(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211123720.8 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 深圳唯公生物科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市坪 山区坑梓街 道金辉路14号深圳生物医药创新产业 园区1号楼6 02A (72)发明人 苟士正　邓橙　 (74)专利代理 机构 深圳市中科创为专利代理有 限公司 4 4384 专利代理师 彭涛　谢志龙 (51)Int.Cl. G01N 21/64(2006.01) G01N 21/01(2006.01) G01N 15/14(2006.01) (54)发明名称 一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方 法及试剂组合 (57)摘要 本发明涉及物质检测技术领域， 特别涉及一 种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试 剂组合， 往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体 的固相载体， 混匀， 孵育； 往血清样本加入荧光素 一标记的AFP检测抗体和荧光素二标记的小扁豆 凝集素LCA 的混合物， 混匀， 避光孵育； 血清样本 采用流式细胞仪检测。 与现有技术相比， 本发明 的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试 剂组合同时使用两种荧光素作为标记物， 其中一 种荧光素标记AFP抗体， 另一种荧光素标记小扁 豆凝集素LCA， 可同时检测AFP和AFP ‑L3， 且样本 无需前处理， 可节约时间， 提高检测 效率和准确 度。 权利要求书1页 说明书5页 附图5页 CN 115494037 A 2022.12.20 CN 115494037 A 1.一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 步骤S1， 往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体， 混匀， 孵 育； 步骤S2， 往步骤S1中的血清样本加入荧光素一标记的AFP检测抗体和荧光素二标记的 小扁豆凝集素LCA的混合物， 混匀， 避光孵 育； 步骤S3， 对步骤S2中的血清样本采用流式细胞仪检测； 步骤S4， 荧光素一和荧光素二的信号在不同的荧光通道被流式细胞仪读取， 荧光素一 报告的信号表征总AFP浓度， 荧 光素二的信号表征总AFP ‑L3浓度。 2.如权利要求1所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法， 其特征在于， 所述步骤 S2中， 荧光素对AFP检测抗体和小扁豆凝集素LCA的标记采用直接的共价标记， 或者采用生 物素‑亲和素体系进行间接标记。 3.如权利要求1所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法， 其特征在于， 所述步骤 S2中， 荧光素一标记的AFP检测抗体与微球捕获的各种AFP亚型均结合， 荧光素二标记的小 扁豆凝集素LCA与微球捕获的AFP ‑L3特异性结合。 4.如权利要求1所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法， 其特征在于， 所述固相 载体采用3 ‑10um粒径的捕获微球。 5.一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合， 用于权利要求1 ‑4中任一项所述 的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法中， 其特 征在于， 包括如下组分： 组分一： 一种包被抗体的微球； 组分二： 荧 光素一标记的AFP检测抗体； 组分三： 荧 光素二标记的小扁豆 凝集素LCA。 6.如权利要求5所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合， 其特征在于， 所述 组分二和组分三中， 荧光素对AFP检测抗体和小扁豆凝集素LCA的标记采用直接的共价标 记， 或者采用生物素 ‑亲和素体系进行间接标记。 7.如权利要求5所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合， 其特征在于， 荧光 素一标记的AFP检测抗体与微球捕获的各种AFP亚型均结合， 荧光素二标记的小扁豆凝集素 LCA与微球捕获的AFP ‑L3特异性结合。 8.如权利要求5所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合， 其特征在于， 所述 微球为3‑10um粒径的微球。 9.如权利要求5所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合， 其特征在于， 所述 荧光素一采用花氰染料Cy5， 所述 荧光素二采用异硫氰酸 荧光素。 10.如权利要求5所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合， 其特征在于， 所 述荧光素一采用藻红蛋白， 所述 荧光素二采用别藻蓝蛋白。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115494037 A 2一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方 法及试剂组合 【技术领域】 [0001]本发明涉及物质检测技术领域， 特别涉及 一种可同时检测甲胎蛋白及 其异质体的 方法及试剂组合。 【背景技术】 [0002]甲胎蛋白AFP是一种糖蛋白， 由约600个氨基酸残基构成， 分子量约70kD。 甲胎蛋白 是一种常用的肿瘤标志 物， 主要用于对肝癌的辅助诊断。 [0003]近年来的研究发现， 由于甲胎蛋白糖基化水平不同， 根据其与 小扁豆凝集素LCA的 亲和力， 可将总甲胎蛋白分为三部分： AFP ‑L1、 AFP‑L2、 AFP‑L3。 其中AFP ‑L1(LCA弱结合型) 来源于良性肝病细胞， AFP ‑L2(LCA中结合型)主要由卵黄囊产生并多见于孕妇血清， AFP ‑L3 (LCA强结合型)主 要来源于肝癌细胞。 AFP ‑L3临床上也被称为甲胎蛋白异质体。 [0004]根据国家卫生健康委原发性肝癌诊疗指南(2022年版)2.3节， 血清AFP ‑L3结合总 AFP检测有助于肝癌的早期诊断， 比单独使用AFP诊断效果更好。 [0005]AFP在临床上一般使用双抗体夹心法化学发光免疫分析进行检测， 已有多种 成熟 产品。 但检测AFP ‑L3的产品尚不常见， 检测方法也不 成熟， 一般需要先使用带有小扁豆凝集 素LCA的亲和层析柱吸附血清 中的AFP‑L3， 然后再使用传统AFP检测方法对其进行检测。 现 有技术方法缺陷是： 流程较长， 步骤较多， 检测耗时， 且样品预 处理会引入更多检测误差， 且 总AFP还需要另行检测。 【发明内容】 [0006]为了克服上述问题， 本发明提出一种可有效解决上述问题的可同时检测甲胎蛋白 及其异质体的方法及试剂组合。 [0007]本发明解决上述技术问题提供的一种技术方案是： 提供一种可同时检测甲胎蛋白 及其异质体的方法及试剂组合， 包括如下步骤： [0008]步骤S1， 往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体， 混匀， 孵 育； [0009]步骤S2， 往步骤S1中的血清样本加入荧光素一标记的AFP检测抗体和荧光素二标 记的小扁豆 凝集素LCA的混合物， 混匀， 避光孵 育； [0010]步骤S3， 对步骤S2中的血清样本采用流式细胞仪检测； [0011]步骤S4， 荧光素一和荧光素二的信号在不同的荧光通道被流式细胞仪读取， 荧光 素一报告的信号表征总AFP浓度， 荧 光素二的信号表征总AFP ‑L3浓度。 [0012]优选地， 所述步骤S2中， 荧光素对AFP检测抗体和小扁豆凝集素LCA的标记采用直 接的共价标记， 或者采用生物素 ‑亲和素体系进行间接标记。 [0013]优选地， 所述步骤S2中， 荧光素一标记的AFP检测抗体与微球捕获的各种AFP亚型 均结合， 荧 光素二标记的小扁豆 凝集素LCA与微球捕获的AFP ‑L3特异性结合。 [0014]优选地， 所述固相载体采用3 ‑10um粒径的捕获微球。 [0015]一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合， 用于可同时检测甲胎蛋白及其说　明　书 1/5 页 3 CN 115494037 A 3