(19)国家知识产权局
(12)发明 专利申请
(10)申请公布号
(43)申请公布日
(21)申请 号 202210868547.8
(22)申请日 2022.07.22
(71)申请人 四川大学华西医院
地址 610041 四川省成 都市武侯区国学巷
37号
(72)发明人 王振磊 郑莉 金瑛 邸相杰
崔冬瀚 齐小慧 付丽莎
(74)专利代理 机构 北京众合诚成知识产权代理
有限公司 1 1246
专利代理师 刘妮
(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
G01N 30/06(2006.01)
G01N 30/30(2006.01)
G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01)
G01N 30/72(2006.01)
(54)发明名称
UPLC-MS/MS法同时测定人尿液中缬沙坦、 沙
库巴曲及其代谢物浓度的方法
(57)摘要
本发明公开了一种UPLC ‑MS/MS法同时测定
人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲及其代谢物
LBQ657浓度的方法, 应用超高效液相色谱 ‑质谱
联用(UPLC ‑MS/MS)同时测定人尿液生物样品中
缬沙坦、 沙库巴曲及其代谢物LBQ657的浓度, 前
处理采用乙腈作为沉淀剂, 并进一步稀释进样;
进样量比较少大大降低对仪器的污染; 该方法应
用了梯度洗脱的方式, 并解决了化合物的残留;
与现有文献相比, 尿液样本量为50μL, 对于终末
期肾衰患者, 收集临床样本容易, 实验方法更加
友好。
权利要求书2页 说明书12页 附图6页
CN 115144505 A
2022.10.04
CN 115144505 A
1.一种UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲及其代谢物LBQ657
浓度的方法, 其特 征在于, 该 方法针对的是慢性肾病终末期患者尿液样品;
该方法包含:
采用乙腈蛋白沉淀法对样品进行前处理, 样品前处理后采用等体积的稀释剂进行稀
释, 其中所述稀释剂为5 0%乙腈‑0.1%甲酸水;
采用超高效液相色谱串联质谱 对稀释后的样品进行检测:
温度: 40℃, 流动相: A相0.1%甲酸水溶液, B相是体积比为50:50:0.2的甲醇 ‑乙腈‑甲
酸, 洗脱方式: 梯度洗脱;
其中, 梯度洗脱条件设置为:
0min时, 流动相流速为0.3mL/mi n, 流动相中的B相含量6 5%;
1.50min时, 流动相流速为0.3mL/mi n, 流动相中的B相含量80%;
2.00min时, 流动相流速为0.3mL/mi n, 流动相中的B相含量98%;
2.60min时, 流动相流速为0.3mL/mi n, 冲洗自动进样器高压阀;
2.61~3.0 0min时, 流动相流速为0.6mL/mi n, 流动相中的B相含量98%;
3.01min时, 流动相流速为0.6mL/mi n, 流动相中的B相含量6 5%;
3.51min时, 流动相流速为0.3mL/mi n, 流动相中的B相含量6 5%;
4.00min时, 流动相流速为0.3mL/mi n, 停止进样。
2.根据权利要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ657浓度的方法, 其特征在于, 所述的超高效液相色谱串联质谱中, 高效液相
色谱仪是岛津LC ‑30AD超高效液相色谱, 质谱仪是日本岛津公司80 60型串联质谱仪 。
3.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ657浓度的方法, 其特征在于, 所述的高效液相色谱仪, 色谱柱: ACQUITY
UPLC BEH C18, 规格为2.1m m×50mm, 1.7 μm。
4.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ657浓度的方法, 其特征在于, 所述的高效液相色谱仪, 配有自动进样器, 该
自动进样器为SI L‑30AC HT自动进样器。
5.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物 LBQ657浓度的方法, 其特征在于, 所述的质谱仪, 配有Turbo Ionspray离子源以
及LabSolutions 6.70数据处 理系统。
6.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ6 57浓度的方法, 其特 征在于, 辅助数据处 理软件为Microsoft Office。
7.根据权利要求4所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ6 57浓度的方法, 其特 征在于, 所述的自动进样器温度设为15℃。
8.根据权利要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ657浓度的方法, 其特征在于, 所述的超高效液相色谱串联质谱, 在洗针时,
解决残留的洗针 程序为: 洗针液R0及外置泵R3连通的溶液均为体积比为25: 25:25:25:1的甲
醇‑乙腈‑异丙醇‑水‑甲酸, 洗针程序为洗针液R0清洗进样针的外壁, 进样 前后各润洗3s, 洗
针速度35μL/s, 洗针体积500μL, 外置泵R3的程序为清洗泵 ‑>清洗进样口, 用于进一步在进
样前后清洗进样针的外壁。权 利 要 求 书 1/2 页
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29.根据权利要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ657浓度的方法, 其特征在于, 所述的超高效液相色谱串联质谱的分析中所
用内标为待分析物的氘代衍 生物, 选用缬沙坦 ‑d9、 沙库巴曲 ‑d4和LBQ657‑d4。
10.根据权利 要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲
及其代谢物LBQ657浓度的方法, 其特征在于, 所述的超高效液相色谱串联质谱的进样量为4
μL。权 利 要 求 书 2/2 页
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CN 115144505 A
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专利 UPLC-MS MS法同时测定人尿液中缬沙坦、沙库巴曲及其代谢物浓度的方法
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