(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211035733.X (22)申请日 2022.08.26 (71)申请人 南京海纳医药 科技股份有限公司 地址 210009 江苏省南京市 鼓楼区新模范 马路5号15层 申请人 南京海纳制药有限公司 　 南京一诺医药 科技有限公司 (72)发明人 鲍梅　兰清源　辛妮　 (74)专利代理 机构 南京思拓知识产权代理事务 所(普通合伙) 32288 专利代理师 吕鹏涛　王海云 (51)Int.Cl. G01N 13/04(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 一种利多卡因凝胶贴的体 外透皮试验方法 (57)摘要 本发明涉及一种利多卡因凝胶贴的体外透 皮试验方法， 具体包括如下步骤： (1)揭除利多 卡 因凝胶贴上的防粘膜后粘贴在猪皮的表面， 在 Franz扩散池中进行透皮试验； (2)将透皮试验后 的猪皮， 加入氢氧化钠溶液中， 在65～75℃的温 度下浸泡， 浸泡后， 进行匀浆处理， 稀释， 离心， 取 上清液过滤， 取续滤液作为供试品溶液； (3)采用 高效液相色谱方法测定供试品溶液的皮内滞留 量。 采用本发明的方法处理猪皮， 能够有效将猪 皮中滞留的利多卡因提取出来， 处理后的猪皮呈 现完全溶解状态， 具有肉眼可见的优势， 主成分 利多卡因稳定性好， 采用高效液相色谱方法进行 测定皮内滞留透皮试验时， 皮内滞留量偏高， 测 试结果更加准确。 权利要求书1页 说明书12页 附图2页 CN 115468879 A 2022.12.13 CN 115468879 A 1.一种利多卡因凝胶贴的体外 透皮试验方法， 其特 征在于， 它包括如下步骤： (1)将猪皮浸泡在生理盐水中， 浸泡后的猪皮的表面用棉布擦干， 揭除凝胶 贴上的防粘 膜后粘贴在擦干后的猪皮的表面上， 在Franz扩散池中进行透皮试验； 其中， 透皮介质为生理盐水； 透皮介质的体积为14.5～ 15.5ml； 透皮介质的温度 为30～ 35℃； 转速为20 0～1000rpm； 取样时间为6 h； (2)将透皮试验后的猪皮， 加入氢氧化钠 溶液中， 在65～75℃的温度下浸泡， 浸泡后， 在 5000～7000rpm的条件 下进行匀浆处理， 所得混悬液加入甲醇稀释后， 离心， 取上清液过滤， 取续滤液作为皮内滞留透皮试验的供 试品溶液； (3)将步骤(2)中所得供试品溶液， 采用高效液相色谱方法进行测定， 其中， 色谱条件包 括： 色谱柱 为十八烷基硅烷键合硅胶； 采用流动相A和流动相B为混合流动相进 行等度洗脱， 流动相A和流动相B的比例为30～40:70～60； 所述流动相A为1～5％冰乙酸溶液， 采用氢氧 化钠调节pH值至 5.0～6.0； 所述 流动相B为甲醇。 2.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (2)中， 浸泡时的温度为70℃。 3.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (2)中， 浸泡时的时间为1～3 h； 优选为2h 。 4.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (2)中， 氢 氧化钠溶 液的浓度0.0 5～0.15M， 优选为0.1M； 匀浆处 理时的转速为6 000rpm。 5.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (1)中， 在生理盐水中浸泡的时间为20～40分钟； 优选为3 0分钟。 6.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (1)中， 透皮介质的体积为14.5ml； 透皮介质的温度为32℃； 转速为5 00rpm。 7.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (3)中， 所述色谱柱为Inertsustion  C18； 优选地， 色谱柱的长度为250mm， 直径为4.6mm， 填 料粒径为5 μm。 8.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (3)中， 所述 流动相A为3％冰乙酸溶 液， 采用氢 氧化钠调节pH值至 5.5。 9.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (3)中， 等度洗脱时， 流动相A和流动相B的比例为3 5:65。 10.根据权利要求1所述的利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方法， 其特征在于， 在步骤 (3)中， 所述色谱条件包括： 流速为0.8～1.5mL/min， 优选为1mL/min； 进样量为10～ 50 μl， 优 选为20 μl； 检测波长为2 25～235nm； 优选为23 0nm。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115468879 A 2一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试验方 法 技术领域 [0001]本发明属于药物分析方法技术领域， 具体涉及一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试 验方法。 背景技术 [0002]利多卡因凝胶贴为局部外用药， 作用部位在角质层内的外用制剂， 在药学主要质 量特性及制剂微观结构一致的基础上， 我们可通过体外释放和体外透 皮吸收对比试验来评 价自制药和参比制剂的疗效的一致性， 需开展体外透皮研究。 体外透皮为模拟药品在生理 条件下的透皮过程， 以部分地反应药品质量与临床治疗的有效性。 发明内容 [0003]本发明的目的是在现有技术的基础上， 提供一种利多卡因凝胶贴的体外透皮试验 方法。 [0004]本发明的技 术方案如下： [0005]一种利多卡因凝胶贴的体外 透皮试验方法， 其特 征在于， 它包括如下步骤： [0006](1)将猪皮浸泡在生理盐水中， 浸泡后的猪皮的表面用棉 布擦干， 揭除凝胶贴上的 防粘膜后粘贴在擦干后的猪皮的表面上， 在Franz扩散池中进行透皮试验； [0007]其中， 透皮介质为生 理盐水； 透皮介质的体积 为14.5～15.5ml； 透皮介质的温度为 30～35℃； 转速为20 0～1000rpm； 取样时间为6 h； [0008](2)将透皮试验后的猪皮， 加入氢氧化钠溶液中， 在65～75℃的温度下浸泡， 浸泡 后， 在5000～7000rpm的条件 下进行匀浆处理， 所得混悬液加入甲醇稀释后， 离心， 取上清液 过滤， 取续滤 液作为皮内滞留透皮试验的供 试品溶液； [0009](3)将步骤(2)中所得供试 品溶液， 采用高效液相色谱方法进行测定， 其中， 色谱条 件包括： 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶； 采用流动相A和流动相B为混合流动相进行等度 洗脱， 流动相A和流动相B的比例为30～40:70～60； 所述流动相A为1～5％冰乙酸溶液， 采用 氢氧化钠调节pH值至 5.0～6.0； 所述 流动相B为甲醇。 [0010]对于本发明而言， 需要对透皮试验后的猪皮进行处理， 具体处理过程如下： 将透皮 试验后的猪皮加 入氢氧化钠溶液中， 在65～75℃的温度下浸泡， 浸泡后， 在5000～7000rpm 的条件下进行匀 浆处理， 处理后的猪皮在匀 浆处理的过程中容易被打碎， 主成分利多卡因 容易被提取出来， 采用高效液相色谱方法进 行测定皮内滞留透 皮试验时， 皮内滞留量偏高， 测试结果更加准确。 [0011]在相同的条件下， 采用其他方式处理， 例如， 将透皮试验后的猪皮直接进行匀浆处 理、 不加人氢氧化钠， 仅仅加入水中在65～75℃的温度下浸泡以及加入甲醇进行匀浆处理 时， 处理后的猪皮在匀浆处理的过程中均难以被打碎， 主成分利多卡因不易被提取出来， 采 用高效液相色谱方法进行测定皮内滞留透皮试验时， 皮内滞留量偏低， 准确率偏低。 [0012]在本发明中， 在步骤(2)中， 浸泡时的温度为65～75℃， 可以但不局限于65℃、 68说　明　书 1/12 页 3 CN 115468879 A 3