(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210919255.2 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 绍兴市食品药品检验研究院 地址 312071 浙江省绍兴 市马山镇世纪东 街286号 (72)发明人 胡建刚　吴坚　魏晓蕾　毛威　 何雨欣　平恬敏　王彩霞　杨瑞　 陶永超　李丹　竹惠燕　俞雅各　 屠生辉　王佳丽　 (74)专利代理 机构 绍兴普华联合专利代理事务 所(普通合伙) 33274 专利代理师 朱建刚 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方 法 (57)摘要 本发明公开了一种同时检测黄酒中多种甜 味剂(甜蜜素、 安赛蜜、 糖精钠、 三氯蔗糖、 阿力 甜、 纽甜、 阿斯巴甜、 甜菊糖苷、 爱德 万甜)的检测 方法， 包括以下步骤： (1)配制标准工作液； (2)样 品制备； (3)检测； (4)确证。 本发明前处理简单快 捷， 基质配标定性准确， 灵敏度高， 定量结果稳定 可靠， 且具有良好的准确度和精密度， 可用于黄 酒中多种甜味剂的检测。 对黄酒 中甜味剂的风险 监测对促进地方产业发展、 预防和控制食品安全 危害、 保障人民群众的身体健康均有重要意 义。 权利要求书2页 说明书7页 附图13页 CN 115266991 A 2022.11.01 CN 115266991 A 1.一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： (1)配制标准工作液： a、 配制标准储备液： 分别配制浓度均为500mg/L的甜蜜素、 安赛蜜、 糖精钠、 三氯蔗糖、 阿力甜、 纽甜、 阿斯巴甜、 甜菊糖苷、 爱德万 甜标准储备 液， 冷藏保存； b、 配制第一标准中间工作液： 移取上述9种标准储备液各0.20mL， 配制成含9种甜味剂 的浓度为10mg/L的第一标准中间工作液； c、 配制第二标准中间工作液： 取1.0mL第一标准中间工作液， 配制成浓度为1mg/L第二 标准中间工作液； d、 分别取0.10mL、 0.25mL、 0.50mL的第二标准中间工作液， 各加入1.0mL的黄酒空白基 质， 配制成浓度分别为10、 25、 50 μg/L的标准工作 溶液； 再分别取0.10mL、 0.25mL、 0.50mL的 第一标准中间工作液， 各加 入1.0mL的黄酒空白基质， 配制成浓度 分别为100、 250、 500 μg/L 的标准工作溶 液； (2)样品制备： 称取黄酒样品1.0g于10.0mL 容量瓶中， 用超纯 水定容至刻度， 过 滤膜， 得到待测样品； (3)检测： 采用液相色谱 ‑串联四极杆复合线性离子阱质谱仪对步骤(1)制备的6种不同浓度的标 准工作溶液进行测试， 拟合标准曲线， 以性噪比S/N≥3和S/N≥10计算出9种 甜味剂的方法 检出限和定量限； 在相同条件下采用液相色谱 ‑串联四极杆复合线性离子阱质谱仪对步骤(2)制备的待 测样品进行测试， 根据不同甜味剂的标准曲线， 计算样品中9种甜味剂的含量； (4)确证： 各取步骤(a)中的9种标准储备液分别配制成浓度为250μg/L的基质标准品溶液， 采用 液相色谱 ‑串联四极杆复合线性离子阱质谱仪进 行检测， 得到标准品溶液二级质谱图， 以此 建立标准品二级质谱库； 搭配SCIEX  OS软件系统， 将样品实测二级质谱图与标准品二级质谱图进行对比； 当样 品中检测出甜味剂时， 其保留时间和二级碎片比率满足要求， 且实测二级质谱图与标准品 二级质谱库匹配Purity得分为90分以上， 则可确证有甜味剂检出。 2.如权利要求1所述一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特征在于： 步骤 (1)中， 标准储备液的具体配制方法为： 分别称取甜蜜素、 安赛蜜、 糖精钠、 三氯蔗糖、 阿力 甜、 纽甜、 阿斯巴甜、 甜菊糖苷、 爱德万甜标准品于10 mL容量瓶中， 分别用超 纯水溶解定容至 刻度， 得5 00mg/L标准储备 液， 于4℃冷藏保存。 3.如权利要求1所述一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特征在于： 步骤 (1)中， 第一标准中间工作液的具体配制方法为： 分别移取9种标准储备液0.20mL于10.0mL 容量瓶中， 用超纯 水定容至刻度， 得浓度为10mg/L标准中间工作液。 4.如权利要求1所述一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特征在于： 步骤 (1)中， 第二标准中间工作液的具体配制方法为： 取1.0mL第一标准中间工作液于10.0mL容 量瓶中,用超纯 水定容至刻度,得浓度为1mg/L标准中间工作液。 5.如权利要求1所述一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特征在于： 不同浓 度标准工作溶液的具体配制方法为： 分别取0.10mL、 0.25mL、 0.50mL的第二标准中间工作液权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115266991 A 2于10.0mL容量瓶中， 各加入1.0mL的黄酒空白基质， 用超纯水定容至刻度， 得到浓度分别为 10、 25、 50 μg/L的标准工作溶液； 再分别取0.10mL、 0.2 5mL、 0.50mL的第一标准中间工作液于 10.0mL容量瓶中， 各加入1.0mL的黄酒空白基质， 用超纯水定容至刻度， 得到浓度分别为 100、 250、 500 μg/L的标准工作溶 液。 6.如权利要求1所述一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特征在于： 色谱条 件为： Kinetex  2.6 μm F5 100A色谱柱， 规格为100 ×2.1mm， 1.8 μm； 流动相A： 5mmol/L乙酸铵 水溶液， 流动相B： 甲醇； 流速： 0.3 0mL/min； 进样量： 5 μL； 柱温： 40℃； 梯度洗脱。 7.如权利要求6所述一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特征在于： 梯度洗 脱程序为： 0min， A相95％、 B相5％， 瞬间达到设定比例； 0 ‑3.5min， 调 整为A相5％、 B相95％； 3.5‑5min， 保持A相5％、 B相95％； 5.1min， 瞬时调整为A相95％、 B相5％； 5.1 ‑7min， 保持A相 95％、 B相5％； 上述均为体积百分比。 8.如权利要求1所述一种同时检测黄酒中多种甜味剂的检测方法， 其特征在于： 质谱条 件为： 电喷雾离子源； 离子源温度550℃； 电喷雾电压 ‑4500V； 扫描模 式： MRM‑IDA‑EPI； 气帘 气压力： 3 0psi； 喷雾器压力5 5psi； 辅助加热器压力： 5 5.0psi； 碰撞气： Medium。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115266991 A 3