(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211003577.9 (22)申请日 2022.08.19 (71)申请人 广东一方制药有限公司 地址 528244 广东省佛山市南海区里 水镇 旗峰工业 开发区 (72)发明人 刘晓霞　冯涌微　李振雨　位翠杰　 段志文　叶瑞平　陈向东　孙冬梅　 沈斌斌　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 王秉丽 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 半边莲中药标准汤剂的特征图谱构建方法、 鉴别方法以及化学成分含量检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种半边莲中药标准汤剂的特 征图谱构建方法、 鉴别方法以及化学成分含量检 测方法。 相对于传统技术， 本发明具有如下有益 效果： 本发 明采用采用合适条件的高效液相色谱 法构建半边莲中药标准汤剂的特征图谱， 该特征 图谱能够全面反映半边莲中药标准汤剂的质量， 为半边莲中药标准汤剂的质量控制和质量评价 提供有效手段。 通泉草和叶下珠是常见半边莲伪 品， 基于本发明构建的特征图谱， 能够将半边莲 中药标准汤剂与其上述伪品的中药标准汤剂区 分开来。 权利要求书3页 说明书30页 附图11页 CN 115372514 A 2022.11.22 CN 115372514 A 1.一种半边莲中药标准汤剂特征图谱的构建方法， 其特征在于， 所述构建方法包括如 下步骤： 取半边莲中药标准汤剂供试品， 用提取 溶剂提取， 收集 提取液， 制备供试品溶液； 采用高效液相色谱法对所述供试品溶液进行检测， 将所得供试品色谱图导入中药色谱 指纹图谱相似度评价软件， 拟定半边 莲中药标准汤剂的特征图谱； 所述高效液相色谱法的条件 包括： 固定相为C18色谱柱； 流动相A为乙腈， 流动相B为磷酸二氢钾溶液， 所述磷酸二氢钾溶液中磷酸二氢钾的浓 度为0.02mo l/L～0.0 6mol/L； 采用梯度洗脱的方式， 梯度洗脱的程序包括： 0min～24min， 所述流动相A的体积百分比为由10％上升到14％， 所述流动相 B的体积百 分比由90％下降到86％， 24min～28min， 所述流动相A的体积百分比为由14％上升到22％， 所述流动相B的体积 百分比由86％下降到78％， 28min～35min， 所述流动相A的体积百分比保持在22％， 所述流动相B的体积百分比由 保持在78％， 35min～41min， 所述流动相A的体积百分比为由22％上升到30％， 所述流动相B的体积 百分比由78％下降到70％， 41min～53min， 所述流动相A的体积百分比为由30％上升到33％， 所述流动相B的体积 百分比由70％下降到 67％。 2.根据权利要求1所述的半边莲中药标准汤剂特征图谱的构建方法， 其特征在于， 所述 高效液相色谱法的条件 还具有如下技 术特征中的一个或者多个： (1)检测波长为3 30nm～350nm； (2)柱温为3 3℃～37℃； (3)流速为0.8mL/mi n～1.2mL/mi n。 3.根据权利要求1所述的半边莲中药标准汤剂特征图谱的构建方法， 其特征在于， 制备 所述供试品溶液的步骤具有如下技 术特征中的一个或者多个： (1)所述提取溶剂为甲醇浓度为6 5％～75％(v/v)的 甲醇溶液； (2)提取的方式为超声提取或者加热回流提取， 超声提取的条件包括： 功率为225W～ 275W， 频率 为35kHz～45kHz， 时间为15mi n～45min； (3)每1g所述半边 莲中药标准汤剂供试品对应的所述 提取溶剂的用量 为40mL～60mL。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的半边莲中药标准汤剂特征图谱的构建方法， 其特 征在于， 所述构建方法还 包括： 制备对照品溶液， 所述对照品溶液中的对照品包含木犀草素7 ‑二葡萄糖苷酸、 地奥司 明和蒙花苷中的一种或者多种； 参照权利要求1或者2中所述的高效液相色谱法对所述对照品溶液进行检测， 将所得对 照品色谱图与所述供 试品色谱图进行比较， 对所述供 试色谱图中的共有峰进行 标识。 5.根据权利要求4所述的半边莲中药标准汤剂特征图谱的构建方法， 其特征在于， 所述 对照品溶 液的溶剂包 含甲醇和二甲基亚砜。权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115372514 A 26.根据权利要求1至3和5中任一项所述的半边莲中药标准汤剂特征图谱的构建方法， 其特征在于， 所述特征图谱含有11个特征峰， 峰1对应木犀草素7 ‑二葡萄糖苷酸， 峰10对应 地奥司明， 峰1 1对应蒙花苷。 7.根据权利要求6所述的半边莲中药标准汤剂特征图谱的构建方法， 其特征在于， 所述 构建方法还 包括联合质谱法对所述特 征图谱中的特 征峰进行高分辨 率质谱指认的步骤； 所述质谱法的条件 包括： HESI离子源参数包括： 鞘气流速为60arb～70arb， 辅助气流速为18arb～22arb， 喷雾电 压为2.2kV～2.8kV， S ‑lens电压为45V～55V， 加热温度为280℃～320℃， 毛细管温度为480 ℃～520℃； 质谱扫描参数包括： 扫描模式正、 负离子模式， 扫描范围为120m/z～1000m/z， 归一化碰 撞能量20V、 40V， 质谱图类型为峰形图。 8.一种半边 莲中药标准汤剂的鉴别方法， 其特 征在于， 所述 鉴别方法包括如下步骤： 取待测品， 用提取 溶剂提取， 收集 提取液， 制备待测品溶 液； 参照权利要求1或者2所述的高效液相色谱法对所述待测品溶液进行检测， 将所得待测 品色谱图与权利要求1至7任一项构建的特征图谱做比较， 根据比较结果鉴别所述待测品是 否为半边 莲中药标准汤剂。 9.根据权利要求8所述的半边莲中药标准汤剂的鉴别方法， 其特征在于， 制备所述待测 品溶液的步骤具有如下技 术特征中的一个或者多个： (1)所述提取溶剂为甲醇浓度为6 5％～75％(v/v)的 甲醇溶液； (2)提取的方式为超声提取或者加热回流提取， 超声提取的条件包括： 功率为225W～ 275W， 频率 为35kHz～45kHz， 时间为15mi n～45min； (3)每1g所述待测品对应的所述 提取溶剂的用量 为40mL～60mL。 10.一种半边莲中药标准汤剂中化学成分含量的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法 包括如下步骤： 分别制备待测品溶 液和对照品溶 液； 其中， 所述待测品溶液的制备步骤包括： 取半边莲中药标准汤剂待测品， 用提取溶剂提取， 收 集提取液， 制备待测品溶 液； 所述对照品溶液中的对照品包含木犀草素7 ‑二葡萄糖苷酸、 地奥司明和蒙花苷中的一 种或者多种； 采用高效液相色谱法对所述待测品溶液和所述对照品溶液进行检测， 确定所述半边莲 中药标准汤剂待测品中木犀草素7 ‑二葡萄糖苷 酸、 地奥司明和蒙花苷中的一种或者多种的 含量； 所述高效液相色谱法的条件 包括： 固定相为C18色谱柱； 流动相A为乙腈， 流动相B为磷酸二氢钾溶液， 所述磷酸二氢钾溶液中磷酸二氢钾的浓 度为0.02mo l/L～0.0 6mol/L； 采用梯度洗脱的方式， 梯度洗脱的程序包括： 0min～24min， 所述流动相A的体积百分比为由10％上升到14％， 所述流动相 B的体积百 分比由90％下降到86％，权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115372514 A 3