(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210935230.1 (22)申请日 2022.08.04 (71)申请人 英格尔检测技 术服务 （上海） 有限公 司 地址 201100 上海市闵行区瓶北路15 5号2 幢 (72)发明人 张振洋　张友兰　樊华军　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱 联用检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种原料药中氯乙酸残留的液 相色谱质谱 联用检测方法， 属于药物分析技术领 域， 包括以下步骤： 样品溶解、 液相色谱串联质谱 联用检测和计算结果。 本发明的方法能够有效检 出氯乙酸在原料药中的残留， 定量 限达到40ng/ mL； 本发明相对于现有的液相色谱法或气相色谱 质谱法， 制样过程简单， 操作安全简易， 处理方便 快捷， 灵敏度更高， 提高了检测效率和质量； 本发 明的方法测定LC ‑MSMS谱基线平稳， 不发生漂移， 串联质谱检测器选择性强， 干扰少， 提高了方法 的精密度和准确度； 本发明的方法用于氯乙酸的 残留测定， 具有良好的灵敏度、 线性关系、 精密 度、 准确度和稳定性， 在原料药质量研究以及杂 质分析与控制研究等方面具有重要研究价 值。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115290792 A 2022.11.04 CN 115290792 A 1.一种原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： 样品溶解： 将 样品和对照品溶解在溶剂中； 液相色谱串联质谱联用检测： 设定色谱和质谱条件参数； 计算结果： 将多个对照品溶液以及原料药样品溶液按色谱和质谱条件依次进样， 记录 LC‑MSMS谱图， 根据多个对照品溶液的图谱 数据和浓度数据绘制线性相关工作曲线， 将原料 药样品的图谱数据带入并计算得出样品中残留对照品浓度， 从而完成原料药中氯乙酸的残 留测定。 2.根据权利要求1所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述样品溶解时， 用精密称取适量原料药样品， 用溶剂水溶解并定容得到一定浓度的 样品溶液； 用精密称取适量氯乙酸对照品， 用溶剂水溶解并定容成具有一定浓度梯度的多 个对照品溶 液。 3.根据权利要求2所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述对照品溶 液的浓度依次为81ng/mL、 13 5ng/mL、 270ng/mL、 40 5ng/mL和540ng/mL。 4.根据权利要求1所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述液相色谱串联质谱联用检测时， 色谱条件如下： 色谱柱采用苯基色谱柱； 流动相采用甲酸水 溶液,甲酸乙腈溶 液； 采用梯度洗脱； 质谱参数如下： 采用串联四级杆质谱检测器； 采用ESI离 子源； 采用MRM模式进行定性定量检测。 5.根据权利要求4所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述色谱柱型号 为Agilent Eclipse Plus Phenyl‑Hexyl 3.5 μm 4.6×150 mm。 6.根据权利要求4所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述色谱柱流速为0.3mL/mi n， 进样量 为5 μL， 柱温为 40℃。 7.根据权利要求4所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述色谱柱流动相A为0.1%甲酸水溶液， B为0.1%甲酸乙腈溶液； 梯度洗脱为： 0 ‑2min， A90%‑90%； 2‑7min， A90% ‑35%； 7‑10min， A35% ‑35%； 10‑11min， A35% ‑90%； 11‑12min， A90% ‑ 90%。 8.根据权利要求4所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述质谱检测器的ESI气帘气35psi， 温度为600℃， 离子化电压 ‑4500V， 喷雾器45psi， 辅助加热气40psi。 9.根据权利要求4所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述质谱检测器的扫描方式为负离 子模式； 多反应监测。 10.根据权利要求4所述的原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 其特征 在于， 所述质谱检测器的扫描定量离子对为93/49  m/z， 定性离子对为95/51  m/z， DP电压均 为‑70V， CE电压均为 ‑24V。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115290792 A 2一种原料药中氯乙酸残留 的液相色谱质谱联用检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及药物分析技术领域， 具体是一种原料药中氯乙酸残留的液相色谱质谱 联用检测方法。 背景技术 [0002]药物杂质是活性药物成分(API， 原料药)或药物制剂中不希望存在的化学成分。 原 料药物中的杂质可能源于合 成过程或起始物料、 中间体、 溶剂、 催 化剂、 反应副产 物、 原料药 成分不稳定、 与辅料不兼容， 或者是与包装材料发生反应等等。 药物中各种杂质对于最 终药 物的安全性有很大的影 响。 其中基因毒性杂质(Genotoxic  Impurity,GTI)是指化合物本身 直接损伤细胞DNA， 产生基因突变或体内诱变， 具有致癌可能或者倾向。 其特点是在很低浓 度时即可造成人体遗传物质的损伤， 进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生， 因其毒性较 强对用药的安全性产生了强烈的威胁。 [0003]氯乙酸是一种重要的有机化工原料， 还是很多医药合成的中间体。 而氯乙酸存在 卤代烃类警示结构， 在原料 药中的残留则是典型的基因毒性杂质。 [0004]氯乙酸作为小分子酸一般可通过GC或者IC进行检测， 但是目前这些方法的缺陷是 灵敏度不够， 不能满足基因毒性杂质低限度的要求。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种原料药 中氯乙酸残留 的液相色谱质谱联用检测方法， 以解决上述背景技 术中提出的问题。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0007]一种原料 药中氯乙酸残留的液相色谱质谱联用检测方法， 包括以下步骤： [0008]样品溶解： 将 样品和对照品溶解在溶剂中； [0009]液相色谱串联质谱联用检测： 设定色谱和质谱条件参数； [0010]计算结果： 将多个对照 品溶液以及原料药样品溶液按色谱和质谱条件依次进样， 记录LC‑MSMS谱图， 根据多个对照品溶液的图谱数据和浓度数据绘制线性相关工作曲线， 将 原料药样品的图谱数据带入并计算得出样品中残留对照品浓度， 从而完成原料药中氯乙酸 的残留测定 。 [0011]作为本发明的进一步技术方案， 所述样品溶解时， 用精密称取适量原料药样品， 用 溶剂水溶解并定容得到一定浓度的样品溶液； 用精密称取适量氯乙酸对照品， 用溶剂水溶 解并定容成具有一定浓度梯度的多个对照品溶 液。 [0012]作为本发明的更进一步技术方案， 所述对照品溶液的浓度依次为81ng/mL、 135ng/ mL、 270ng/mL、 40 5ng/mL和540ng/mL。 [0013]作为本发明的再进一步技术方案， 所述液相色谱串联质谱联用检测时， 色谱条件 如下： [0014]色谱柱采用苯基色谱柱；说　明　书 1/4 页 3 CN 115290792 A 3