(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210998716.X (22)申请日 2022.08.19 (71)申请人 成都华任康生物科技有限公司 地址 610200 四川省成 都市成都天府国际 生物城 （双流区慧谷东 一路8号2栋） (72)发明人 陈静　方习静　张欢　 (74)专利代理 机构 北京汇铮 律师事务所 1 1973 专利代理师 唐宁 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种MA10 5佐剂中脂质含量的测定方法 (57)摘要 本发明涉及一种MA105佐剂中脂质成分含量 的测定方法， 脂质成分包括1,2 ‑二油酰基 ‑3‑三 甲基氯化铵丙烷(DOTAP)， 二油酰基磷脂酰胆碱 (DOPC)和胆固醇。 所述的测定方法包括如下步 骤： (1)样品预处理， 包 括： 样品用乙醇溶液处理， 溶解脂质体组分； 离心取上清， 去杂质； (2)色谱 检测， 包括： 洗脱液为甲醇 ‑水‑TFA(93:7:0.15), 洗脱液流速为0.15ml/min； 使用外标法计算出 DOTAP、 DOPC及胆固醇含量。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115389658 A 2022.11.25 CN 115389658 A 1.一种MA105佐剂中脂质含量的测定方法， 所述MA105佐剂为CN2021116270833所述方 法制备得到的免疫佐剂； 所述的脂质成分为1,2 ‑二油酰基 ‑3‑三甲基氯化铵丙烷(DOTAP)， 二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)和胆固醇； 所述的方法包括如下步骤： (1)供试品预处理， 所述预处理步骤包括： 用无水乙醇溶解所述佐剂样品中的脂质体组 分， 将溶解后的脂质体组分置 于离心机内， 离心去除杂质， 取 上清液； (2)使用高效液相色谱法检测各个脂质成分的含量。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述的高效液相色谱法的参数为： 色谱柱： 十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂， 尺寸 4.6×250mm， 粒径5 μm； 流动相： 甲醇 ‑水‑TFA的比例为93:7:0.15； 流动相流速： 1.5ml/mi n； 检测波长： 20 5nm； 柱温： 5 0℃； 进样量： 20 μl； 采样时间： 3 5min； 使用外标法以峰面积计算供 试品溶液中DOTAP、 DOPC及胆固醇的含量。 3.根据权利要求1或2所述的方法， 其特征在于， 所述的高效液相色谱法的条件下， DOTAP、 胆固醇及DOPC的出峰时间依次约为9 ～11min、 19～21min、 28～30min。 4.根据权利要求1或2所述的方法， 其特 征在于， 步骤(1)所述的样品预处理步骤中， 样品取样量为1.5ml， 无水乙醇用量为3.5ml； 离心 参数为： 10 000g离心10mi n。 5.根据权利要求1或2所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)所述的高效液相 色谱法中， 使 用外标法计算出DOTAP、 DOPC及胆固醇含量的方法为： 分别以对照品溶液中DOTAP、 DOPC及胆 固醇各自的峰面积， 按外标法以峰面积计算供 试品溶液中DOTAP、 胆固醇和DOPC的含量。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115389658 A 2一种MA105佐剂中脂质含量的测定方 法 技术领域 [0001]本发明属于医药生物技术领域， 具体的， 涉及一种MA105佐剂中脂质含量的测定方 法。 背景技术 [0002]本公司重组带状疱疹疫苗(CHO细胞)采用自制MA105佐剂系统， 脂质成分包括1,2 ‑ 二油酰基 ‑3‑三甲基氯化铵丙烷(DOTAP)， 二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)和胆固醇， 脂质各组 分含量为佐剂系统的核心质控指标。 以此佐剂系统制备的重组亚单位疫苗中包含的组分较 多， 需要与其配套的标准含量测定方法， 以监控佐剂质量， 基于此， 提出本发明。 [0003]本发明同时开发了一种同时测定重组带状疱 疹疫苗(CHO细胞)中三种脂质体成分 含量的高效液相色谱检测方法。 发明内容 [0004]本发明涉及一种MA105佐剂中脂质含量的测定方法， 所述MA105佐剂为 CN2021116270833所述方法制备得到的免疫佐剂； 所述的脂质成分为1,2 ‑二油酰基 ‑3‑三甲 基氯化铵 丙烷(DOTAP)， 二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)和胆固醇； 所述的方法包括如下步骤： [0005](1)供试品预处理， 所述预处理步骤包括： 用无水乙醇溶解所述佐剂样品中的脂质 体组分， 将溶解后的脂质体组分置 于离心机内， 离心去除杂质， 取 上清液； [0006](2)使用高效液相色谱法检测各个脂质成分的含量； 所述的高效液相色谱法的参 数为： [0007]色谱柱： 十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂， 尺寸 4.6×250mm， 粒径5 μm； [0008]流动相： 甲醇 ‑水‑TFA(93:7:0.15)； [0009]流动相流速： 1.5ml/min； 检测波长： 205nm； 柱温： 50℃； 进样量： 20μl； 采样时间： 35min； [0010]本色谱条件下， DOTAP、 胆固醇及DOPC的出峰时间依次约为9～11min、 19～21min、 28～30min； [0011]使用外标法以峰面积计算供 试品溶液中DOTAP、 DOPC及胆固醇的含量。 [0012]进一步的， [0013]步骤(1)所述的样品预处理步骤中， 样品取样量为1.5ml， 无水乙醇用量为3.5ml； 离心参数为： 10 000g离心10mi n； [0014]步骤(2)所述的高效液相色谱法中， 使用外标法计算出DOTAP、 DOPC及胆固醇含量 的方法为： [0015]分别以对照品溶 液中DOTAP、 DOPC及胆固醇各自的峰面积， [0016]按外标法以峰面积计算供 试品溶液中DOTAP、 胆固醇和DOPC的含量。 [0017]本发明的有益效果是： [0018](1)采用高效液相色谱法测定重组带状疱 疹疫苗中MA105佐剂的脂质成分， 具体包说　明　书 1/4 页 3 CN 115389658 A 3