(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210902310.7 (22)申请日 2022.07.28 (71)申请人 江阴天江药业有限公司 地址 214429 江苏省无锡市江阴高新区新 胜路1号 (72)发明人 石海培　祝倩倩　王协和　邹亚丹　 陈盛君　李松　顾芹英　李淑娟　 袁健　王琪　翟燕娟　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 叶江栩 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/74(2006.01)G01N 30/88(2006.01) G01N 30/90(2006.01) G01N 30/94(2006.01) G01N 30/95(2006.01) (54)发明名称 一种全面控制落 花生枝叶质量的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种全面控制落花生枝叶质 量的检测方法， 通过超高效液相色谱法建立特征 图谱， 以菊苣酸和原儿茶酸为对照 峰， 结合了指 标含量检测和薄层检测， 通过优化的检测方法， 对落花生枝 叶的药材、 饮片、 制剂中间体及配方 颗粒进行较为全面地质量监测。 操作简单， 重现 性好， 准确可靠， 节约时间， 为落花生枝叶的内在 质量控制提供了一种新的分析手段。 权利要求书2页 说明书23页 附图16页 CN 115266982 A 2022.11.01 CN 115266982 A 1.一种全面控制落 花生枝叶质量的检测方法， 其特 征在于， 包 含以下步骤： (1)取菊苣酸和原儿茶酸对照品制备得到对照品溶液； 取落花生枝叶对照药材制备得 到对照药 材溶液； (2)取供试品制备 得到供试品溶液； (3)用超高效液相色谱仪分别检测供试品溶液、 对照品溶液和对照药材溶液， 得到相应 的图谱； (4)分析比较对照品溶液、 对照药材溶液和供试品溶液的特征图谱， 选择供试品溶液的 特征图谱中与对照药材溶液 的特征色谱中保留时间相对应的8个特征峰作为共有特征峰， 构建落花生枝叶的超高效液相特征图谱； 其中特征峰1应与原儿茶酸对照品的特征峰保留 时间相对应， 特 征峰8应与菊 苣酸对照品的特 征峰保留时间相对应。 2.根据权利要求1所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于： 所述步骤 S3进样检测时色谱条件为： 十八烷基键合硅胶色谱柱， 流动相A： 乙腈、 流动相B： 0.05～ 0.3％磷酸溶 液， 按以下的洗脱梯度进行洗脱： 检测波长： 220nm； 流速： 0.2～0.4ml/min； 柱温： 20～50℃； 供试品溶液和参照物溶液的 进样量为0.5～2 μl。 3.根据权利要求2所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于： 步骤S3 中， 所述步骤S3进样检测时色谱条件为： ZORB AX Eclipse Plus C18 RRHD， 2.1 ×100mm， 1.8 μm， 流动相A： 乙腈、 流动相B： 0.1％磷酸溶液； 检测波长： 220nm； 流速： 0.35ml/min； 柱温： 35 ℃， 供试品溶液和参照物溶 液的进样量 为2 μl。 4.根据权利要求1所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于： 步骤(4) 中所述落花生枝叶的超高效液相特征图谱， 以原儿茶酸对照品的特征峰为S1峰， 计算特征 峰2、 特征峰3、 特征峰4与S1峰的相对保留时间， 峰2： 1.53 ±10％、 峰3： 1.56 ±10％、 峰4： 1.69±10％； 以菊苣酸对照品的特征为S2峰， 计算特征峰5、 特征峰6、 特征峰7与S2峰 的相对 保留时间， 峰5： 0.6 6±10％、 峰6： 0.83 ±10％、 峰7： 0.8 8±10％。 5.根据权利要求1所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于， 所述供试 品溶液的制备过程为： 取供试品样品研细， 精密称 定0.2～1.0g， 置具塞锥形瓶中， 加入 水或 10～100％甲醇溶液25ml， 密塞， 称定重量， 超声/加热/震荡15min～60min后， 放冷， 再称定 重量， 用相应溶剂补足减失的重量， 摇匀， 滤 过， 取续滤 液， 即得。 6.根据权利要求1所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于： 所述对照 品溶液的浓度为菊苣酸20 μg/ml， 原儿茶酸50 μg/ml， 使用溶剂为70％甲醇； 所述对照药材溶 液以10～100％甲醇为溶剂， 25ml/g对照药材用量溶解， 提取方式为超声/加热/震荡， 提取 时间为30分钟。 7.根据权利要求1所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于， 还包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115266982 A 2(5)将待测的供试品溶液进行步骤(3)的进样检测， 以菊苣酸的含量作为含量指标成分， 对 落花生枝叶进行质量评价。 8.根据权利要求1所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于， 在超高效 液相色谱法检测后再进行薄层检测， 所述薄层检测具体步骤 包括： (1)薄层供试品溶液的制备： 取落花生枝叶配方颗粒0.1～2g， 研细， 加10％～100％的 乙醇或10％～100％的甲醇10～20ml， 超声处理15～45分钟， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加水或 10％～10 0％甲醇0.5～ 2ml使溶解， 作为供 试品溶液； (2)薄层对照溶液的制备： 取落花生枝叶对照药材0.1～3g， 加 水20～100ml， 煎煮10～ 60分钟， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加水或10％～100％甲醇10～50ml， 超声处理15～45分钟， 滤 过， 滤液蒸干， 残渣加甲醇0.5～2ml溶解， 作为对照药材溶液； 取阿魏酸对照品， 加甲醇制成 每1ml含1mg的溶 液， 作为对照品溶 液； (3)测定： 分别吸取上述三种溶液各0.5～4μl， 点于同一硅胶G薄层板上， 以环己烷 ‑二 氯甲烷‑乙酸乙酯 ‑甲酸为展开剂， 展开， 取 出， 晾干， 置紫外光灯下检视 。 9.根据权利要求8所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于， 所述薄层 检测的步骤为： (1)薄层供试品溶液的制备： 取落花生枝叶配方颗粒0.2g， 研细， 加甲醇20ml， 超声处理 30分钟， 滤 过， 滤液蒸干， 残渣加甲醇1ml使溶解， 作为供 试品溶液； (2)薄层对照溶液的制 备： 取落花生枝叶对照药材2g， 加水50ml， 煎煮30分钟， 滤过， 滤 液蒸干， 残渣加甲醇20ml， 超声处理30 分钟， 滤过， 滤液蒸干， 残渣加甲醇1ml溶解， 作为对照 药材溶液； 取阿魏酸对照品， 加甲醇制成每1ml含1mg的溶 液， 作为对照品溶 液； (3)测定： 分别吸取供试品溶液、 对照药材溶液、 对照品溶液各2 μl， 点于同一硅胶G薄层 板上， 以环己烷 ‑二氯甲烷 ‑乙酸乙酯 ‑甲酸2∶ 1∶ 1∶0.1为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 置紫外光 灯下检视 。 10.根据权利要求1所述的全面控制落花生枝叶质量的检测方法， 其特征在于： 所述供 试品为落花生枝叶药 材、 饮片、 制剂中间体或配方颗粒。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115266982 A 3