(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210944205.X (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 吴昕辰 地址 100013 北京市朝阳区和平街28号 申请人 张梦奇 (72)发明人 吴昕辰　张梦奇　王道兵　杨文宁　 杨瑞　张洛琪　 (74)专利代理 机构 北京文慧专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11955 专利代理师 戴丽伟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 一种基于尿酸检测阿卡 地新兴奋剂的方法 (57)摘要 本发明涉及一种基于尿酸检测阿卡地新兴 奋剂的方法， 包括以下步骤： ( 1)将尿样酶解处 理； (2)HPLC分离 纯化获得肌酸组分和尿酸组分； (3)将肌酸组分和尿酸组分采用LC ‑IRMS分析， 获 得肌酸的δ13C值和尿酸的δ13C值； (4)根据尿酸 的δ13C值与肌酸的δ13C值的差值进行阳性判 别。 上述方法可以用于阿卡地新兴奋剂的检测， 具有简便准确灵敏、 重复性 好等优点。 权利要求书1页 说明书7页 附图3页 CN 115356410 A 2022.11.18 CN 115356410 A 1.一种基于 尿酸检测阿卡 地新兴奋剂的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将尿样酶解处 理； (2)HPLC分离纯化， 获得肌酸组分和尿酸组分； (3)将肌酸组分和尿酸组分采用LC ‑IRMS分析， 获得肌酸的δ13C值和尿酸的δ13C值； (4)根据尿酸的δ13C值与肌酸的δ13C值的差值进行 阳性判别。 2.根据权利要求1所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤 (1)中， 将尿样酶解处 理， 包括以下步骤： 取尿样， 加入肌肝酶溶 液， 混匀， 处 理， 过滤。 3.根据权利要求2所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 混匀后 的处理的条件为3 5℃处理1h。 4.根据权利要求2所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 尿样与 肌肝酶溶 液的体积比为1mL： 5 0 μL； 肌肝酶溶 液中肌肝酶含量 为1kU/10 0 μL。 5.根据权利要求1 ‑4任一项所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在 于， 步骤(2)中， HPLC分离纯化获得肌酸组分和尿酸组分， 分离纯化方法包括： 色谱柱为 XBridge Shield RP18色谱柱， 柱温35℃,pH7.4的20mM磷酸盐缓冲液洗脱， 流速为0.5mL/ min至1mL/min， 紫外检测器于215nm和230nm检测， 选择 收集含有肌酸的流出液和含有尿酸 的流出液。 6.根据权利要求5所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 在获得 含有肌酸的流出液和含有尿酸的流出液后， 还包括将流出液挥干溶剂、 水复溶后离心取上 清液的步骤。 7.根据权利要求1 ‑4任一项所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在 于， 步骤(3)的LC ‑IRMS分析中， 质谱离子源为电子轰击离子源， 离子源电压3.0kv,灯丝电流 1.5mA。 8.根据权利要求1 ‑4任一项所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在 于， 步骤(3)的LC ‑IRMS分析中， 色谱柱采用Zorbax  SB‑Aq,柱温3 5℃至40℃。 9.根据权利要求1 ‑4任一项所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在 于， 步骤(3)的LC ‑IRMS分析中， 进样体积为10 μL至20 μL； 流动相为0.5％至1％硫酸水溶液， 流速200 μL/min至400 μL/min,氧化泵流速 30 μL/min至40 μL/mi n， 样品反应温度9 9.9℃。 10.根据权利要求1 ‑4任一项所述一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在 于， 步骤(4)中， 阳性判别的方法包括： 若尿酸的δ13C值与肌酸的δ13C值的差值大于4 ‰， 判断 为阳性； 否则， 为阴性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115356410 A 2一种基于尿酸检测阿卡 地新兴奋剂的方 法 技术领域 [0001]本发明属于医学检测领域领域， 尤其涉及 一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方 法。 背景技术 [0002]阿卡地新5 ‑aminoimidazole ‑4‑carboxamide ‑1‑β‑D‑ribofuranoside， 别名: Acadesine， AICAR， 结构如式1所示。 [0003] [0004]AICAR可以激活AMPK蛋白激酶， 增加运动耐力， 提高运动员运动能力。 世界反兴奋 剂机构(WADA)于2009年将AICAR确定为兴奋剂。 AICAR属于内源性兴奋剂， 此类兴奋剂的特 点是， 它既是 人体的内源性物质又 可以是合成药物。 [0005]对于内源性物质的检测可以采用同位素比值(IRMS)法， 其原理是药用物质和内源 性物质的碳元素同位素比(13C/12C， 以δ13C值表示， 单位： ‰)不同。 δ13C值被定义为： δ13C＝ (R样 品‑R标品)/R标品， 其中R＝13C/12C。 其阳性判定标准为： 目标物质(可以是药物原 型， 也可以是 其代谢物)δ13C值与参照物(参照物 δ13C不因服用兴奋剂而改变)δ13C值的差值大于4 ‰， 即为 阳性。 目前， 药物原型和代谢物δ13C值的测定均采用气相色谱 ‑燃烧‑同位素比值(GC ‑C‑ IRMS)法。 由于AICAR不 易气化,不 适于气相分析， 对于AICAR的检测成为难点。 发明内容 [0006]鉴于现有技术所存在的问题， 本发明提供一种基于尿酸检测阿卡地新兴奋剂的方 法， 可以用于阿卡 地新兴奋剂的检测， 具有简便准确灵敏、 重复性 好等优点。 [0007]本发明解决上述 技术问题的技 术方案如下： [0008]本发明提供一种基于 尿酸检测阿卡 地新兴奋剂的方法， 包括以下步骤： [0009](1)将尿样酶解处 理； [0010](2)HPLC分离纯化获得肌酸组分和尿酸组分； [0011](3)将肌酸组分和尿酸组分采用LC ‑IRMS分析， 获得肌酸的δ13C值和尿酸的δ13C值； [0012](4)根据尿酸的δ13C值与肌酸的δ13C值的差值进行 阳性判别。 [0013]LC‑IRMS中文名称为液相色谱 ‑同位素比质谱(LC ‑IRMS)。 [0014]采用上述技术方案的有益效果包括： 采用上述方法可以用于阿卡地新兴奋剂的检 测， 具有简便准确灵敏、 重复性 好等优点。说　明　书 1/7 页 3 CN 115356410 A 3