可见分光光度计中进行检测， 记录吸光度， 根据外 标法计算 替奈普酶供 试样品中尿素残留量。 [0011]优选的， 所述 步骤1的替奈普酶供 试样品中尿素残留量≤10 0ug/瓶。 [0012]优选的， 所述 步骤3中， 水浴加热时长为 45～55min。 [0013]优选的， 所述 步骤3中， 冷却时长为2 ～10min。 [0014]优选的， 所述 步骤3中， 检测波长为 460nm。说　明　书 1/4 页 3 CN 115308149 A 3