(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210940820.3 (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 赣南师范大学 地址 341000 江西省赣州市 蓉江新区 (72)发明人 杨阳　何师国　付业淞　范文星　 甘秩丽　丁琳　朱博　 (74)专利代理 机构 深圳市智旭鼎浩知识产权代 理事务所(普通 合伙) 44746 专利代理师 周超 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种分蘖洋葱 根际土壤大蒜素的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种分蘖洋葱根际土壤大蒜 素的检测方法， 通过采用分析纯级甲醇溶液浸 提， 强力涡旋振荡， 低温浸提， 离心等操作步骤， 将分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素进行提取后， 采 用高效液相色谱仪进行检测， 所述检测方法解决 了对分蘖洋葱根际土壤中大蒜素的检测方法空 缺， 传统前处理方法对分蘖洋葱根际土壤大蒜素 的提取不彻底， 检测不准确的技术问题， 具有分 蘖洋葱根际土壤大蒜素提取效果佳， 提取效率 高、 操作简便、 检测快速、 灵敏准确的有益效果， 为分蘖洋葱轮作、 间作和套作栽培模式推广与应 用提供强有力的技 术支持。 权利要求书1页 说明书3页 附图3页 CN 115267001 A 2022.11.01 CN 115267001 A 1.一种分蘖洋葱 根际土壤大蒜素的检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤， 步骤一， 取分蘖洋葱根际土壤， 加入分析纯级甲醇溶液进行浸提， 得到第一固液混合 物； 步骤二， 将所述第一固液混合物进行强力涡旋振荡， 得到第二固液混合物； 步骤三， 将所述第二固液混合物放置 于恒温箱内继续浸提， 得到第三固液混合物； 步骤四， 将所述第三固液混合物进行离心后取上清液， 将所述上清液进行有机滤膜过 滤， 得到待测液； 步骤五， 配制大蒜素 标准溶液， 将所述待测液进行高效液相色谱检测。 2.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述分蘖洋 葱根际土壤与所述纯甲醇溶 液的料液比为1g:1mL。 3.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述恒温箱 设置温度为 4℃。 4.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 放置于所述 恒温箱内的时间为12 ～48小时。 5.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述高效液 相色谱检测采用的流动相为乙腈水 溶液。 6.如权利要求5所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述乙腈水 溶液的体积比为 流动相V(乙腈)： V(水)＝75:25 。 7.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述高效液 相色谱检测波长为215nm， 色谱柱温度为3 0℃～35℃。 8.如权利要求5所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述流动相 流速为1mL/mi n。 9.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述高效液 相色谱检测的进样量 为10～30 μl， 保留时间为10～15mi n。 10.如权利要求1所述的分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 其特征在于， 所述有机 滤膜的孔径为0.2 2微米。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115267001 A 2一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于检测技 术领域， 尤其涉及一种分蘖洋葱 根际土壤大蒜素的检测方法。 背景技术 [0002]分蘖洋葱俗称毛葱或珠葱， 为百合科葱属草本植物， 可以有效杀灭某些有害病菌， 减少相关病害的发生， 因此常被用于与其他作物轮作、 间作和套作。 分蘖洋葱适合与黄瓜、 番茄等蔬菜间作、 套作， 提高复种指数， 减少农药使用， 有利于发展绿色农业。 例如， 套作分 蘖洋葱可显著增加黄瓜根际土壤速效养 分含量， 提高多酚氧化酶、 脲酶活性， 显著 提高土壤 微生物多样性， 有效 改善土壤微生态环境， 使黄瓜亩产增加51％。 分蘖洋葱与黄瓜套作可降 低黄瓜枯萎病发病率， 并提高黄瓜单株产量， 这与分蘖洋葱释放到土壤中的大蒜素密不可 分。 [0003]大蒜素主要包括二烯丙基二硫醚、 二烯丙基三硫醚及少量的二烯丙基一硫醚、 二 烯丙基四硫醚和阿霍烯等烯丙基有机硫化物。 分蘖洋葱能提高其他作物的产量， 与其根际 散发的大蒜素紧密相关， 不同浓度的大蒜素对其他作物的协同作用不同， 因此有必要对分 蘖洋葱根际土壤中的大蒜素含量进行检测。 目前大蒜素常规检测方法有NY/T  1497‑2007、 NY/T 1800‑2009和NY/T  2643‑2014， 这些检测方法在检测前都需要先对样品进行前处理， 从中提取出大蒜素， 常用的前处理方法包括使用丙酮溶解、 乙醇提取、 正己烷萃取、 水溶解 等手段， 如 公开号为CN106596783A中提到的将大蒜素片与N,N ‑二甲基甲酰胺混合溶解， 但 这些处理方法对分蘖洋葱根际土壤中的大蒜素的提取效果均不好， 影响后续含量检测的准 确性。 发明内容 [0004]本发明提供了一种分蘖洋葱根际土壤大蒜素的检测方法， 用于解决目前现有的样 品前处理方法对分蘖洋葱根际土壤中大蒜素的提取不彻底， 从而影响对分蘖洋葱根际土壤 中的大蒜素含量检测不 准确的技 术问题。 [0005]为解决上述技术问题， 本发明是通过以下技术方案实现的： 一种分蘖洋葱根际土 壤大蒜素 的检测方法， 包括以下步骤， 步骤一， 取分蘖洋葱根际土壤， 加入分析纯级甲醇溶 液进行浸提， 得到第一固液混合物； 步骤二， 将所述第一固液混合物进行强力涡旋振荡， 得 到第二固液混合物； 步骤三， 将所述第二固液混合物放置于恒温箱内继续浸提， 得到第三固 液混合物； 步骤四， 将所述第三固液混合物进行离心后取上清液， 将所述上清液进 行有机滤 膜过滤， 得到待测液； 步骤五， 配制大蒜素 标准溶液， 将所述待测液进行高效液相色谱检测。 [0006]作为优选， 所述分蘖洋葱 根际土壤与所述纯甲醇溶 液的料液比为1g:1mL。 [0007]作为优选， 所述恒温箱设置温度为 4℃。 [0008]作为优选， 放置 于所述恒温箱内的时间为12 ～48小时。 [0009]作为优选， 所述高效液相色谱检测采用的流动相为乙腈水 溶液。 [0010]作为优选， 所述乙腈水 溶液的体积比为V(乙腈)： V(水)＝75:25 。说　明　书 1/3 页 3 CN 115267001 A 3