(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221098939 2.3 (22)申请日 2022.08.17 (71)申请人 南京师范大学 地址 210023 江苏省南京市仙林大 学城文 苑路1号 (72)发明人 吕广萍　赵美娟　黄和　张盈月　 刘春尧　王慧阳　 (74)专利代理 机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 专利代理师 李娟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01)G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 多糖结构信息的表征方法以及鉴定中药真 伪或品质的方法 (57)摘要 本发明涉及中药质量控制技术领域， 公开了 一种多糖结构信息的表征方法， 以及一种鉴定中 药真伪或品质的方法。 该表征方法包括： 将多糖 样品分别进行水解处理、 衍生化处理得到衍生化 产物， 利用GC ‑MS对衍生化产物进行分析得到衍 生化产物中单糖组成及相对比例； 将多个多糖样 品分别依次进行甲基化处理、 水解处理、 还原处 理、 乙酰化处理得到甲基化的糖醇乙酰酯类产 物， 利用GC ‑MS对甲基化的糖醇乙酰酯类产物进 行分析， 得到不同来源多糖中糖苷键类型及每种 糖苷键的相对比例； 对单糖组成及相对比例和/ 或糖苷键类型及相对比例比例， 进行统计学分 析， 对多糖样品进行表征和区分。 该表征方法能 够多元化表征多糖的结构信息， 实现对中药真伪 及品质的快速、 准确鉴别。 权利要求书2页 说明书16页 附图4页 CN 115406985 A 2022.11.29 CN 115406985 A 1.一种多糖结构信息的表征 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将多个多糖样品分别进行水解处理I得到水解产物I， 将所述水解产物I进行衍生化 处理得到衍生化产 物， 利用GC ‑MS对所述衍生化产 物进行分析， 得到每个所述多糖样品对应 的所述衍生化产物中单糖组成及每种单糖的相对比例； (2)将多个所述多糖样品分别依次进行甲基化处理、 水解处理II、 还原处理、 乙酰化处 理得到甲基化的糖醇乙酰酯类产物， 利用GC ‑MS对所述甲基化的糖醇乙酰酯类产物进行分 析， 得到每个所述多糖样品对应的所述甲基化的糖醇乙酰酯产物中糖苷键类型及每种糖苷 键的相对比例； (3)将步骤(1)得到的单糖组成及每种单糖的相对比例和/或步骤(2)得到的糖苷键类 型及每种糖苷键的相对比例， 进行统计学分析， 对多个所述多糖样品进行表征和区分。 2.根据权利要求1所述的表征方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述水解处理I的过程包 括： 在微波辅助I作用下， 将所述多糖样品与酸液I混合进行 水解反应I； 优选地， 所述微波辅助I的功率为300 ‑600W， 所述水解反应I的条件包括： 温度为75 ‑95 ℃， 时间为2 ‑5min； 优选地， 所述酸液I选自盐酸溶液、 硫酸溶液、 硝酸溶液和三氟乙酸溶液中的一种， 更优 选为三氟乙酸溶 液； 优选地， 相对于1mg所述多糖样品， 所述 酸液I中酸的摩尔量 为0.1‑1mmol。 3.根据权利要求1所述的表征方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述衍生化处理的过程包 括： 将所述水解产 物I分别进 行醛醣衍生化和酮醣衍生化， 得到醛醣衍生化产 物和酮醣衍生 化产物； 优选地， 所述醛醣衍生化的过程包括： 将所述水解产物I与吡啶、 盐酸羟胺混合后进行 反应I， 再与乙酸酐混合进行反应I I； 优选地， 所述反应I的条件包括： 温度为80 ‑100℃， 时间为25 ‑35min， 所述反应II的条件 包括： 温度为80 ‑100℃， 时间为25 ‑35min； 优选地， 所述酮醣衍生化的过程包括： 将所述水解产物I与吡啶、 甲氧基胺盐酸盐混合 后进行反应I II， 再与乙酸酐混合进行反应IV； 优选地， 所述反应III 的条件包括： 温度为60 ‑80℃， 时间为50 ‑70min， 所述反应IV的条 件包括： 温度为 40‑50℃， 时间为5 0‑70min。 4.根据权利要求1至3 中任意一项所述的表征方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述甲基化 处理的过程包括： 在反应溶剂I中， 将所述多糖样品与碱混合进行超声后， 与碘甲烷混合进 行甲基化反应得到甲基化反应液， 将所述甲基化反应液进行超滤离心得到甲基化产物； 优选地， 所述反应溶剂I 为二甲基亚砜， 所述碱为氢 氧化钠和/或氢 氧化钾； 优选地， 所述超声的时间为8 ‑12min， 所述甲基化反应的次数为2 ‑4次， 每次所述甲基化 反应的条件 包括： 微波辅助的功率 为300‑600W， 时间为1 ‑3min； 优选地， 相对于1mg所述多糖样品， 所述碱的用量为2 ‑7mg， 所述碘甲烷的用量为10 ‑34 μ L。 5.根据权利要求4所述的表征方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述水解处理II的过程包 括： 在微波辅助II作用下， 将所述甲基化产物与酸液II混合进行水解反应II得到水解产物 II；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115406985 A 2优选地， 所述微波辅助II的功率为300 ‑600W， 所述水解反应II的条件包括： 温度为75 ‑ 95℃， 时间为2 ‑5min； 优选地， 所述酸液II选自盐酸溶液、 硫酸溶液、 硝酸溶液和三氟乙酸溶液中的一种， 更 优选为三氟乙酸溶 液。 6.根据权利要求5所述的表征方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述还原处理的过程包括： 将所述水解产物I I与硼氢化钠混合进行还原反应得到还原产物； 优选地， 所述还原反应的条件 包括： 温度为10 ‑40℃， 时间为1 ‑3h； 优选地， 所述乙酰化处理的过程包括： 将所述还原产物与吡啶 ‑乙酸酐溶液混合后进行 乙酰化反应； 优选地， 所述乙酰 化反应的条件 包括： 温度为90 ‑110℃， 时间为20 ‑40min； 优选地， 相对于1mg所述多糖样品， 所述硼氢化钠的用量为4 ‑7mg； 所述吡啶与乙酸酐的 体积比为1:0.8 ‑1.2。 7.根据权利要求1至3中任意一项所述的表征方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 所述统计 学分析选自主成分 分析、 因子分析、 聚类分析和热图分析中的至少一种。 8.根据权利要求1至7中任意 一项所述的表征 方法在鉴定中药真伪或品质中的应用。 9.一种鉴定中药真伪或品质的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 将多个中药样品中分离得到的多糖作为多糖样品， 采用权利要求1至7中任意一项所述 的表征方法进行表征和区分。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述中药样品中分离得到多糖的过程包 括： S1、 将所述中药样品与提取溶剂I混合进行提取I得到提取沉淀， 将所述提取沉淀与提 取溶剂II混合进行提取I I得到提取 液； S2、 将所述 提取液进行醇沉得到沉淀， 将所述 沉淀进行干燥； 优选地， 所述 提取溶剂I为乙醇‑水溶液， 所述提取溶剂II为去离子水； 优选地， 所述中药样品与所述提取溶剂I的重量体积比为1:15 ‑25， 所述提取沉淀与所 述提取溶剂II的重量体积比为1:10 ‑35； 优选地， 所述提取I的条件包括： 温度为95 ‑105℃， 时间为1 ‑3h； 所述提取II的条件包 括： 温度为80 ‑130℃， 时间为1 ‑3h。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115406985 A 3