(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221095710 6.5 (22)申请日 2022.08.10 (71)申请人 广州市丰华 生物工程有限公司 地址 510000 广东省广州市经济技 术开发 区银谊街6号 (72)发明人 陈建起　李海明　鲍冬芹　 (74)专利代理 机构 广州三环 专利商标代理有限 公司 44202 专利代理师 周全英 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/12(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种先天性肾上腺皮质增生症筛查试剂盒 及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种先天性肾上腺皮质增生 症筛查试剂盒及其应用， 涉及血液检测技术领 域。 本发明的一种先天性肾上腺皮质增生症筛查 试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括校准品、 质 控品、 同位素内标准品、 提取液、 萃取液和流动 相。 本发明提供的先天性肾上腺皮质增生症筛查 试剂盒采用液相色谱串联质谱技术， 检测通量 高， 能够同时检测17α ‑OHP、 睾酮、 雄烯二酮、 11 ‑ 脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质醇和皮质醇标志物， 且 检测灵敏度高、 特异性强、 准确性高； 本发明的试 剂盒所检测的样品为干血片， 干血片样品收集方 便， 成本低， 降低采血需求； 本发明的试剂盒检测 过程较简单， 45mi n内可完成多种标志 物的检测。 权利要求书2页 说明书12页 附图8页 CN 115436506 A 2022.12.06 CN 115436506 A 1.一种先天性肾上腺皮质增生症筛查试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括校准品、 质 控品、 同位素内标准品、 提取液、 萃取液和流动相； 所述校准品由17α ‑OHP、 睾酮、 雄烯二酮、 11‑脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质醇、 皮质醇和全血混合制备而成； 所述质控品由17α ‑OHP、 睾 酮、 雄烯二酮、 11‑脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质醇、 皮质醇和全 血混合制备而成； 所述同位素内 标准品含有17α ‑OHP、 睾酮、 雄烯二酮、 11 ‑脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质醇和皮质醇； 所述提取 液为甲醇、 乙腈、 异丙醇、 水中的至少两种； 所述萃 取液为乙酸乙酯、 叔丁基甲醚中的至少一 种； 所述流动相由流动相A和流动相B组成； 所述流动相A 为氢氧化铵的水溶液； 所述流动相B 为甲醇。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述校准品包括7个浓度呈梯度的校准 品； 所述校准品中17α ‑OHP的浓度为100～2 0000pg/mL， 睾酮的浓度为80～16000pg/mL， 雄烯 二酮的浓度为50～10000pg/mL， 11 ‑脱氧皮质醇的浓度为80～16000pg/mL， 21 ‑脱氧皮质醇 的浓度为80～16 000pg/mL， 皮质醇的浓度为10 0～20000pg/mL。 3.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述质控品包括质控品C1和质控品C2； 所述质控品C1包 括500pg/mL17α ‑OHP， 400pg/mL睾酮， 250pg/mL雄烯二酮， 400pg/mL11 ‑脱氧 皮质醇， 400pg/mL21 ‑脱氧皮质醇和500pg/mL皮质醇； 所述质控品C2包括10000pg/mL17α ‑ OHP， 8000pg/mL睾酮， 5000pg/mL雄烯二酮， 8000pg/mL11 ‑脱氧皮质醇， 8000pg/mL21 ‑脱氧皮 质醇和10 000pg/mL皮质醇。 4.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述提取液由甲醇、 乙腈、 异丙醇和水组 成。 5.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述萃取液由乙酸乙酯和叔丁基甲醚组 成。 6.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述流动相A 的氢氧化铵的水溶液的浓 度为0.02 ～0.1％。 7.根据权利要求1～6任一项所述的试剂盒的使用方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)按比例向同位素内标准品中加入提取 液， 制备得到日常提取工作液； (2)向校准品、 质控品和待测样品分别加入日常提取工作液， 进行孵 育； (3)孵育后加入萃取 液， 孵育后取上清液， 上清液用氮气吹干； (4)将吹干后的残渣用复溶剂复溶， 取 上清液进行 液相色谱串联质谱技 术进行检测； (5)以校准品17α ‑OHP、 睾酮、 雄烯二酮、 11 ‑脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质醇或皮质醇的浓 度为横坐标， 以校准品的峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标， 绘制标准 曲线并计算 曲线 的回归方程， 计算出滤纸干血片中17α ‑OHP、 睾酮、 雄烯二酮、 11 ‑脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质 醇和皮质醇的浓度值。 8.根据权利要求7所述的试剂盒的使用方法， 其特征在于， 所述步骤(4)中的色谱条件 为： 色谱柱为Thermo  AccucoreTM  RP‑MS； 柱温为40℃； 流动相流速为0.5mL/min； 梯度洗脱 条件： 0～1min： 85％流动相A ‑15％流动相B， 1～1.5min： 85％ →60％流动相A ‑15％→40％流 动相B， 1.5～3.5min： 60％ →20％流动相A ‑40％→80％流动相B， 3.5～4min： 20％ →10％流 动相A‑80％→90％流动相B， 4～4.5min： 10％ →85％流动相A ‑90％→15％流动相B， 4.5～ 5min： 85％流动相A ‑15％流动相B； 进样体积为10uL。 9.根据权利要求7所述的试剂盒的使用方法， 其特征在于， 所述步骤(4)中的质谱条件权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115436506 A 2为： 采用电喷雾 离子源， 正离 子扫描模式， 选择反应 检测扫描方式。 10.根据权利要求1～6任一项所述的试剂 盒在利用液相色谱串联质谱技术同时检测滤 纸干血片中17α ‑OHP、 睾酮、 雄烯二酮、 1 1‑脱氧皮质醇、 21 ‑脱氧皮质醇和皮质醇中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115436506 A 3