(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211099183.8 (22)申请日 2022.09.07 (71)申请人 云南白药集团股份有限公司 地址 650000 云南省昆明市呈贡区云南白 药街3686号 (72)发明人 陈邈　高鹰　孔祥烨　宁科功　 张秋霞　李黎仙　刘萍　李劲峰　 蔡英　伍鹏　 (74)专利代理 机构 昆明大百科专利事务所 53106 专利代理师 李云 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中氨 基酸的检测方法 (57)摘要 含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中氨 基酸的检测方法， 是将含美洲大蠊提取物的口腔 清洁护理品试样经无机盐、 涡旋、 超声辅助溶剂 萃取， 离心浓缩后， 与异硫氰酸苯酯进行柱前衍 生化反应， 用高效液相色谱仪测定试样中的氨基 酸衍生产物， 以保留时间定性， 外标法定量。 本发 明通过无机盐辅助萃取， 减少了二氧化硅团聚效 应对前处理效率的影响； 通过涡 旋、 超声、 离心浓 缩等手段， 缩短了萃取时间， 提高了萃取率； 在适 当的碱性条件下， 加速了衍生化反应进程； 通过 适当有机溶剂的反萃， 减少了PITC对色谱柱的损 伤； 通过对梯度洗脱程序的优化， 减少了口腔清 洁护理品基质的干扰且大大提高了分离效率。 本 发明方法简单易操作、 过程可控、 灵敏度高， 易于 推广。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 115326996 A 2022.11.11 CN 115326996 A 1.含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检测方法， 其特征在于， 方法 步骤如下： (1)取含美洲大蠊提取物 的口腔清洁护理品试样和萃取剂， 试样和萃取剂的质量比为 1:2～1:50， 同时加入试样质量2～40％的无机盐， 依序通过涡旋、 超声、 离心方式对试样进 行辅助萃取； 所述萃取剂为体积浓度25～100％的甲醇 ‑水溶液、 体积浓度25～100％的乙 醇‑水溶液、 体积浓度 25～100％的乙腈 ‑水溶液、 100％去离子水中的一种； 所述无机 盐为硫 酸镁、 硫酸钠、 氯化钠、 氯化钾、 碳 酸钠中的一种； (2)收集萃取后的上清液， 在5 0～100℃条件下进行浓 缩复溶； (3)向浓缩复溶溶液中加入浓缩复溶溶液质量0.2～1.0 ％的碱性乙腈溶液和浓缩复溶 溶液质量0.2～1.0％的衍生试剂异硫氰酸苯酯进 行涡旋混合， 在碱性条件 下于20～50℃反 应5～240min， 得到衍生化溶液； 所述碱性乙腈溶液是指含氢氧化钠、 氢氧化钙、 氢氧化钡、 三乙醇胺中任一种的乙腈溶 液； (4)用有机溶剂对衍生化溶液进行反萃取， 去除过量的衍生试剂异硫氰酸苯酯； 所述有 机溶剂为环己烷、 正己烷、 庚烷、 己烷、 戊烷中的一种； (5)将反萃取后的溶液离心， 弃去上层液， 取下层液， 采用高效液相色谱法， 在梯度洗脱 条件下进样检测254 nm处的峰面积， 通过保留时间定性、 外标一 点法定量。 2.根据权利要求1所述的含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检测方 法， 其特征在于， 所述高效液相色谱法的色谱条件如下： a.色谱柱： 氨基酸专用C18色谱柱或其他等效色谱柱， 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂； b.流动相A： 0.1mo l/L且pH值6.5的乙酸钠溶 液： 乙腈(v/v)＝93.0:7.0； 流动相B： 乙腈： 水(v/v)＝80.0:20.0； c.流速： 1mL/mi n； d.检测波长： 254 nm； e.柱温： 40℃； f.进样量： 5 μL； 梯度洗脱 进样过程如下： 在第0.01分钟时， 流动相A进样10 0％， 流动相B进样0； 在第11分钟时， 流动相A进样93.0％， 流动相B进样7.0％； 在第13.9分钟时， 流动相A进样8 8.0％， 流动相B进样12.0％； 在第14分钟时， 流动相A进样85.0％， 流动相B进样15.0％； 在第29分钟时， 流动相A进样6 6.0％， 流动相B进样34.0％； 在第32分钟时， 流动相A进样3 0.0％， 流动相B进样70.0％； 在第35分钟时， 流动相A进样0％， 流动相B进样10 0.0％； 在第42分钟时， 流动相A进样0％， 流动相B进样10 0.0％； 在第45分钟时， 流动相A进样10 0.0％， 流动相B进样0％； 在第60分钟时， 流动相A进样10 0.0％， 流动相B进样0％。 3.根据权利要求1或2所述的含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检 测方法， 其特征在于， 上述步骤(1)中， 所述涡旋方式的旋涡转速为200～3000rpm， 旋涡时间权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115326996 A 21～20min； 所述超声方式的超声波频率10～60Hz， 超声时间1～50min； 所述离心方式的离心 转速为500～100000rpm,离心时间1～ 20min； 辅助萃取次数为1～5次。 4.根据权利要求1或2所述的含美洲大蠊提取物的口腔清洁护理品中游离氨基酸的检 测方法， 其特征在于， 所述浓缩复溶， 是将上清液倒入蒸发皿中重复萃 取一次， 然后蒸干， 冷 却至室温， 再加入甲醇复溶。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115326996 A 3