(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211147433.0 (22)申请日 2022.09.19 (71)申请人 电子科技大 学 地址 611731 四川省成 都市高新区 （西区） 西源大道 2006号 (72)发明人 刘艺玲　龚元　王艳琼　张雅馨　 (74)专利代理 机构 电子科技大 学专利中心 51203 专利代理师 甘茂 (51)Int.Cl. G01N 33/543(2006.01) G01N 33/532(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 21/01(2006.01) G01N 21/39(2006.01) (54)发明名称 一种基于激光免疫比浊法的双标志物检测 方法 (57)摘要 本发明属于生物传感技术领域， 具体提供一 种基于激光免疫比浊法的双标志物检测方法， 用 以实现快速、 高灵敏的双标志物检测； 从基本工 作原理上讲： 混合样本溶液中依次加入第一抗 原、 第二抗原对应抗体后， 激光强度两次降低， 最 终通过光微流激光强度积分值表征； 本发明创造 性的构建了针对两种抗原的先验 联合传感图谱， 将测量得到的光微流激光强度积分值带入先验 联合传感图谱， 直接得到第一抗原与第二抗原的 浓度， 检测灵敏度高； 并且， 整个检测过程在25分 钟内， 检测速度极快； 同时， 具有操作简单、 流程 清楚、 更少试剂用量与样本量等优势； 另外， 本发 明具有普遍适用性， 能够应用到不同蛋白质检测 中， 还具有强特异性。 权利要求书2页 说明书6页 附图3页 CN 115453110 A 2022.12.09 CN 115453110 A 1.一种基于激光免疫比浊法的双标志物检测方法， 基于FP腔的光微流激光系统实现， 其特征在于， 所述双标志 物检测方法具体包括以下步骤： 步骤1： 配制待检测溶 液； 首先， 于待检测样品中加入第一抗原对应的第一抗体， 并于37℃下孵育5～10分钟， 然 后， 再加入第二抗原对应的第二抗体， 并于37℃下孵育5～10 分钟； 最后， 加入罗丹明6G作为 激光染料， 形成待检测溶 液； 步骤2： 采用移液器将待检测溶液拍打均匀， 并注射到微流通道中， 测量得到光微流激 光强度积分值； 步骤3： 将光微流激光强度积分值带入先验已知联合传感图谱， 分别得到第 一抗原与第 二抗原的浓度。 2.按权利要求1所述基于激光免疫比浊法的双标志物检测方法， 其特征在于， 所述联合 传感图谱为： 其中， y1与y2为先验选定 常数； P1、 P2、 P3、 Q1、 Q2、 Q3为先验拟合参数， 均为常数； F为光微流 激光强度积分值， C1为第一抗原浓度， C2为第二抗原浓度。 3.按权利要求2所述基于激光免疫比浊法的双标志物检测方法， 其特征在于， 所述联合 传感图谱的先验计算过程 为： 设置第一抗原浓度的合集为(C1,1,C1,2,...,C1,N)、 第二抗原浓度的合集为(C2,1, C2,2,...,C1,M)； 固定第一抗原浓度为C1,n、 n＝1,2,...,N， 依次设置第二抗原浓度为(C2,1, C2,2,...,C1,M)， 分别测量得到每个浓度组合(C1,n,C2,m)、 m＝1,2,...,M 下的光微流激光强度 积分值； 调节第一抗原浓度， 重复此过程， 最终测量得到每个浓度组合(C1,n,C2,m)、 n＝1, 2,...,N、 m＝1,2,. ..,M下的光 微流激光强度积分值； 在每一个第 一抗原浓度 下， 根据测量数据得到光微流激光强度积分值关于第 二抗原浓 度的拟合 函数关系式： Fn(y)＝Kny+Bn、 y＝lgC2,m 其中， Kn、 Bn均表示拟合 参数； 任意选取两个y值： y＝y1、 y＝y2， 在y＝y1、 y＝y2下， 根据拟合光微流激光强度积分值Fn (y1)、 Fn(y2)， 分别得到Fn(y1)、 Fn(y2)关于第一 抗原浓度的拟合 函数关系式： Fn(y1)＝P1x+Q1、 Fn(y2)＝P2x+Q2、 x＝lgC1,n 则得到先验拟合 参数P1、 P2、 Q1、 Q2； 再根据拟合 参数Bn得到Bn关于第一 抗原浓度的拟合 函数关系式： Bn＝P3x+Q3 则得到先验拟合 参数P3、 Q3； 最终， 得到光微流激光强度积分值关于第一抗原浓度与第二抗原浓度的联合传感图 谱： 权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115453110 A 24.按权利要求1所述基于激光免疫比浊法的双标志物检测方法， 其特征在于， 待检测溶 液中， 第一 抗体与第二 抗体保持过量， 罗丹明浓度为0.16mM 。 5.按权利要求1所述基于激光免疫比浊法的双标志物检测方法， 其特征在于， 所述基于 FP腔的光微流激光系统包括： 光路模块、 FP腔模块和数据采集模块； 其中， 光路模块包括： 泵 浦激光源1、 第一反射镜2、 第二反射镜3、 衰减片4、 分束镜5、 凸透镜6及第三反射镜7， 所述泵 浦激光源提供泵浦激光， 泵浦激光沿光路依 次经过第一反射镜、 第二反射镜、 衰减片、 分束 镜、 凸透镜、 第三反射镜后以入射角度～10 °入射到FP腔模块上； 所述FP腔模块由两片高反 镜9夹心两根方形管11构成， 任意一根方形管作为微流通道、 且两端连接软管10， 另一根方 形管作为支撑管， 微流通道用于通入待测样本； 所述数据采集模块包括： 探头12、 光谱仪13 及能量计14， 所述能量计通过分束镜实时监控泵浦激光的能量， 所述探头位于FP腔模块正 上方以收集 光谱， 且探 头通过光纤连接光谱仪 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115453110 A 3