(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210893213.6 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 宜宾市食品药品检验检测中心 地址 644000 四川省宜宾市叙州区永安路 19号 (72)发明人 赵书林　聂立　彭章明　陈代宏　 刘渊　兰瑞容　杨旭　刘学艳　 徐健　刘军　刘燕　 (74)专利代理 机构 成都华风专利事务所(普通 合伙) 51223 专利代理师 杜朗宇 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 HPLC法测定通痹活络丸中士的宁含量的方 法 (57)摘要 本发明公开了HPLC法测定通痹活络丸中士 的宁含量的方法， 包括制备供试品溶液， 包括如 下步骤： (1)将待检的通痹活络丸， 用碱性溶液润 湿后， 乙醚提取， 提取液挥干， 得到挥干物质； (2) 加入酸性水溶液使挥干物质溶解后， 用乙醚提 取， 取水溶液， 调节pH值至9～12， 再用乙醚重复 提取， 合并乙醚提取液， 挥干， 再制备供试品溶 液。 本发明方法操作 简便可靠， 检测结果准确， 能 够较为准确的测出士的宁的含量。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115184508 A 2022.10.14 CN 115184508 A 1.测定通痹活络丸中士的宁含量用的供 试品的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)将待检的通痹活络丸， 用碱性溶 液润湿后， 乙醚 提取， 提取 液挥干， 得到挥干物质； (2)加入酸性水溶液使挥干物质溶解后， 用乙醚提取， 取水溶液， 调节pH值至9～12， 再 用乙醚重复提取， 合并乙醚 提取液， 挥干， 再制备 供试品溶液。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述碱性溶液为氢氧化钠、 碳酸钠、 碳 酸氢钠的水 溶液或氨水； 所述振摇的时间为1～4h， 进一 步为2h。 3.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 加入 乙醚振摇， 滤过后还包括： 用 乙醚洗涤滤 过后的容器， 合并滤 液挥干。 4.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述酸性溶液选自盐酸、 甲酸、 磷酸、 硫酸或醋酸之一； 进一步地， 所述酸性溶液为1～5％的盐酸， 更进一 步为2％的盐酸。 5.根据权利 要求1所述的制备方法， 其特征在于， 调 节pH值至10～ 11所用的试剂为氢氧 化钠、 碳酸钠、 碳酸氢钠的水 溶液或氨水； 进一 步为氨水。 6.根据权利 要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述pH值为10； 进一步地， 所述重 复提 取的次数为1～10次， 进一 步为重复提取4次； 进一 步地， 用甲醇溶解后滤 过。 7.HPLC法检测通痹活络丸中士的宁含量的方法， 其特 征在于， 包括如下内容： (1)制备对照品溶 液； (2)采用权利要求1～6任一项所述的制备 方法制备 供试品溶液； (3)制备制马钱子阴性空白样品溶 液； (4)制作标准曲线； (5)测定供 试品溶液。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述(1)制备对照品溶液是指： 称取马钱子 生物总碱对照提取物， 用甲醇溶解， 并定容； 所述(3)制备马钱子阴性空白样品溶液是指： 采用供试品溶液的制备方法制备阴性空 白样品溶 液。 9.根据权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 所述 步骤(4)和步骤(5)中的色谱条件为： 色谱柱： C18色谱柱； 流动相： 甲醇： 水： 醋酸： 三乙胺＝(6 3～67):(190～ 210):(2.2 ～2.6):(0.1～0.5)； 流速： 0.8～1.5mL ·min‑1； 柱温： 30～40℃； 检测波长： 25 0～258nm； 进样量:1～8 μL。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特 征在于， 所述 步骤(4)和步骤(5)中的色谱条件为： 色谱柱： Thermo  Syncronis C18(250×4.6mm,5 μm)色谱柱； 流动相： 甲醇： 水： 醋酸： 三乙胺＝6 5:200:2.4:0.3； 流速： 1.0mL ·min‑1； 柱温： 35℃； 检测波长： 254 nm； 进样量:5 μL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115184508 A 2HPLC法测定通痹活络丸中士的 宁含量的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及高效液相色谱法技术领域， 具体是涉及HP LC法测定通痹活络丸中士的 宁含量的方法。 背景技术 [0002]“通痹活络丸 ”系四川省宜宾县骨科医院根据传统验方研制的中药丸剂， 由桑椹 50g、 杜仲50 g、 黄芪50 g、 何首乌50 g、 熟地黄50 g、 远志50g、 狗脊50 g、 牛膝25 g、 五加皮50 g、 乌 稍蛇25g、 木瓜25 g、 大枣25 g、 白芍25 g、 续断25 g、 肉苁蓉25 g、 知母25 g、 当归25 g、 姜黄20 g、 威 灵仙25g、 延胡索25g、 丹参15g、 三七15g、 枸杞15g、 菟丝子20、 制马钱子15g、 黄柏15g、 地龙 15g、 龟甲15g、 鹿角15g、 制川乌10g、 细辛10g、 全蝎 10g、 水蛭10g、 土鳖虫10g共34味中药经粉 碎过筛、 混匀、 泛丸等工艺制作而成， 为红棕色水蜜丸， 味微甜而苦， 具有益气、 活血、 补肾壮 骨、 祛风除湿功效， 用于风寒痹痛、 关节疼痛、 肢体麻木等病症的治疗。 [0003]自2008年以来， 该制剂在临床应用中具有显著的疗效， 治愈了一大批腰腿疼痛及 跌打损伤患者， 获得了医生与患者的高度认可， 具有较强的临床应用价 值， 市场需求广阔。 [0004]该制剂处方中含有的制马钱子， 为毒性药材及饮片， 马钱子类生物碱其中士的宁 的毒性最强， 且安全窗口窄， 士的宁的成人中毒剂量为5～10mg。 目前， 《中国药典》 (2020年 版)对于马钱子中士 的宁含量是照高效液相色谱法(通则0512)测定， 由于 “通痹活络丸 ”的 处方药复杂， 且制马钱子在 “通痹活络丸 ”中的占比较少， 检测难度、 干扰大， 药典中的检测 方法不能达 到准确检测的目的， 不利于实际生产中对通痹活络丸的质量评价和控制。 发明内容 [0005]发明人曾用 《中国药典》 (2020年版)中马钱子士的宁含量 的测定方法以及风湿马 钱片士的宁含量的测定方法制备供试品溶液(用氢氧化钠溶解， 三氯甲烷回流提取 的方式 制备)， HPLC色谱结果显示， 采用药典中记载的方法提取供试品溶液中的杂质干扰较大， 无 法分离出样品。 [0006]发明人也试过采用甲醇溶解—超声提取， 或用氯仿溶解—浓氨、 硫酸提取—调节 pH值后用氯仿提取(区 门秀,高玉仪.高效液相色谱法测定马钱子散中士的宁含量[J].中国 实用医药,2008,3(16):130 ‑131.)， 或用氯仿 ‑氨水提取等方法制备供试品溶液， 但高效液 相色谱法的结果都不好， 存在杂质干扰大， 无法分离士的宁、 使用的试剂毒性大的缺陷， 因 此， 采用现有技 术中记载的制备 方法得到的供 试品溶液并不适用于HPLC法测定 。 [0007]基于现有技术无法较好的检测 “通痹活络丸 ”中士的宁含量的这一问题， 本 发明拟 建立一种适合测定通痹活络丸中士的宁含量的HPLC方法， 以加强对通痹活络丸的质量控 制， 从而保障用药的安全性。 [0008]基于此， 本发明首先提供了一种测定通痹活络丸中士的宁含量用的供试品的制备 方法， 包括如下步骤： (1)将待检的通痹活络丸， 用碱性溶液润湿后， 乙醚提取， 提取液挥干， 得到挥干物质；说　明　书 1/6 页 3 CN 115184508 A 3