(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210911904.4 (22)申请日 2022.07.29 (71)申请人 广东一方制药有限公司 地址 528244 广东省佛山市南海区里 水镇 旗峰工业 开发区 (72)发明人 曾昭君　鲁云　陈巧华　崔婷　 邓怡芳　文珊　林嘉明　刘燎原　 孙冬梅　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 杜寒宇 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 旋覆花-赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱 的构建方法、 鉴别方法和含量的测定方法 (57)摘要 本发明涉及药物分析的技术领域， 特别涉及 旋覆花‑赭石药对中药配方颗 粒的指纹图谱的构 建方法、 鉴别方法和含量的测定方法。 所述构建 方法包括以下步骤： 制备供试品溶液； 对所述供 试品溶液进行超高效液相色谱测定， 将测定所得 色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统， 构建旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图 谱； 所述超高效液相色谱的色谱条件包括： 流动 相包括流动性A和流动相B， 所述流动相A包括乙 腈， 所述流动相B包括磷酸的水溶液， 洗脱方式为 梯度洗脱。 所构建的指纹图谱主要特征峰分离度 好， 专属性强， 有助于为旋覆花 ‑赭石药对配方颗 粒国家标准或省级标准研究奠定 基础。 权利要求书2页 说明书17页 附图3页 CN 115372504 A 2022.11.22 CN 115372504 A 1.一种旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： 混合旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒和提取 溶剂， 进行提取处 理， 制备供试品溶液； 对所述供试品溶液进行超高效液相色谱测定， 将测定所得色谱图导入中药色谱指纹图 谱相似度评价系统， 构建旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱； 所述超高效液相色谱的色谱条件 包括： 流动相包括流动性A和流动相B， 所述流动相A包括乙腈， 所述流动相B包括磷酸的水溶 液， 洗脱方式为梯度洗脱； 所述梯度洗脱的程序包括： 0～6min， 所述流动相A的体积分数由8％升高至13％， 所述流动相B的体积分数由92％ 降低至87％； 6min～8min， 所述流动相A的体积分数由13％升高至16％， 所述流动相B的体积分数由 87％降低至84％； 8min～10min， 所述流动相A的体积分数保持16％， 所述 流动相B的体积分数保持84％； 10min～12min， 所述流动相A的体积分数由16％升高至22％， 所述流动相B的体积分数 由84％降低至78％； 12min～16min， 所述流动相A的体积分数保持2 2％， 所述 流动相B的体积分数保持78％； 16min～21min， 所述流动相A的体积分数由22％升高至33％， 所述流动相B的体积分数 由78％降低至 67％； 21min～25min， 所述流动相A的体积分数保持3 3％， 所述 流动相B的体积分数保持67％。 2.根据权利要求1所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 所述磷酸的水 溶液中， 所述磷酸的体积分数为0.0 5％～0.15％。 3.根据权利要求1所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 所述超高效液相色谱的色谱条件还包括： 固定相为以十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂的色谱柱。 4.根据权利要求1所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 所述超高效液相色谱的色谱条件 还包括： 流速为每分钟0.2 9mL～0.31mL。 5.根据权利要求1所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 所述超高效液相色谱的色谱条件 还包括柱温为3 3℃～37℃。 6.根据权利要求1所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 所述超高效液相色谱的色谱条件还包括： 0min～17min， 波长为320nm～335nm， 17min～25min， 波长为20 5nm～215nm。 7.根据权利要求1～6任一项所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建 方法， 其特 征在于， 所述 提取溶剂为甲醇的水 溶液； 和/或 所述提取溶剂的用量满足： 每0.2g所述旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒对应20mL～ 30mL所述提取溶剂； 和/或 所述提取处理为超声处 理。 8.根据权利要求7所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 所述甲醇的水 溶液中， 所述甲醇的体积分数为70％～ 90％； 和/或权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115372504 A 2所述超声处 理的时间为20mi n～40min。 9.一种旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的鉴别方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 混合待测旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒样品和提取溶剂， 进行提取处理， 制备待测旋 覆花‑赭石药对中药配方颗粒样品溶 液； 按权利要求1～8任一项所述的超高效液相色谱的色谱条件， 对所述待测旋覆花 ‑赭石 药对中药配方颗粒样品溶液进 行超高效液相色谱测定， 将所得色谱图与权利要求1～8任一 项所述的构建方法所构建的指纹图谱进行比对， 根据比对结果进行鉴别。 10.根据权利要求9所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的鉴别方法， 其特征在于， 所 述提取溶剂为甲醇的水 溶液； 和/或 所述提取溶剂的用量满足： 每0.2g所述待测旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒样品对应 20mL～30mL所述提取溶剂； 和/或 所述提取处理为超声处 理。 11.根据权利要求10所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒的鉴别方法， 其特征在于， 所述甲醇的水 溶液中， 所述甲醇的体积分数为70％～ 90％； 和/或 所述超声处 理的时间为20mi n～40min。 12.一种旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒中指标成分的含量的测定方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 提供新绿原酸、 绿原酸、 隐绿原酸、 咖啡酸、 异槲皮苷、 异绿原酸B、 1,5 ‑二咖啡酰奎宁 酸、 异绿原酸C、 旋覆花素和大花旋覆花素的混合对照品溶 液； 混合待测旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒样品和提取溶剂， 进行提取处理， 制备待测旋 覆花‑赭石药对中药配方颗粒样品溶 液； 按权利要求1～8任一项所述的超高效液相色谱的色谱条件， 对所述混合对照品溶液和 待测旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒样品溶液进行超高效液相色谱测定， 根据所得色谱图 计算指标成分的含量。 13.根据权利要求12所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒中指标成分的含量的测定 方法， 其特 征在于， 所述混合对照品溶 液的溶剂为甲醇。 14.根据权利要求12所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒中指标成分的含量的测定 方法， 其特 征在于， 所述 提取溶剂为甲醇的水 溶液； 和/或 所述提取溶剂的用量满足： 每0.2g所述待测旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒样品对应 20mL～30mL所述提取溶剂； 和/或 所述提取处理为超声处 理。 15.根据权利要求14所述的旋覆花 ‑赭石药对中药配方颗粒中指标成分的含量的测定 方法， 其特 征在于， 所述甲醇的水 溶液中， 所述甲醇的体积分数为70％～ 90％； 和/或 所述超声处 理的时间为20mi n～40min。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115372504 A 3