(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210863030.X (22)申请日 2022.07.21 (71)申请人 成都普康生物科技有限公司 地址 610000 四川省成 都市新津 县工业园 区A区青年 （大 学生） 创业园 (72)发明人 舒娟　唐灿　徐春梅　牟心　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 颜欢 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/34(2006.01) B01D 15/42(2006.01) B01D 15/38(2006.01) (54)发明名称 一种Fmoc -NH-PEGn-丙酸同系物的分离方法 (57)摘要 本发明公开了一种Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸同系 物的分离方法， 属于医药原料检测技术领域。 该 方法包括： 按以下条件对含Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸 同系物的待测样品进行分离： 色谱柱： Agilent   ZORBAX SB‑C18； 流动相： 流动相A和B分别为高氯 酸‑水溶液和甲醇 ‑水溶液； 洗脱时间及流动相A 的体积含 量为： 0～3min， 38～42％； 3～12min， 38 ～42％至25～30％； 12～30min， 25～30％； 30～ 40min， 25～30％至0％； 40～50min， 0％。 该方法 能使待测样品中的Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸同系物得 到有效分离， 检测灵敏度好， 有利于更好地控制 同系物含量和纯度。 权利要求书1页 说明书6页 附图4页 CN 115236231 A 2022.10.25 CN 115236231 A 1.一种Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸同系物的分离方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 按以下高效液相色谱条件 对含Fmoc‑NH‑PEGn‑丙酸同系物的待测样品进行分离： 色谱柱： Agi lent ZORBAX SB‑C18； 流动相： 流动相A为 高氯酸‑水溶液， 流动相B为甲醇 ‑水溶液； 其中， 高氯酸 ‑水溶液中高 氯酸的体积百分数为0.0 5～0.15％， 甲醇 ‑水溶液中甲醇的体积百分数为8 8～92％； 洗脱程序为： 洗脱时间及所述洗脱时间内流动相A的体积含量如下： 0～3min， 38～ 42％； 3～ 12min， 38～42％至25～30％； 12～30min， 25～30 ％； 30～40min， 25～30 ％至0％； 40～50min， 0％。 2.根据权利要求1所述的分离方法， 其特征在于， 洗脱程序还包括： 洗脱时间及所述洗 脱时间内流动相A的体积含量如下： 5 0～60min， 0％至38～42％。 3.根据权利要求1或2所述的分离方法， 其特征在于， 分离过程中， 洗脱流速为0.8～ 1.2mL/mi n。 4.根据权利要求1或2所述的分离方法， 其特 征在于， 分离过程中， 柱温为25～40℃。 5.根据权利要求1或2所述的分离方法， 其特征在于， 分离过程中， 检测波长为210～ 230nm。 6.根据权利要求1或2所述的分离方法， 其特 征在于， 分离过程中， 进样量 为5～20 μL。 7.根据权利要求6所述的分离方法， 其特征在于， 分离过程中， 待测样品的进样浓度为 0.5～4mg/mL。 8.根据权利要求7所述分离方法， 其特征在于， 待测样品经稀释剂稀释后至预设浓度后 再进样。 9.根据权利要求8所述分离方法， 其特 征在于， 所述稀释剂包括乙腈或甲醇。 10.根据权利要求1或2所述的分离方法， 其特征在于， 待测样品中同时含有Fmoc ‑NH‑ PEG1‑丙酸、 Fmoc‑NH‑PEG2‑丙酸、 Fmoc‑NH‑PEG3‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG4‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG5‑ 丙酸、 Fmoc‑NH‑PEG6‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG7‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG8‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG9‑丙酸、 Fmoc‑NH‑PEG10‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG11‑丙酸以及Fmoc ‑NH‑PEG12‑丙酸中的至少2种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115236231 A 2一种Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸同系物的分离方 法 技术领域 [0001]本发明涉及医药原 料检测技术领域， 具体而 言， 涉及一种Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸同系 物的分离方法。 背景技术 [0002]就Fmoc‑NH‑PEGn‑丙酸同系物(n＝1,2, …,12)而言， 该品种常含有同系物杂质， 干 扰产品纯度和收率， 同时对下游产品中的杂质谱产生影响。 [0003]目前有关上述物质的检测方法主要是依据 《中国药典》 2020版四部通则， 没有对其 同系物进行分离检测。 [0004]但该品种同系物 之间极性十分相近， 在色谱柱中吸附能力相当， 分离难度较大。 目 前还没有能够使该品种同系物间有效分离， 且灵敏度较高的分离方法。 [0005]鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸同系物的分离方法， 以解决上述 技术问题。 [0007]本申请可这样实现： [0008]本申请提供一种Fmoc ‑NH‑PEGn‑丙酸同系物的分离方法， 包括以下步骤： [0009]按以下高效液相色谱条件 对含Fmoc‑NH‑PEGn‑丙酸同系物的待测样品进行分离： [0010]色谱柱： Agi lent ZORBAX SB‑C18； [0011]流动相： 流动相A为高氯酸 ‑水溶液， 流动相B为甲醇 ‑水溶液； 其中， 高氯酸 ‑水溶液 中高氯酸的体积百分数为0.0 5～0.15％， 甲醇 ‑水溶液中甲醇的体积百分数为8 8～92％； [0012]洗脱程序为： 洗脱时间及洗脱时间内流动相A的体积含量如下： 0～3min， 38～ 42％； 3～ 12min， 38～42％至25～30％； 12～30min， 25～30 ％； 30～40min， 25～30 ％至0％； 40～50min， 0％。 [0013]在可选的实施方式中， 洗脱程序还包括： 洗脱时间及洗脱时间内流动相A的体积含 量如下： 5 0～60min， 0％至38～42％。 [0014]在可选的实施方式 中， 分离过程中， 洗脱流速为0.8～1.2mL/mi n。 [0015]在可选的实施方式 中， 分离过程中， 柱温为25～40℃。 [0016]在可选的实施方式 中， 分离过程中， 检测波长为210～ 230nm。 [0017]在可选的实施方式 中， 分离过程中， 进样量 为5～20 μL。 [0018]在可选的实施方式 中， 分离过程中， 待测样品的进样浓度为0.5～4mg/mL。 [0019]在可选的实施方式 中， 待测样品经稀释剂稀释后至预设浓度后再进样。 [0020]在可选的实施方式 中， 稀释剂包括乙腈或甲醇。 [0021]在可选的实施方式中， 待测样 品中同时含有Fmoc ‑NH‑PEG1‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG2‑ 丙酸、 Fmoc‑NH‑PEG3‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG4‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG5‑丙酸、 Fmoc ‑NH‑PEG6‑丙酸、说　明　书 1/6 页 3 CN 115236231 A 3