(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210893615.6 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 石家庄四药有限公司 地址 050035 河北省石家庄市高新 技术产 业开发区槐安 东路518号 （注 册地址） (72)发明人 杨娴　候海婷　赵方红　左亚茹　 曹柳　李磊　孙晓飞　 (74)专利代理 机构 河北国维致远知识产权代理 有限公司 13137 专利代理师 任青 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物 的检测方法 (57)摘要 本发明涉及药物制剂检测技术领域， 具体公 开一种呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的 检测方法。 所述检测方法为液相色谱 ‑质谱联用 法， 其中， 所述液相色谱的条件为： 以C18柱为色 谱柱， 以含有0.2％甲酸和5mM乙酸铵的水溶液为 流动相A， 以含有0.2％甲酸和5mM 乙酸铵的甲醇 溶液为流动相B， 梯度洗脱； 所述质谱采用ESI离 子源， 正离子检测模式。 本发明提供的检测方法， 能够在2ng/g～800ng/g的范围内准确测定大鼠 气管支气管匀浆液中的硫酸沙丁胺醇和异丙托 溴铵的含 量， 在1ng/g～400ng/g的范围内准确测 定大鼠肺组织匀浆液中的硫酸沙丁胺醇和异丙 托溴铵的含量， 专属性强， 稳定性高。 权利要求书2页 说明书10页 附图4页 CN 115372502 A 2022.11.22 CN 115372502 A 1.一种呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在于： 所述检测方法 包括以下步骤： 步骤一、 分别制备空白气管支气管线性溶液、 空白肺 组织线性溶液、 含内标物的气管支 气管待测液和含内标物的肺组织待测液； 步骤二、 采用液相色谱 ‑质谱联用法分别检测所述线性溶液和所述待测液中的硫酸沙 丁胺醇和异丙托溴铵， 其中， 所述液相色谱的条件为： 以C18柱为色谱柱， 以含有0.2％ 甲酸和5mM乙酸铵的水溶液为流动相A， 以含有0.2％ 甲 酸和5mM乙酸铵的 甲醇溶液为流动相B， 梯度洗脱， 柱温为10℃～ 25℃； 所述质谱采用ESI离子源， 正离子检测模式， 离子源参数为： 气帘气压力为20psi， 喷雾 电压为5500V， 雾化温度为550℃， 雾化气压力 为55psi， 辅助气压力 为50psi， 碰撞气压力 为 9psi。 2.如权利要求1所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在于： 所述梯度洗脱的程序如下： 0min‑0.5min， 90％流动相A， 10％流动相B； 0.5min‑2min， 90％→10％流动相A， 10％ →90％流动相B； 2min‑3.5min， 10％流动相A， 90％流动相B； 3.5min‑3.51min， 10％→90％流动相A， 90％ →10％流动相B； 3.51min‑4min， 90％流动相A， 10％流动相B。 3.如权利要求1所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特 征在于： 所述硫酸沙丁胺醇的参数为： 母离子为240.2m/z， 子离子为148.3m/z， 去簇电压为40V， 射入电压为12 V， 碰撞电压为3 0V， 碰撞室射出电压为8V； 和/或 所述异丙托溴铵的参数为： 母离子为333.4m/z， 子离子为167.1m/z， 去簇电压为120V， 射入电压为12 V， 碰撞电压为3 5V， 碰撞室射出电压为8V。 4.如权利要求1所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在于： 所述内标物为氘代硫酸沙丁胺醇和 氘代异丙托溴铵； 其中， 所述氘代硫酸沙丁胺醇的参数 为： 母离子为249.4 m/z， 子离子为149m/z， 去簇电压为40V， 射入电压为10V， 碰撞电压为30V， 碰撞室射出电压为8V； 所述氘代异丙托溴铵的参数为： 母离子为340.3m/z， 子离子为 174.3m/z， 去簇电压为10 0V， 射入电压为10V， 碰撞电压为3 5V， 碰撞室射出电压为8V。 5.如权利要求1所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在于： 流速为0.28mL/mi n～0.32mL/mi n， 进样量 为10 μL。 6.如权利要求1所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在于： 所述色谱柱的型号 为Waters BEH C18， 规格为5 0mm×2.1mm×1.7 μm。 7.如权利要求1所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在于： 所述空白气管支气管线性溶 液的制备 过程如下： 在缓冲溶液中加入空白气管支气管匀浆， 再分别加入稀释液、 对照品工作液和无水乙 醇， 涡旋0.8min～1.5mi n， 再加入乙酸乙酯涡旋4.5mi n～5.5mi n， 萃取得有机相和水相； 向所述水相中加入无水乙醇和乙酸乙酯进行二 次萃取， 并将两次萃取得到的有机相混 合， 经35℃～40℃氮气吹干后再加入复溶 液复溶， 得 所述空白气管支气管线性溶 液； 和/或， 所述空白肺组织线性溶 液的制备 过程如下：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115372502 A 2在缓冲溶液中加入空白肺 组织匀浆， 再分别加入稀释液、 对照品工作液和无水乙醇， 涡 旋0.8min～1.5mi n， 再加入乙酸乙酯涡旋4.5mi n～5.5mi n， 萃取得有机相和水相； 向所述水相中加入无水乙醇和乙酸乙酯进行二 次萃取， 并将两次萃取得到的有机相混 合， 经35℃～40℃氮气吹干后再加入复溶 液复溶， 得 所述空白肺组织线性溶 液。 8.如权利要求1所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在于： 所述含内标物的气管支气管待测液的制备 过程如下： 在缓冲溶液中加入样品气管支气管匀浆， 再分别加入稀释液、 内标工作液和无水乙醇， 涡旋0.8min～1.5mi n， 再加入乙酸乙酯涡旋4.5mi n～5.5mi n， 萃取得有机相和水相； 向所述水相中加入无水乙醇和乙酸乙酯进行二 次萃取， 并将两次萃取得到的有机相混 合， 经35℃～40℃氮气吹干后再加入复溶 液复溶， 得 所述含内标物的气管支气管待测液； 和/或， 所述含内标物的肺组织待测液的制备 过程如下： 在缓冲溶液中加入样品肺 组织匀浆， 再分别加入稀释液、 内标工作液和无水乙醇， 涡旋 0.8min～1.5mi n， 再加入乙酸乙酯涡旋4.5mi n～5.5mi n， 萃取得有机相和水相； 向所述水相中加入无水乙醇和乙酸乙酯进行二 次萃取， 并将两次萃取得到的有机相混 合， 经35℃～40℃氮气吹干后再加入复溶 液复溶， 得 所述含内标物的肺组织待测液。 9.如权利要求7或8所述呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征在 于： 所述稀释液为体积浓度为 45％～55％的甲醇水溶液； 和/或 所述缓冲溶液为体积比为0.8～1.2:0.8～1.2的乙酸铵水溶液和氨水， 所述 乙酸铵水 溶液的浓度为 4.8mol/L～5.2mo l/L， 所述氨水的浓度为25wt％～ 28wt％； 和/或 所述复溶液为体积比为0.8～1.2:8.8～9.2的甲酸 乙腈溶液和水， 所述甲酸 乙腈溶液 中甲酸的体积浓度为0.48％～0.52％； 和/或 所述缓冲溶液、 匀浆、 稀释液、 工作液、 无水乙醇、 乙酸乙酯和复溶液的体积比为1.5～ 2.5:4.5～5.5:0.4～0.6:0.4～0.6:9 ～11:48～52:14～16 。 10.如权利要求7或8所述的呼吸道内吸入用复方异丙托溴铵药物的检测方法， 其特征 在于： 所述气管支气管匀浆包括质量体积比为 1:9～11的气管支气管 组织和生理盐水， 其中 质量的单位是g， 体积的单位是mL； 和/或 所述肺组织匀浆包括质量体积为1:4～6的肺 组织和生理盐水， 其中质量的单位是g， 体 积的单位是mL。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115372502 A 3