(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210889857.8 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 江苏知原药业股份有限公司 地址 214194 江苏省无锡市锡山区锡北镇 工业园区泾新路3 5号 (72)发明人 冯杰　陈玉兰　刘永波　蔡蓓蕾　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法 (57)摘要 本发明是卡泊三醇搽剂有关物质的检测方 法， 采用液相色谱仪进行检测， 包括： （1） 配制稀 释剂； 使用稀释剂 稀释卡泊三醇搽剂， 取上清液， 制得供试品溶液； 使用稀释剂稀释供试品溶液， 制得对照溶液； 使用稀释剂稀释空白辅料， 取上 清液， 制得空白溶液； （2） 量取稀释剂、 空白溶液、 供试品溶液、 对照溶液， 分别注入液相色谱仪， 记 录色谱图； （3） 取卡泊三 醇、 杂质C对照品， 用稀释 剂溶解并稀释， 摇匀， 作为系统适用性溶液； （4） 量取系统适用性溶液， 注入液相色谱仪， 记录色 谱图。 本发明的优点： 通过流动相合理设置和梯 度洗脱程序的合理设计， 解决了前卡泊三醇降解 问题和提高卡泊三醇异丙醇醚的响应问题； 通过 供试品的合理 处理设置解决了溶剂效应 。 权利要求书2页 说明书10页 附图5页 CN 115290777 A 2022.11.04 CN 115290777 A 1.一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 该检测方法采用液相色谱仪 进行检测， 且 包括以下步骤： （1） 溶液的配制： 配制稀释剂； 使用稀释剂稀释卡泊三醇搽剂， 取上清液， 制得供试品溶 液； 使用稀释剂稀释供试品溶液， 制得对照溶液； 使用稀释剂稀释空白辅料， 取上清液， 制得 空白溶液； （2） 量取稀释剂、 空白溶 液、 供试品溶液、 对照溶 液， 分别注入液相色谱仪， 记录色谱图； （3） 取卡泊三醇、 杂质C对照品适 量， 用稀释剂溶解并稀释， 摇匀， 作为系统适用性溶 液； （4） 量取系统适用性溶 液， 注入液相色谱仪， 记录色谱图。 2.如权利要求1所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的步 骤 （1） 中稀释剂具体为浓度0.1%的枸橼酸钠水溶液 ‑甲醇‑乙腈， 其中枸橼酸钠： 甲醇： 乙腈 体积比为3 0： 50： 20。 3.如权利要求2所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的步 骤 （1） 中供试品溶液的配制方法为： 量取5ml卡泊三醇搽剂， 置于内部用活性炭： 干燥剂=1： 1 填满的5ml针筒中， 针筒下部接50ml梨形瓶， 等全部滴定结束后， 用5ml乙醇洗涤针筒， 洗涤 液仍用同一50ml梨形瓶接收， 梨形瓶于60℃旋转蒸发5min后， 加稀释剂每次2ml， 振摇或超 声使溶解， 少量多次直到完全转移至10ml容量瓶中， 加稀释剂稀释 至刻度， 摇匀， 12000rpm/ min离心10mi n， 取上清液。 4.如权利要求3所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的步 骤 （1） 中对照溶液的配制方法为： 移取供试品溶液0.5ml置于100ml容量瓶中， 用稀释剂稀释 至刻度， 摇匀。 5.如权利要求4所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的步 骤 （1） 中空白溶液的配制方法为： 量取 空白辅料5ml， 置于内部用活性炭： 干燥剂 =1： 1填满的 5ml针筒中， 针筒下部接50ml梨形瓶， 等全部滴定结束后， 用5ml乙醇洗涤针筒， 洗涤液仍用 同一50ml梨形瓶接收， 梨形瓶于60℃旋转蒸发5min后， 加稀释剂每次2ml， 振摇或超声使溶 解， 少量多次直到完全转移至10ml容量瓶中， 加 稀释剂稀释至刻度， 摇匀， 12000rpm/min离 心10min， 取上清液。 6.如权利要求5所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的步 骤 （3） 中系统适用性溶液的配制方法具体为： 分别取卡泊三醇、 杂质C对照品置于同一容量 瓶中， 用稀释剂溶解并稀释成每1ml含卡泊三醇15 μg、 杂质C  0.225 μg的混合溶 液， 摇匀。 7.如权利要求1 ‑6任一项所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的采用液相色谱仪进行检测， 具体是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以0.1%枸橼 酸钠为流动相A， 乙腈为流动相B， 甲醇为流动相C， 按表1程序进行梯度洗脱， 流速为1.0ml/ min， 检测波长为26 5nm， 柱温为28℃， 进样体积为10 0 μl， 表1梯度洗脱程序表权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115290777 A 2。 8.如权利要求7所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的十 八烷基硅烷键合硅胶填充剂具体是Hypersi l BDS C18， 150mm×4.6mm， 3 μm色谱柱。 9.如权利要求8所述的一种卡泊三醇搽剂有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述的杂 质的检测限度为： 供试品溶液 的色谱图中如有杂质峰， 扣除稀释剂和空 白溶液中存在色谱 峰后， 杂质C不得大于对照溶液主峰面积的3倍即1.5%， 杂质D不得大于对照溶液主峰面积的 7倍即3.5%， 其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积即0.5%， 其他单个杂质峰面积 总和不得大于对照溶液主峰面积的2倍即1.0%， 小于对照溶液主峰面积0.1倍即0.05%的峰 忽略不计， 相对保留时间大于等于2.0的峰面积总和的卡泊三醇异丙醇醚不得大于对照溶 液主峰面积的4 倍即2.0%。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115290777 A 3